本發明專利技術是一種睪丸酮叢毛單胞菌LH-N5?CGMCCNo.6975。本發明專利技術還公開了一種異養硝化好氧反硝化微生物菌劑，該微生物菌劑包含睪丸酮叢毛單胞菌LH-N5，或者木糖氧化無色桿菌木糖氧化亞種LH-N25、噬氨副球菌LH-N40中的一種或兩種，菌株之間按照任意的比例進行組合。本發明專利技術還公開了該微生物菌劑制備方法。本發明專利技術的微生物菌劑不僅能解決傳統反應器中總氮難脫除的問題，而且能夠在同一反應器中有效脫除水體中的氨氮和總氮，同時對廢水中的酚類、胺類、雜環類、氰類、多環芳烴類等有毒物質具有耐受性或降解能力，特別適用于含氮化工廢水，處理工藝簡單，效果穩定，耐環境毒物沖擊，在各種實際含氮化工廢水處理中有著非常廣闊的應用前景。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于環境微生物領域，具體涉及微生物菌種，以及由該微生物菌種組成的異養硝化好氧反硝化脫氮的微生物菌劑，以及該菌劑的制備方法與用途。
技術介紹
傳統的廢水生物脫氮技術主要是靠自養硝化菌和異養反硝化菌通過硝化和反硝化偶聯使氨氮轉變為氮氣脫除。而自養細菌自身的增殖速度慢、在混合培養的活性污泥系統中無法與異養細菌競爭、難以獲得較高的生物量、硝化效率低，導致自養微生物脫氮系統抗沖擊能力弱、硝化作用不完全；反硝化菌為異養菌，運行中往往需要補加碳源，增加了運行成本。鑒于傳統的硝化細菌和反硝化細菌的不足，異養硝化細菌、好氧反硝化細菌的發現解決了傳統生物脫氮處理啟動時間長，硝化環節條件要求苛刻，硝化和反硝化不能同步進行等缺點，具有較好的發展前景。已報道的異養硝化細菌很多又同時具有好氧反硝化的功能，這為污水脫氮引入新的概念，使得同步硝化反硝化得以實現。目前，高氨氮行業的廢水一般含有很多含有毒有害物質，如焦化廢水等。針對這一情況，獲得耐受環境毒害、去除難降解物質的高效異養硝化好氧反硝化功能菌株，構建組合成微生物菌劑，投加到廢水處理系統中或者用于特定污染水體的生物修復，使其成為反應體系中的優勢種群而發揮脫氮和去除COD作用，能夠增強對難降解污染物的降解能力，提高脫氮速率，并改善原有生物處理體系對目標污染物的去除效能。公開專利文獻CN101875909.B提供了一種高效的異養硝化好氧反硝化細菌及其培養方法和用途，該細菌是紅球菌屬Rhodococcus sp.DN2.3，保藏登記號為CCTCCM209300，能夠有效脫除 水體中的氨氮、亞硝酸氮、硝酸氮及其混合物，還可同時去除有機廢水中的C0D&，但菌劑生產方法過于簡單，菌種單一，環境耐受力差，不適用于大規模利用。公開專利文獻CN102277314.B提供一種種高效異養硝化細菌篩選方法、篩選的菌株及其菌劑的制備方法，該菌株為臘狀芽孢桿菌(Bacillus cereus),保藏編號為:CGMCCN0.4918，可以利用亞硝酸鹽作為唯一的氮源進行生長繁殖。并以該菌株制備水質凈化微生物制劑菌劑，可用于污水處理、水產養殖、水族箱或流動水系等水治理工程，未見其用于工業污水處理。公開專利文獻CN101899401.A提供了一種含氨廢水微生物菌劑及其制備方法，該菌劑包含硝酸菌、亞硝酸菌和反硝化菌，通過定向馴化來調節或者配比，能有效處理低C0D、高氨氮廢水，但菌劑中包含的菌株過于籠統，對有毒有害物質耐受性較差。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供一種新的睪丸酮叢毛單胞菌LH-N5。本專利技術所要解決的另一個技術問題是提供了含有上述睪丸酮叢毛單胞菌LH-N5的異養硝化好氧反硝化微生物菌劑。本專利技術所要解決的另一個技術問題是提供了上述菌劑的制備方法與用途。本專利技術是一種睪丸酮叢毛單胞菌testosteroni) LH-N5 CGMCC N0.6975。本專利技術所涉及的菌株為睪丸酮叢毛單胞菌(Comamonas testosteroni ) LH-N5CGMCC N0.6975、木糖氧化無色桿菌木糖氧化亞種(Achromobacter xylosoxidans subsp.xylosoxidans) LH-N25 CGMCC N0.6972 以及卩遼氨副球菌(Paracoccus aminovorans)LH-N40 CGMCC N0.6971。其中:睪丸酮叢毛單胞菌已于2012年12月10藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，保藏編號為CGMCC N0.6975 ;保藏單位地址:北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研究所，電話:010-64807355 ;木糖氧化無色桿菌木糖氧化亞種LH-N25已于2012年12月10保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，保藏編號為CGMCC N0.6972 ;保藏單位地址:北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研究所，電話:010-64807355 ;噬氨副球菌LH-N40已于2012年12月10保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，保藏編號為CGMCC N0.6971 ;保藏單位地址:北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研究所，電話:010-64807355。以下對本專利技術的菌株的分離純化進行說明。一、睪丸酮叢毛單胞菌LH-N25的分離純化 1.土樣馴化富集:取土壤樣品，接種至硝化液體培養基中，逐步馴化富集。(硝化富集培養基組成:NH4SO4 lg/L, NaNO31 g/L, NaCl 0.3g/L, FeSO4 0.03g/L, K2HPO4 0.25g/L, MgSO40.03g/L, Na2CO30.3g/L, CH3COONa 0.5g/L 蒸餾水 1L，pH 8.0) 2.稀釋液準備:取馴化污泥培養液lml，加入盛有9ml無菌水的滅菌試管中，混勻即得10—1濃度的污泥懸液。靜置30s,用Iml無菌吸管吸取KT1的污泥懸液Iml放入9ml無菌水管中，吹吸混勻，即為10_2稀釋液，依次從10_2連續稀釋至10_5，即得一系列的10倍稀釋液。3.培養皿準備:取滅菌培養皿,在皿蓋上加注樣品號、培養基代號、接種稀釋度、分離日期等。將滅菌后的硝化培養基倒入皿中約12 15ml，使凝成平板。(硝化固體培養基組成同硝化液體培養基，另加入2%的瓊脂)。4.初篩與培養:初篩接種采用涂布法，即用無菌吸管吸取不同倍數稀釋液0.1ml，滴于已制好的平板上，然后用無菌刮鏟涂勻。接種完畢，將皿分類重疊，倒置于30°C培養箱中培養2 4d。5.復篩:取出培養好的平板，選出生長好、有代表性的單菌落，用接種環挑取，接種到同樣成分的硝化液體培養基中30°C震蕩培養，生長后，用接種環挑取一環培養液在硝化固體培養基上劃線純化，30°C培養箱中培養。待有菌落長出后，挑取單菌落劃線，純化，重復2 3次，篩選得到純菌株。6.將該純菌株送到生物工程(上海)有限公司進行16s rDNA測序，經鑒定為睪丸酮叢毛單胞菌testosteroni)。二、噬氨副球菌LH-N40的分離純化 1.土樣馴化富集:取土壤樣品，接種至硝化液體培養基中，逐步馴化富集。(硝化富集培養基組成:NH4SO4 lg/L, NaNO31 g/L, NaCl 0.3g/L, FeSO4 0.03g/L, K2HPO4 0.25g/L, MgSO40.03g/L, Na2CO30.3g/L, CH3COONa 0.5g/L 蒸餾水 1L，pH 8.0) 2.稀釋液準備:取馴化污泥培養液lml，加入盛有9ml無菌水的滅菌試管中，混勻即得10—1濃度的污泥懸液。靜置30s,用Iml無菌吸管吸取KT1的污泥懸液Iml放入9ml無菌水管中，吹吸混勻，即為10_2稀釋液，依次從10_2連續稀釋至10_5，即得一系列的10倍稀釋液。3.培養皿準備:取滅菌培養皿,在皿蓋上加注樣品號、培養基代號、接種稀釋度、分離日期等。將滅菌后的硝化培養基倒入皿中約12 15ml，使凝成平板。(硝化固體培養基組成同硝化液體培養基，另加入2%的瓊脂)。4.初篩與培養:初篩接種采用涂布法，即用無菌吸管吸取不同倍數稀釋液0.1ml，滴于已制好的平板上，然后用無菌刮鏟涂本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種睪丸酮叢毛單胞菌（Comamonas?testosteroni）LH?N5??CGMCC?No.?6975。
【技術特征摘要】
1.一種辜丸麗叢毛單胞菌(testosteroni') LH-N5 CGMCC N0.6975。2.—種異養硝化好氧反硝化微生物菌劑，其特征在于:該微生物菌劑包含權利要求1所述的睪丸酮叢毛單胞菌、Comamonas testosteroni) LH-N5 ;或者除包含權利要求1所述的睪丸酮叢毛單胞菌(Comamonas testosteroni) LH-N5外,還包含木糖氧化無色桿菌木糖氧化亞種(Achromobacter xylosoxidans subsp.xylosoxidans) LH-N25 CGMCC N0.6972與曬氨副球菌aminovorans) LH-N40 CGMCC N0.6971 中的一種或兩種，菌株之間按照任意的比例進行組合。3.根據權利要求2所述的異養硝化好氧反硝化微生物菌劑，其特征在于:該微生物菌劑中，以質量分數計量，每種菌株的含量均不低于5%。4.一種如權利要求2或3所述的異養硝化好氧反硝化微生物菌劑的制備方法，其特征在于，其步驟如下: (1)將微生物菌劑中所述的菌株分別接種到固體培養基進行活化； (2)活化后分別轉接到相應液體培養基進行搖瓶培養，離心收集菌體，制備高濃度種子液；搖瓶培養條件為，pH:6.0 10.0，溫度:10°C 35°C，轉速:100 170rpm，培養時間:I 2 d ;高濃度種子液中有效活菌數量彡5 X IO9 cfu/mL ； (3)將上述高濃度種子液分別到接種到相應的一級種子罐進行放大培養I 7d，培養條件為:溫度 10°C 35°C ；pH 6.0 10.0 ；D0 0.5 4.0mg/L，通氣量 0.4 0.6m3/h，攪拌速度110 150rpm,濃縮收集菌體,制備一級種子液；再將...
【專利技術屬性】
技術研發人員：田鳳蓉，王開春，張彬彬，楊志林，王克云，劉娟，崔慶蘭，胡聰，
申請(專利權)人：中藍連海設計研究院，
類型：發明
國別省市：
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