紫菀酮型三萜及其藥物組合物和其制備方法與應(yīng)用技術(shù)

結(jié)構(gòu)式為（I）的四環(huán)三萜類(lèi)化合物紫菀酮型三萜astatarone?C（1）、astatarone?G（2）和astatarone?H（3），式中R為以它們?yōu)榛钚猿煞值目挂腋嗡幬锝M合物，它們的制備方法，它們?cè)谥苽浞乐我倚透窝撞《舅幬镏械膽?yīng)用，以及在制備保肝食品和保健品中的應(yīng)用。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)的化合物具有較好的抗HBV活性，可用于制備抗乙型肝炎病毒的藥物。為尋找抗乙型肝炎病毒藥物提供了新的來(lái)源。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)的提取分離方法可控性和重現(xiàn)性較好，成本較低，操作較方便。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

:本專(zhuān)利技術(shù)屬于藥物
，具體地，涉及一些新的紫菀酮型三萜，以其為有效成分的藥物組合物，其作為乙型肝炎病毒抑制劑，其制備方法及其在制備抗乙型肝炎病毒藥物、保健品和食品中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
:乙型病毒性肝炎，簡(jiǎn)稱(chēng)乙肝，是一種由乙型肝炎病毒(HBV)感染機(jī)體后所引起的疾病，分急性和慢性?xún)煞N，嚴(yán)重危害人類(lèi)身體健康，影響人們生活質(zhì)量。乙型肝炎病毒是一種嗜肝病毒，主要存在于肝細(xì)胞內(nèi)并損害肝細(xì)胞，引起肝細(xì)胞炎癥、壞死、纖維化。HBV感染呈世界性流行，全球約20億人曾感染過(guò)HBV，每年發(fā)生5000萬(wàn)例新感染，每年約有100萬(wàn)人死于HBV感染所致肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝癌。據(jù)世界性衛(wèi)生組織報(bào)道，其中3.5億人為慢性感染者。我國(guó)是世界上乙肝感染最嚴(yán)重的國(guó)家，于2006年進(jìn)行的乙型肝炎流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，我國(guó)1-59歲人群乙肝表面抗原攜帶率為7.18%，5歲以下兒童的HBsAg攜帶率為0.96%，據(jù)此推算，我國(guó)現(xiàn)有·的慢性HBV感染者約9300萬(wàn)人，其中有癥狀需要治療的活動(dòng)性乙型肝炎患者約為2000多萬(wàn)。因此，抗乙型肝炎病毒治療藥物的研究和開(kāi)發(fā)引起了世界各國(guó)醫(yī)藥界的高度重視。乙肝的治療在目前仍是世界性的醫(yī)學(xué)難題，盡管?chē)?guó)內(nèi)外早已開(kāi)發(fā)出包括干擾素、拉米夫定、恩替卡韋等乙肝治療藥物，但這些藥物價(jià)格較高，治愈率卻不高。故開(kāi)發(fā)更安全、有效、廉價(jià)的治療乙肝的藥物，具有良好的市場(chǎng)前景。例如:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院和北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所對(duì)五味子粗提物和7種主要木脂素類(lèi)成分的藥理活性進(jìn)行深入研究，根據(jù)其構(gòu)效關(guān)系，已經(jīng)研制出兩個(gè)治療慢性病毒性肝炎的新藥聯(lián)苯雙酯(DDB)和雙環(huán)醇(bicyclol),目前已經(jīng)在全國(guó)范圍內(nèi)使用。這是由我國(guó)自主研發(fā)的一類(lèi)新藥，為從中藥出發(fā)研發(fā)新藥提供了寶貴經(jīng)驗(yàn)。[林國(guó)強(qiáng)，趙騫，朱晨，張培，周珮，史訓(xùn)龍，具有生物活性的聯(lián)苯環(huán)辛烯類(lèi)木脂素衍生物，專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?201010182446.2]。紫斃為菊科植物紫斃Aster tataricus L.f.的干燥根和根莖,其性辛溫,味苦，歸肺經(jīng)，具有潤(rùn)肺下氣、消痰止咳之功效，用于痰多喘咳、新久咳嗽、勞嗽咳血等癥；為常用中藥，且藥用資源豐富。目前已經(jīng)從紫菀中分離得到了 88個(gè)化合物，其類(lèi)型包括三萜及其苷、肽類(lèi)、香豆素、蒽醌、黃酮、有機(jī)酸、酚類(lèi)及留醇等[Zhao，S.M.;Kuang, B.;Peng, ff.ff.; He, ff.J.; Xu, H.Μ.; Ji, C.J.; Han, J.; Zheng, Y.Q.; Song, ff.ff.; Tan, N.H.，Chemicalprogress incyclopeptide-containing traditional medicines cited in Chinesepharmacopoeia, Chinese Journal of Chemistry，2012，30，1213-1225]。經(jīng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，紫菀具有抗腫瘤、抗氧化、抗菌、祛痰鎮(zhèn)咳等藥理作用[侯海燕，陳立，董俊興，紫菀化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展，中國(guó)藥學(xué)雜志，2006，41 (3)，161-163]。其中的肽類(lèi)化合物可能是使其具有抗腫瘤作用的關(guān)鍵成分，近年又新發(fā)現(xiàn)肽類(lèi)化合物還具有免疫抑制活性[Shenj Y.; Luoj Q.; Xuj H.M.; Gong, F.Y.; Zhou, X.B.; Sunj Y.; Wuj X.F.; Liuj W.; Zengj G.Z.;Tanj N.H.;Xu,Q., Mitochondria-dependent apoptosis of activated T lymphocytesinduced by astin C，a plant cyclopeptide, for preventing murine experimental colitis, BiochemicalPharmacology, 2011, 82, 260 - 268]。紫斃中的另一類(lèi)主要成分紫斃酮三職，現(xiàn)從植物中只報(bào)道了 9 個(gè)[Sawai, S.; Uchiyama, H.;Mizuno, S.; Aoki, T.; Akashi,T.;Ayabe, S.-1.;Takahashi, T., Molecular characterization of an oxidosqualenecyclase that yields shionone, a unique tetracyclic triterpene ketone of Astertataricus, FEBS Letters, 2011, 585, 1031-1036; Zhou, ff.B.; Tao, J.Y.; Xu, H.M.; Chen, K.L.; Zeng, G.Z.; Ji, C.J.; Zhang, Y.M.; Tan, N.H., Three new antiviral triterpenes fromAster tataricus, Zeitschrift fur Naturforschung B, 2010，65b, 1393-1396],卻可能是使紫菀具有祛痰鎮(zhèn)咳作用的關(guān)鍵成分。盧艷花等對(duì)紫菀的祛痰鎮(zhèn)咳作用進(jìn)行了系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，從紫菀中分得的紫菀酮和表木栓醇以300mg/kg劑量給予小鼠分別表現(xiàn)出明顯的祛痰鎮(zhèn)咳作用[盧艷花，戴岳，王崢濤，徐珞珊，紫菀祛痰鎮(zhèn)咳作用及其有效部位和有效成分，中草藥，1999，30 (5)，360-362]。劉可越等在實(shí)驗(yàn)中證明紫菀酮可顯著抑制氨水所致的小鼠咳嗽[劉可越，張鐵軍，高文遠(yuǎn)，陳海霞，鄭毅男，紫菀化學(xué)成分的研究，中藥化學(xué)研究與藥物創(chuàng)新-中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥化學(xué)分會(huì)2006年度學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集]。紫菀酮型三萜類(lèi)化合物的提取分離有一定的特點(diǎn)，該類(lèi)天然產(chǎn)物主要來(lái)源于紫斃屬植物[Ng, T.B.; Liu, F.; Lu, Y.; Cheng, C.H.; Wang, Z., Antioxidant activity ofcompounds from the medicinal herb Aster tataricus.Comparative Biochemistry andPhysiology C, 2003, 136，109 - 115]，且極性較小，常與油脂和色素混在一起，使其在分離時(shí)常被作為雜質(zhì)處理。另外由于該類(lèi)化合物結(jié)構(gòu)變化較小，因此分布范圍較為集中，且薄層層析后硫酸顯色呈土黃色，在紫菀屬植物中易與其它成分區(qū)分，在分離純化時(shí)可充分利用這些特點(diǎn)。現(xiàn)有技術(shù)中，從紫菀屬植物中分離紫菀酮型三萜類(lèi)化合物已公開(kāi)發(fā)表如下方法:(1)醇提水沉法，紫菀屬植物紫菀的根和根莖經(jīng)甲醇或乙醇回流提取，回收甲醇或乙醇至一定濃度得粗結(jié)晶，再用其醇溶液反復(fù)重結(jié)晶得到紫菀酮型三萜紫菀酮(shionone)[毛秋蘭，何作民，紫菀中紫菀酮提取工藝的研究，臨床醫(yī)學(xué)工程，2009，16 (7)，102-103]。(2)超臨界CO2萃取，紫菀屬植物紫菀的根和根莖經(jīng)粉碎后用超臨界CO2萃取得到含紫菀酮型三萜紫菀酮(shionone)的 粗提物[莫尚志，黃星，超臨界CO2萃取紫菀中紫菀酮的工藝研究，中藥材，2004，27 (9),676-678]。(本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
下述結(jié)構(gòu)式（I）所述的紫菀酮型三萜astatarone?C(1)、astatarone?G(2)和astatarone?H(3)或其藥理學(xué)上容許的鹽。其中FDA00002959536800011.jpg,FDA00002959536800012.jpg

【技術(shù)特征摘要】
1.下述結(jié)構(gòu)式(I)所述的紫斃酮型三胳astataroneC(I)、astatarone G(2)和astatarone H(3)或其藥理學(xué)上容許的鹽。2.如權(quán)利要求1所述的紫菀酮型三萜，其特征在于所述的紫菀酮型三萜以紫菀屬植物為原料提取分離而得。3.制備權(quán)利要求1所述紫菀酮型三萜的方法，取紫菀屬植物的根和根莖，經(jīng)干燥、粉碎后，用甲醇回流充分提取；將甲醇浸膏加水混懸后，依次用乙酸乙酯和正丁醇充分萃取；乙酸乙酯部分反復(fù)用硅膠、S^hadex LH-20、RP-18、HPLC色譜方法分離純化并結(jié)合TLC檢測(cè)，即得紫菀酮型三萜。4.制備權(quán)利要求1所述紫斃酮型三職astataroneC(I)、astatarone G(2)和astatarone H(3)的方法，取紫菀屬植物的根和根莖，經(jīng)干燥、粉碎后，用甲醇回流提取3次，每次1-3小時(shí)，提取液經(jīng)減壓濃縮得甲醇浸膏；將甲醇浸膏加水混懸后，依次用乙酸乙酯和正丁醇充分萃取，等體積各萃取三次，回收溶劑得到乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分；將乙酸乙酯部分經(jīng)硅膠100-200目柱層析，用氯仿洗脫，得氯仿段；將氯仿段經(jīng)硅膠100-200目柱層析，用100:0-8:1的石油醚/丙酮洗脫，結(jié)合TLC檢測(cè)方法，根據(jù)紫菀酮型三萜極性的不同合并為6個(gè)組分Fr.1-Fr.6 ；以下的每一步驟都須結(jié)合TLC檢測(cè)方法來(lái)進(jìn)行分離純化，其中的組分Fr.4 (石油醚/丙酮20:1)經(jīng)硅膠200-300目柱層析，以30:1-10:1石油醚/丙酮為洗脫劑梯度洗脫初步除去色素和油脂，并把該部分分為三個(gè)組分Fr.4-1-Fr.4-3 ;Fr.4_2經(jīng)Sephadex LH-20柱(氯仿/甲醇1:1)進(jìn)...

【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：譚寧華，周文兵，曾廣智，徐會(huì)敏，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：