一種冬蟲夏草與蛹蟲草原生質(zhì)體的融合方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種冬蟲夏草和蛹蟲草原生質(zhì)體的融合方法，其特征是將冬蟲夏草和蛹蟲草菌絲細胞酶解制備原生質(zhì)體，以冬蟲夏草原生質(zhì)體熱滅活、以蛹蟲草原生質(zhì)體紫外滅活作為標記，采用PEG介導的化學融合方法，將冬蟲夏草和蛹蟲草原生質(zhì)體融合，并通過菌落形態(tài)、頡頏試驗、RAPD（隨機擴增片段多態(tài)性）綜合驗證獲得融合株。本發(fā)明專利技術(shù)能有效地將冬蟲夏草和蛹蟲草原生質(zhì)體融合獲得可為冬蟲夏草的人工替代品的新菌株,為原生質(zhì)體融合選育目的菌株提供了一種有效方法。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

【技術(shù)保護點】
一種冬蟲夏草和蛹蟲草原生質(zhì)體的融合方法，其特征在于將冬蟲夏草和蛹蟲草的菌絲體經(jīng)酶解制備純化后的原生質(zhì)體，以冬蟲夏草原生質(zhì)體熱滅活、以蛹蟲草原生質(zhì)體紫外滅活作為標記，采用PEG介導的化學融合方法，將冬蟲夏草和蛹蟲草原生質(zhì)體融合，并通過菌落形態(tài)、頡頏試驗、RAPD（隨機擴增片段多態(tài)性）綜合驗證得融合株；所述的酶解液是冬蟲夏草菌絲體酶解液：以0.6mol/L?KCL為滲透壓穩(wěn)定劑，配制1ml?2%?溶壁酶（質(zhì)量體積比）與1.00%蝸牛酶為混合酶解液；蛹蟲草的菌絲體酶解液：以0.6mol/L?蔗糖為滲透壓穩(wěn)定劑，配制1ml?2.00?%溶壁酶與1.0%纖維素酶為混合酶解液；所述冬蟲夏草和蛹蟲草原生質(zhì)體融合：分別將純化后冬蟲夏草和蛹蟲草原生質(zhì)體懸浮于0.6mol/L?KCl滲透壓穩(wěn)定劑中，調(diào)節(jié)濃度至105個/ml，按照原生質(zhì)體懸液體積比1:1混合，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘棄上清，0.6mol/L?KCl滲透壓穩(wěn)定劑重懸沉淀后逐滴加入等體積30%（質(zhì)量體積比）PEG6000與50?mmol/L?Ca2+混合溶液，35℃水浴融合20分鐘。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：郭成金，劉西周，
申請(專利權(quán))人：天津師范大學，
類型：發(fā)明
國別省市：