盤龍參組織培養(yǎng)繁殖的方法技術

本發(fā)明專利技術公開了盤龍參組織培養(yǎng)繁殖的方法，屬于盤龍參的人工栽培領域。本發(fā)明專利技術方法外殖體滅菌效果好、成活率高，叢生芽增值倍數高，組織培養(yǎng)苗生根率高，移栽成活率高。方法：一、以盤龍參當年生地下隱芽為外植體，對外植體進行消毒處理，無菌水沖洗3～5遍；二、初代誘導培養(yǎng)，三、繼代增殖；四、將繼代增殖培養(yǎng)過程中獲得的叢芽分割成單株，然后生根培養(yǎng)；五、將培養(yǎng)物不開口移到自然光照下鍛練5～6天，然后開口練苗1～2天；然后移栽到移栽基質中，幼苗管理至成苗；即完成了盤龍參組織培養(yǎng)繁殖。本方法簡捷，經濟實用，可操作性強，達到了快繁的目標，可用于蘭科植物盤龍參的工廠化育苗。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于盤龍參的人工栽培領域；具體涉及。
技術介紹
盤龍參，蘭科，盤龍參屬，學名綬草(Spiranthessinensis.(Pers.)Ames.0rch.),又名龍抱柱，盤龍草。陸生蘭，高15-20厘米，莖直立，基部簇生數條粗厚肉質根。生于濕草地、山坡林下或溝邊草叢中。在黑龍江省大興安嶺地區(qū)呼中、塔河、加格達奇有野生分布。盤龍參根或全草入藥，主要含香豆精甙和生物堿。性甘、淡、平，滋陰益氣，涼血解毒，澀精，強壯。盤龍參自然種群很少，目前沒有發(fā)現大面積的盤龍參群落，其種子在自然條件下萌發(fā)率低，給人工栽培帶來困難，加之盤龍參植株小、天然數量少，有效成分難以富集，阻礙藥用價值開發(fā)。目前關于盤龍參組織培養(yǎng)的報道很少。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種以隱芽作為外植體進行人工栽培盤龍參的方法。本專利技術方法外殖體滅菌效果好、成活率高，叢生芽增值倍數高，組織培養(yǎng)苗生根率高，移栽成活率聞。本專利技術是通過下述技術方案實現專利技術目的的。盤龍參的組織培養(yǎng)繁殖方法是按下述步驟進行的:步驟一、以盤龍參當年生地下隱芽為外植體，對外植體進行消毒處理，無菌水沖洗3~5遍；步驟二、將外植體接種于初代誘導培養(yǎng)基中，給予2000~2500LX的光照，光照時間為12小時/天，培養(yǎng)溫度22~24°C，培養(yǎng)20~25天；步驟三、然后接種于繼代增殖培養(yǎng)基上，在24°C~26°C條件下繼代繁殖，給予2500~3000LX的光照，光照時間為16小時/天，繼代周期為40~50天；步驟四、將繼代增殖培養(yǎng)過程中獲得的叢芽分割成單株，然后轉移至生根培養(yǎng)基中，給予1500~2000LX的光照，光照時間為10小時/天，培養(yǎng)溫度20-~25°C，培養(yǎng)20~25天;步驟五、將培養(yǎng)物不開口移到自然光照下鍛練5~6天，然后開口練苗I~2天；然后移栽到移栽基質中，幼苗管理至成苗；即完成了盤龍參組織培養(yǎng)繁殖。步驟一所述的對外植體進行消毒處理是按下述進行的:用自來水沖洗5~10分鐘，用75% (體積)酒精浸泡I~2分鐘，再用0.1 % (質量)氯化汞浸泡4分鐘。步驟二所述初代誘導培養(yǎng)基:改良MS+IAA1.5mg/L+6_BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉 6.8g/L。 步驟三所述繼代增殖培養(yǎng)基:MS+BAP2.0mg/L+GA30.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6.8g/L。步驟四所述生根培養(yǎng)基:MS+IBA0.5mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉6.8g/L+活性炭5g/L0步驟五中移栽后5-7天內保證85%~90%的空氣濕度。步驟五中用800~1000倍多菌靈或托布津噴灑3次，在移栽當天移栽完噴灑I次，之后每間隔7~10天的上午進行后2次噴灑。步驟五幼苗管理的生長溫度是18~20°C。步驟五中所述移栽基質是質量比1:1的腐殖質和苔蘚混合物。本專利技術方法外殖體滅菌效果好、成活率高(在72.7%以上)，叢生芽增值倍數高(最高增殖倍數5.8倍)，組織培養(yǎng)苗生根率高(80%以上)，移栽成活率高(85%以上)。本專利技術中盤龍參的組織培養(yǎng)繁殖方法可采用下述操作替換步驟三:培養(yǎng)溫度24~26°C，先給予2500~3000LX的光 照，接種繼代增殖培養(yǎng)基的第20天用光強為1000~1500LX的紅光照射10~15天，繼續(xù)給予2500~3000LX的光照，光照時間均為16小時/天，繼代周期為40~50天，提高了叢生芽增值倍數(最高增殖倍數10倍)。本專利技術方法簡捷，經濟實用，可操作性強，達到了快繁的目標，可用于蘭科植物盤龍參的工廠化育苗。盤龍參人工組織培養(yǎng)技術的研究成功，可為黑龍江省大興安嶺地區(qū)野生資源的開發(fā)利用和中藥質量標準化提供技術保障?！靖綀D說明】圖1是盤龍參外殖體-地下隱芽剛剛接種照片；圖2是盤龍參外殖體-地下隱芽接種15天后膨大的照片；圖3是盤龍參外殖體-地下隱芽接種25天后的照片；圖4是盤龍參叢生芽增殖的照片；圖5是盤龍參移栽成活后盤龍參根的照片?！揪唧w實施方式】【具體實施方式】一:本實施方式中是按下述步驟進行的:步驟一、以盤龍參當年生地下隱芽為外植體，用自來水沖洗5分鐘，用75% (體積)酒精浸泡I分鐘，再用0.1 % (質量)氯化汞浸泡4分鐘，無菌水沖洗3-5遍；步驟二、將外植體接種于初代誘導培養(yǎng)基中(見圖1)，所述初代誘導培養(yǎng)基:改良MS+IAA1.5mg/L+6-BA0.5mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 6.8g/L，給予 2000LX 的光照，光照時間為12小時/天，培養(yǎng)溫度22~24°C，培養(yǎng)20~25天；接種15天后膨大的照片見圖2，接種25天的照片見圖3步驟三、然后接種于繼代增殖培養(yǎng)基上，所述繼代增殖培養(yǎng)基:MS+BAP2.0mg/L+GA30.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6.8g/L，給予2500LX的光照，光照時間為16小時/天，培養(yǎng)溫度25°C，繼代周期為50天，叢生芽增殖的照片見圖4 ；步驟四、將繼代增殖培養(yǎng)過程中獲得的叢芽分割成單株(每一單株保證帶有根原基)，然后轉移至生根培養(yǎng)基中，所述生根培養(yǎng)基:MS+IBA0.5mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂粉6.8g/L+活性炭5g/L，給予1500LX的光照，光照時間為10小時/天，培養(yǎng)溫度20°C，培養(yǎng)20天;步驟五、將培養(yǎng)物不開口移到自然光照下鍛練5天，然后開口練苗2天；然后移栽到移栽基質中(盤龍參移栽成活后參根見圖5)，幼苗管理至成苗；即完成了盤龍參組織培養(yǎng)繁殖。步驟五中移栽后7天內保證85%空氣濕度。步驟五中用800倍多菌靈移栽當天移栽完噴灑I次，間隔7天的上午噴灑一次，再間隔7天的上午噴灑I次。步驟五幼苗管理的生長溫度是18°C。步驟五中所述移栽基質是質量比1:1的腐殖質和苔蘚混合物。采用下述試驗驗證本實施方式的效果:一、不同消毒劑及消毒時間對比試驗，結果參見表1表1:外殖體消毒劑、消毒時間對比 -本文檔來自技高網...

【技術保護點】
盤龍參的組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于盤龍參組織培養(yǎng)繁殖的方法是按下述步驟進行的：?步驟一、以盤龍參當年生地下隱芽為外植體，對外植體進行消毒處理，無菌水沖洗3～5遍；?步驟二、將外植體接種于初代誘導培養(yǎng)基中，給予2000～2500LX的光照，光照時間為12小時/天，培養(yǎng)溫度22～24℃，培養(yǎng)20～25天；?步驟三、然后接種于繼代增殖培養(yǎng)基上，在24℃～26℃條件下繼代繁殖，給予2500～3000LX的光照，光照時間為16小時/天，繼代周期為40～50天；?步驟四、將繼代增殖培養(yǎng)過程中獲得的叢芽分割成單株，然后轉移至生根培養(yǎng)基中，給予1500～2000LX的光照，光照時間為10小時/天，培養(yǎng)溫度20?～25℃，培養(yǎng)20～25天；?步驟五、將培養(yǎng)物不開口移到自然光照下鍛練5～6天，然后開口練苗1～2天；然后移栽到移栽基質中，幼苗管理至成苗；即完成了盤龍參組織培養(yǎng)繁殖。

【技術特征摘要】
1.盤龍參的組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于盤龍參組織培養(yǎng)繁殖的方法是按下述步驟進行的: 步驟一、以盤龍參當年生地下隱芽為外植體，對外植體進行消毒處理，無菌水沖洗3~5遍； 步驟二、將外植體接種于初代誘導培養(yǎng)基中，給予2000~2500LX的光照，光照時間為12小時/天，培養(yǎng)溫度22~24°C，培養(yǎng)20~25天； 步驟三、然后接種于繼代增殖培養(yǎng)基上，在24°C~26°C條件下繼代繁殖，給予2500~3000LX的光照，光照時間為16小時/天，繼代周期為40~50天； 步驟四、將繼代增殖培養(yǎng)過程中獲得的叢芽分割成單株，然后轉移至生根培養(yǎng)基中，給予1500~2000LX的光照，光照時間為10小時/天，培養(yǎng)溫度20-~25°C，培養(yǎng)20~25天; 步驟五、將培養(yǎng)物不開口移到自然光照下鍛練5~6天，然后開口練苗I~2天；然后移栽到移栽基質中，幼苗管理至成苗；即完成了盤龍參組織培養(yǎng)繁殖。2.根據權利要求1所述的盤龍參組織培養(yǎng)繁殖的方法，其特征在于步驟一所述的對外植體進行消毒處理是按下述進行的:用自來水沖洗5~10分鐘，用75% (體積)酒精浸泡I~2分鐘，再用0.1 % (質量)氯化汞浸泡4分鐘。3.根據權利要求2所述的盤龍參組織培養(yǎng)繁殖的方法，其特征在于步驟二所述初代誘導培養(yǎng)基:改良 MS+IAA1 .5mg/L+6-BA0.5mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂粉 6.8g/L。4.根據權利要...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：金鳳新，劉德文，齊會娟，湛鑫琳，金嶼淞，呂文博，萬群芳，陳冰，
申請(專利權)人：大興安嶺林業(yè)集團公司農業(yè)林業(yè)科學研究院，
類型：發(fā)明
國別省市：黑龍江;23