一種反硝化細菌篩選鑒定試劑盒及反銷化細菌篩選鑒定方法，試劑盒包括反硝化鑒定預制管；菌株富集管；菌種保藏液；篩選鑒定方法是將待檢測菌株經菌株富集管富集后接種到反硝化鑒定預制管培養，同時用菌株保藏液將富集菌液保存；反硝化鑒定管經靜止培養后，根據培養基顏色變化和產氣情況判斷菌種反硝化能力。本發明專利技術的優點是實現反硝化細菌便捷、定量的鑒定效果，實現菌株培養、鑒定、保藏一站式操作。
【技術實現步驟摘要】
:本專利技術屬于一種細菌篩選鑒定方法及試劑盒，特別涉及一種用于污水處理的反硝化細菌篩選鑒定方法及試劑盒。
技術介紹
:氨氮是引起水體污染的重要物質之一。目前城市污水中含有大量的氨氮，若直接排放到自然環境中會造成嚴重的環境污染，導致河流、湖泊的富營養化，使水體自凈能力減弱。生物脫氮是目前廢水脫氮中最經濟有效的方法之一，而污水生物脫氮包括硝化階段和反硝化階段。其中硝化階段包括兩個階段:將NH4+-N氧化為NO2--N的氨氧化菌；將NO2--N氧化為Ν03_-Ν的亞硝酸鹽氧化菌。反硝化階段是在反硝化細菌的作用下，以硝酸鹽作為最終電子受體而進行的無氧呼吸過程，結果使硝酸鹽逐漸還原為NO3' NO2' NO、N2O,最終變為N2從而將含氮物質從污水處理系統中排出。反硝化過程是整個脫氮反應的關鍵步驟，對于控制水體富營養化，處理污水和凈化水域有著極大的利用價值。目前有大量針對反硝化細菌的篩選、分離培養的研究。其中比較經典的方法是采用Giltay培養基結合德漢氏小管方法對反硝化細菌進行篩選。專利CN 101402990A描述了一種厭氧反硝化細菌篩選用培養基及篩選厭氧反硝化細菌的方法，篩選過程包括固體培養基分離、液體富集和功能驗證。專利CN 102041291A描述了一種反硝化菌的篩選方法，該方法直接用含氨污水對污泥進行富集、分離，并用含目標污染物的水對分離所得細菌進行馴化。目前各種篩選反硝化細菌的方法均取得了不錯的結果，但是對于反硝化細菌的篩選鑒定一般均采用人工培養基進行間接驗證，沒有在污水環境下進行驗證，或將結果與污水環境進行擬合對比。并且采用傳統的驗證方法存在工作量大、效率低的問題
技術實現思路
:本專利技術的目的 在于克服上述的缺陷，提供一種針對水處理的反硝化細菌篩選鑒定試劑盒及利用該試劑盒進行反銷化細菌篩選鑒定的方法；該試劑盒是通過實驗，配制了一系列人工反硝化鑒定培養基對微生物進行反硝化能力鑒定，鑒定結果與微生物在市政污水、醫療污水中的反硝化結果進行對比擬合，最終設計出了 I種人工反硝化鑒定培養基，可以模擬微生物在真實污水環境下的反硝化效果，其結果可以百分之百覆蓋、模擬微生物在污水中的反硝化作用，無漏檢，可以得到較高的陽性率；該試劑盒和篩選方法是將篩選出的人工鑒定培養基制備成無菌預制管，并結合菌株富集管、菌種保藏液的一種操作簡單、可以定量檢測的一站式反硝化細菌篩選鑒定試劑盒，利用該試劑盒進行反銷化細菌的篩選鑒定效率高，工作量小。本專利技術的目的是通過以下技術方案實現的:一種反硝化細菌篩選鑒定試劑盒，其特征在于:它是由菌株富集管、反硝化鑒定預制管、菌株保藏液組成；其中:菌株富集管:菌株富集管為裝有富集培養基的螺口凍存管，其中每升富集培養基所含成分如下:牛肉膏l_3g，蛋白胨l_3g，葡萄糖0.8-2.lg，磷酸二氫鉀480-890mg，磷酸氫二鈉0.7-1.5g，硫酸鎂100_200mg，氯化鈣20_50mg，碳酸氫鈉20_120mg，微量元素母液A 1ml，微量元素母液B Iml,以上培養基用濃度5%的碳酸鈉和HCl調pH至7.00-7.50 ;富集培養基配制完成并調完PH后，將富集培養基分裝到1.8ml螺口凍存管中，每支凍存管加入富集培養基1ml，分裝完畢后，115°C滅菌25-30min ；反硝化鑒定預制管:反硝化鑒定預制管中裝有反硝化鑒定培養基，每升反硝化鑒定培養基所含成分如下:牛肉膏0.1-0.5g，蛋白胨0.1-0.5g，琥珀酸鈉l_3g，醋酸鈉0.1-0.8g，磷酸二氫鉀480-890mg，磷酸氫二鈉 0.5-1.5g，硫酸鎂 100_200mg，氯化鈣 5_50mg，EDTA 二鈉 lO-lOOmg，硝酸鉀l_2g,亞硝酸鈉0.1-1g, 1%溴百里酹藍乙醇溶液Iml,微量元素母液A Iml,微量元素母液B Iml,以上培養基用濃度10%的氫氧化鈉和HCl調pH至7.00-7.50 ;反硝化鑒定培養基配制完成并調完PH后，將反硝化鑒定培養基分裝到反硝化鑒定預制管中，115°C滅菌25_30min ；菌株保藏液:菌株保藏液成分如下:甘油40-60ml,去離子水40-60ml ；，115°C滅菌25_30min ；其中:每升微量元素母液A所含成分如下:硫酸亞鐵5g, EDTA 二鈉5g ；·其中:每升微量元素母液B所含成分如下:EDTA 二鈉1.5g，ZnSO4.7H20 430mg,CoCl2.6H20 240mg, MnCl2 629mg, CuSO4.5H20 250mg, Na2MoO4.2H20 220mg, NiCl2.6H20 190mg, H3BO3 14mg。所說的反硝化鑒定預制管，其特征在于:包括鑒定管主體、氣體收集管、支撐桿、密封蓋和接種針頭；所說的鑒定管主體的頂部設有頂部管口，頂部管口與氣體收集管連接，所說的支撐桿自氣體收集管的頂部插裝于氣體收集管內，支撐桿的底部與氣體收集管的底部活動連接，鑒定管主體的底部設有底部管口，底部管口上安裝密封蓋，接種針頭的末端設有連接帽，與鑒定管主體底部管口連接。所說的支撐桿的底部設有密封外螺紋，與氣體收集管底部設置的密封內螺紋旋接。所說的氣體收集管上設有刻度。所說的支撐桿的底部密封外螺紋上方套裝密封橡膠墊。所說的支撐桿的頂部設有旋轉手柄。所說的鑒定管主體與氣體收集管為一體結構。所說的鑒定管主體、氣體收集管、支撐桿和接種針頭為PP或PE材料。一種反硝化細菌篩選鑒定方法，其特征在于:按如下的步驟進行:步驟1:菌株富集將待測菌樣接種到菌株富集管中，將菌株富集管蓋擰緊，培養條件選擇28_35°C溫度下靜止培養24-48小時，或將菌株富集管平放入搖床28-35°C、150-200rpm震蕩培養24-48小時；步驟2:鑒定培養將步驟I富集的菌株接種至反硝化鑒定預制管中，接種完畢后，在25_35°C條件下靜止培養；步驟3:菌種保藏向菌株富集管中殘留的菌液中加入0.5ml菌株保藏液，震蕩混勻，放入_20°C冰箱保存；步驟4:結果觀察步驟2的反硝化鑒定預制管中的菌株經培養12_48h后，記錄管中培養基的顏色變化和產氣量，此后，根據實驗需要，每隔一段時間連續記錄觀察結果，培養基顏色由綠色變成藍色并且有氣體產生, 為反硝化陽性細菌。本專利技術的優點和有益效果是:1、該試劑盒是通過實驗，配制了一系列人工反硝化鑒定培養基對微生物進行反硝化能力鑒定，鑒定結果與微生物在市政污水、醫療污水中的反硝化結果進行對比擬合，最終設計出了 I種人工反硝化鑒定培養基，模擬微生物在真實污水環境下的反硝化效果，其結果百分之百覆蓋、模擬微生物在污水中的反硝化作用，無漏檢，得到較高的陽性率；2、該試劑盒和篩選方法是將篩選出的人工鑒定培養基制備成無菌預制管，并結合菌株富集管、菌種保藏液的一種操作簡單、可以定量檢測的一站式反硝化細菌篩選鑒定試劑盒，利用該試劑盒進行反銷化細菌的篩選鑒定效率高，工作量小。附圖說明:圖1A為反硝化細菌鑒定預制管結構示意圖。圖1B為反硝化細菌鑒定預制管成品圖。圖1C為反硝化細菌鑒定預制管接種示意圖。圖1D為反硝化細菌鑒定預制管產氣示意圖。圖中:1_鑒定管主體，2-氣體收集管，3-氣體收集管底部的密封內螺紋，4-支撐桿底部的密封外螺紋，5-密封橡膠墊，6-支撐桿，7-旋轉手柄，8本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種反硝化細菌篩選鑒定試劑盒，其特征在于：它是由菌株富集管、反硝化鑒定預制管、菌株保藏液組成；其中:菌株富集管：菌株富集管為裝有富集培養基的螺口凍存管，其中每升富集培養基所含成分如下：牛肉膏1?3g，蛋白胨1?3g，葡萄糖0.8?2.1g，磷酸二氫鉀480?890mg，磷酸氫二鈉0.7?1.5g，硫酸鎂100?200mg，氯化鈣20?50mg，碳酸氫鈉20?120mg，微量元素母液A?1ml，微量元素母液B?1ml，以上培養基用濃度5%的碳酸鈉和HCl調pH至7.00?7.50；富集培養基配制完成并調完pH后，將富集培養基分裝到1.8ml螺口凍存管中，每支凍存管加入富集培養基1ml，分裝完畢后，115℃滅菌25?30min；反硝化鑒定預制管：反硝化鑒定預制管中裝有反硝化鑒定培養基，每升反硝化鑒定培養基所含成分如下：牛肉膏0.1?0.5g，蛋白胨0.1?0.5g，琥珀酸鈉1?3g，醋酸鈉0.1?0.8g，磷酸二氫鉀480?890mg，磷酸氫二鈉0.5?1.5g，硫酸鎂100?200mg，氯化鈣5?50mg，EDTA二鈉10?100mg，硝酸鉀1?2g，亞硝酸鈉0.1?1g，1%溴百里酚藍乙醇溶液1ml，微量元素母液A?1ml，微量元素母液B?1ml，以上培養基用濃度10%的氫氧化鈉和HCl調pH至7.00?7.50；反硝化鑒定培養基配制完成并調完pH后，將反硝化鑒定培養基分裝到反硝化鑒定預制管中，115℃滅菌25?30min；菌株保藏液：菌株保藏液成分如下：甘油40?60ml，去離子水40?60ml；，115℃滅菌25?30min；其中：每升微量元素母液A所含成分如下：硫酸亞鐵5g，EDTA二鈉5g；其中：每升微量元素母液B所含成分如下：?EDTA二鈉1.5g，ZnSO4.7H2O?430mg，CoCl2.6H2O?240mg，MnCl2?629mg，CuSO4.5H2O?250mg，Na2MoO4.2H2O?220mg，NiCl2.6H2O?190?mg，H3BO3?14mg。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：李博智，武震，宋文軍，魏紀平，朱高雄，
申請(專利權)人：天津市興源環境技術工程有限公司，天津清鑒生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。