甲胎蛋白自身抗體單獨或與甲胎蛋白聯合作為腫瘤診斷、療效評估和復發監控標志物的應用制造技術

本發明專利技術公開了甲胎蛋白(AFP)自身抗體單獨或與AFP聯合作為腫瘤診斷、療效評估和復發監控標志物的應用。研究發現，在用于肝癌、胰腺癌、肺癌等腫瘤的診斷和預示、療效評估及復發監控時，單獨檢測血清或血漿AFP自身抗體的準確度、靈敏度和特異性較單獨檢測血清或血漿AFP高或與其基本相當，而聯合檢測血清或血漿AFP自身抗體與AFP的準確度、靈敏度和特異性高于上述二者單獨檢測。此外，本發明專利技術還提供了一種基于磁微粒分離酶聯免疫檢測技術的AFP自身抗體檢測試劑盒以及AFP與AFP自身抗體聯合檢測試劑盒，具有檢測準確、靈敏、特異，操作簡便等優點。

【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術公開了甲胎蛋白(AFP)自身抗體單獨或與AFP聯合作為腫瘤診斷、療效評估和復發監控標志物的應用。研究發現，在用于肝癌、胰腺癌、肺癌等腫瘤的診斷和預示、療效評估及復發監控時，單獨檢測血清或血漿AFP自身抗體的準確度、靈敏度和特異性較單獨檢測血清或血漿AFP高或與其基本相當，而聯合檢測血清或血漿AFP自身抗體與AFP的準確度、靈敏度和特異性高于上述二者單獨檢測。此外，本專利技術還提供了一種基于磁微粒分離酶聯免疫檢測技術的AFP自身抗體檢測試劑盒以及AFP與AFP自身抗體聯合檢測試劑盒，具有檢測準確、靈敏、特異，操作簡便等優點。【專利說明】甲胎蛋白自身抗體單獨或與甲胎蛋白聯合作為腫瘤診斷、療效評估和復發監控標志物的應用
本專利技術屬于醫學
，涉及甲胎蛋白(AFP)自身抗體在醫學領域中的新應用。
技術介紹
肝癌是死亡率僅次于胃癌、食道癌的第三大常見惡性腫瘤。相對于高死亡率，早期肝癌的發現比例卻非常低，八成以上一經發現就已是晚期，其生存期大多只剩半年。因此，如何更早發現、及時干預，如何實現療效評估和監測，以及如何對術后患者進行實時準確的復發監控等是肝癌防治中亟待解決的問題。而靈敏度高、特異性強的肝癌診斷試劑的研制是提高肝癌早期檢出率、改善患者預后的關鍵之一。過去一直認為AFP是診斷原發性肝癌的特異性標志物，具有確立診斷、早期診斷、鑒別診斷的作用。近年來大量臨床卻發現，如果將cutoff值定為20 μ g/L，以AFP診斷肝癌的陽性率僅80%左右，在腸胃管腫瘤如胰腺癌、肺癌以及一些肝的良性病變如肝炎、肝硬化中也會出現不同程度的AFP增高現象，比如約有15-18%的慢性肝炎和11-47%的肝硬化患者其血清AFP在20-200 μ g/L水平。因此，以AFP診斷肝癌的特異性尚不理想。而提高cutoff值雖然可以提高診斷的特異性，但診斷靈敏度卻會大幅下降。自身抗體是指針對自身組織、器官、細胞及細胞成分的抗體。人體的生長、發育和生存有完整的自身免疫耐受機制的維持，一旦自身耐受的完整性遭到破壞，則機體視自身組織、器官、細胞或細胞成分為“異物”而發生自身免疫反應，產生自身抗體。大量研究表明，腫瘤本身能誘導機體免疫反應，產生抗腫瘤相關抗原的自身抗體，在腫瘤抗原表達很低的時候也能夠檢測到。因此，檢測與腫瘤抗原相關的自身抗體，有望及時地發現腫瘤。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術的目的之一在于考察AFP自身抗體單獨用于肝癌、胰腺癌、肺癌等腫瘤的診斷、療效評估和復發監控的可能性，目的之二在于考察AFP與AFP自身抗體聯合用于肝癌、胰腺癌、肺癌等腫瘤的診斷、療效評估和復發監控的可能性，以達到準確、靈敏、特異的技術效果。經研究，本專利技術提供如下技術方案:1.甲胎蛋白自身抗體單獨作為腫瘤診斷、療效評估和復發監控標志物的應用，所述腫瘤為肝癌、肺癌和胰腺癌中的任一種。2.甲胎蛋白自身抗體檢測試劑盒，包括磁分離試劑、生物素標記反應試劑、酶反應試劑和底物溶液；所述磁分離試劑為甲胎蛋白抗原III偶聯磁性納米微球，所述甲胎蛋白抗原III的氨基酸序列如SEQ ID N0.3所示；所述生物素標記反應試劑為生物素標記甲胎蛋白抗原I或II，所述甲胎蛋白抗原I的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示，甲胎蛋白抗原II的氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示；所述酶反應試劑為酶標記親和素；所述底物溶液為酶促化學發光底物溶液。進一步，所述甲胎蛋白自身抗體檢測試劑盒還包括反應增強劑、樣本稀釋液和清洗濃縮液；所述反應增強劑為含有4.23g/L NaCU0.2mL/L Proclin-300和8.16g/L甲基異丙基酮的pH7.2-7.4的IOmM Tris-HCl緩沖液；所述樣本稀釋液為含有9g/L NaCU0.5mL/LProclin-300和50g/L BSA的pH6.8-7.2的水溶液；所述清洗濃縮液為含有42.8g/L NaCl、2mL/L Proclin-300 和 10mL/L Tween-20 的 ρΗ7.2-7.4 的 IOmM PBS 緩沖液。進一步，所述甲胎蛋白自身抗體檢測試劑盒還包括標準品和質控品；所述標準品為濃度梯度分別為0、5、25、125、500、1000pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的單克隆抗體溶液；所述質控品為5pg/mL或125pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的單克隆抗體溶液。3.甲胎蛋白與甲胎蛋白自身抗體聯合作為腫瘤診斷、療效評估和復發監控標志物的應用，所述腫瘤為肝癌、肺癌和胰腺癌中的任一種。4.甲胎蛋白與甲胎蛋白自身抗體聯合檢測試劑盒，包括磁分離試劑A和B、生物素標記反應試劑A和B、酶反應試劑和底物溶液；所述磁分離試劑A為甲胎蛋白抗原III偶聯磁性納米微球，所述甲胎蛋白抗原III的氨基酸序列如SEQ ID N0.3所示；所述磁分離試劑B為抗甲胎蛋白抗原III的單克隆抗體偶聯磁性納米微球；所述生物素標記反應試劑A為生物素標記甲胎蛋白抗原I或II，所述甲胎蛋白抗原I的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示，甲胎蛋白抗原II的氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示；所述生物素標記反應試劑B為生物素標記抗甲胎蛋白抗原I或II的單克隆抗體；所述酶反應試劑為酶標記親和素；所述底物溶液為酶促化學發光底物溶液。進一步，所述甲胎蛋白與甲胎蛋白自身抗體聯合檢測試劑盒還包括反應增強劑、樣本稀釋液和清洗濃縮液；所述反應增強劑為含有4.23g/L NaCU0.2mL/L Pix)Clin-300和8.16g/L甲基異丙基酮的pH7.2-7.4的IOmM Tris-HCl緩沖液；所述樣本稀釋液為含有9g/L NaCU0.5mL/L Proclin-300和50g/L BSA的pH6.8-7.2的水溶液；所述清洗濃縮液為含有 42.8g/L NaCl、2mL/L Proclin-300 和 10mL/L Tween-20 的 ρΗ7.2-7.4 的 IOmM PBS 緩沖液。進一步，所述甲胎蛋白與甲胎蛋白自身抗體聯合檢測試劑盒還包括標準品A和B以及質控品A和B ;所述標準品A為濃度梯度分別為0、5、25、125、500、1000pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的單克隆抗體溶液；所述標準品B為濃度梯度分別為0、5、25、125、500、1000pg/mL的甲胎蛋白抗原III溶液；所述質控品A為5pg/mL或125pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的單克隆抗體溶液;所述質控品B為5pg/mL或125pg/mL的甲胎蛋白抗原III溶液。其中，磁分離試劑A、生物素標記反應試劑A、標準品A和質控品A配套用于AFP自身抗體的檢測；磁分離試劑B、生物素標記反應試劑B、標準品B和質控品B配套用于AFP的檢測。本專利技術的有益效果在于:本專利技術公開了 AFP自身抗體單獨或與AFP聯合作為腫瘤診斷、療效評估和復發監控標志物的應用。研究發現，在用于肝癌、胰腺癌、肺癌等腫瘤的診斷和預示、療效評估及復發監控時，單獨檢測血清或血漿AFP自身抗體的準確度、靈敏度和特異性較單獨檢測血清或血漿AFP高或與其基本相當，而聯合檢測血清或血漿AFP自身抗體與AFP的準確度、靈敏度和特異性高于上述二者單獨檢測。此外，本專利技術還提供了一種基于磁微粒分離酶聯免疫檢測技術的AF本文檔來自技高網...

【技術保護點】
甲胎蛋白自身抗體單獨作為腫瘤診斷、療效評估和復發監控標志物的應用，所述腫瘤為肝癌、肺癌和胰腺癌中的任一種。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：王弢，樂飚，徐駿，渠香云，張國洲，盛穩穩，何林富，
申請(專利權)人：上海度微醫學技術有限公司，
類型：發明
國別省市：上海;31