一種透明質酸酯復合物的制備方法技術

本發明專利技術涉及一種透明質酸酯復合物的制備方法。采用透明質酸鈉為原料，首先將透明質酸鈉進行脫鹽及純化；然后將純化的透明質酸和單雙脂肪酸甘油酯分別溶于無水有機溶劑中，氮氣保護；向透明質酸溶液中加入羧基活化劑，活化羧基后與單雙脂肪酸甘油酯溶液混合，隔絕空氣條件下持續反應；最后離心分離上清，充分透析凍干即得。本發明專利技術利用無水反應體系，調節控制催化劑用量和反應物料比，產品取代度為4-23％，但反應時間縮短了12-24h，顯著提高了反應效率；本發明專利技術制備工藝簡單，產品疏水基團取代度可控、安全無毒副作用，具有良好的穩定性。本發明專利技術在生物醫藥、醫用敷料、組織工程、化妝品等許多領域具有良好地研究和開發前景。

【技術實現步驟摘要】

:本專利技術屬于生物
的。
技術介紹
:透明質酸(HA)是一種線性陰離子聚合物，是由雙糖單位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺組成的高級多糖，廣泛分布于動物和人體結締組織細胞外基質中，在眼玻璃體、臍帶、皮膚、軟骨和滑液中含量較高。HA具有高粘彈性、可塑性、滲透性、獨特的保濕性、優良的生物相容性和可降解性，以及與細胞表面特異受體專一性結合等優點，是一種理想的護膚養顏、智能藥物釋放及組織工程材料和醫用敷料，目前被廣泛應用于生物醫學、組織工程及高級化妝品等領域。由于天然HA穩定性差，易降解，缺乏生物機械性能，限制了其作為生物材料的應用范圍。因此，對HA分子進行化學改性，在保持HA原有特性的基礎上，改善其穩定性和機械性能，對拓寬其適用領域具有很強的理論和實際應用價值。HA多糖鏈中的羥基、羧基和乙酰氨基是能被衍生的活性基團，其中基于羥基和羧基，通過酯化、交聯、接枝等改性產生的衍生物最為常見。·HA的酯化一般在羧基上進行，旨在改進HA的一些理化特性，如引入一些疏水基團，可降低HA的聚陰離子特性，同時賦予HA以兩親分子特性。常見的HA酯化衍生物多將藥物共價連接到HA主鏈上，如類固醇類藥物，不僅達到藥物緩釋的目的，而且有助于克服藥物溶解度的限制。但這種改性僅具有應用專一性或藥物目標性，而不具備普遍應用的價值。利用長鏈脂肪酸或脂肪酸甘油酯，如單硬脂酸甘油酯(GMS)修飾HA的羧基，形成兩親性HA衍生物，可以使HA發生分子聚集，不經交聯即可自組裝形成納米膠束，或自組裝在藥物載體表面，獲得具腫瘤細胞靶向的藥物載體。此外，單硬脂酸甘油酯具有良好的皮膚促滲作用，HA單硬脂酸甘油酯復合物結合了二者優勢，可作為具有靶向功能的經皮輸送載體材料。國際上已有HA單硬脂酸甘油酯復合物制備的報道，利用催化交聯法在水溶劑中反應24-48h，實現酯化連接，得到疏水取代度5-23%的產品。但由于EDC在水溶劑中容易產生較多副產物，水溶劑的干擾也導致反應效率低，反應時間長等不足。為了彌補已有技術的不足，提高反應效率，縮短反應時間，特申請本專利技術專利
技術實現思路
:本專利技術的目的是提供一種具腫瘤細胞靶向性和皮膚促滲作用的透明質酸酯復合物-透明質酸單雙脂肪酸甘油酯復合物的制備方法，以改善已有技術的不足。本專利技術采用透明質酸納和單雙脂肪酸甘油酯為原料，在無水反應體系中，通過縮合酯化法合成目標產物，即透明質酸酯復合物。其具體步驟是:首先將透明質酸鈉懸浮于乙醇水溶液中，酸處理脫鈉，再用乙醇溶液脫鹽脫水處理純化干燥；再將透明質酸溶于甲酰胺中，無水環境加氮氣保護條件下加入EDC和NHS活化羧基，控制催化劑的加入比例；與單雙脂肪酸甘油酯丙酮溶液充分混合反應，控制反應物濃度和反應時間；通過離心分離終止反應，取上清與丙酮溶液混合，離心分離得上清，充分透析，干燥得白色固體即透明質酸脂復合物。本專利技術以透明質酸和單雙脂肪酸甘油酯為原料制備兼性高分子材料，利用無水反應體系，調節控制催化劑用量和反應物料比，產品取代度為4-23%，但反應時間縮短了12-24h，顯著提高了反應效率；本專利技術制備工藝簡單，產品疏水基團取代度可控、安全無毒副作用，具有良好的穩定性。本專利技術對原材料甘油酯有廣泛的適用性，適用于可以與透明質酸羧基通過酯鍵相結合的單雙脂肪酸甘油酯。其重要意義在于，可以賦予透明質酸兩親性，產生分子聚集，不經交聯即可自組裝形成納米膠束，或自組裝在藥物載體表面，獲得具腫瘤細胞靶向的藥物載體。本專利技術在生物醫藥、醫用敷料、組織工程、化妝品等許多領域具有良好地研究和開發前景。具體實施例方式本專利技術采用透明質酸鈉和單雙脂肪酸甘油酯為原料，在無水反應體系中，通過縮合酯化法合成目標產物，首先將透明質酸鈉脫鹽純化，羧基活化形成中間產物；再通過酯鍵與單雙脂肪酸甘油酯的自由羥基共價連接，形成透明質酸酯復合物。具體實施方案為:1.透明質酸鈉的脫鹽及純化:將透明質酸鈉分散于75%乙醇水溶液中，乙醇水溶液的用量為50 200ml/g透明質酸鈉，攪拌下充分溶脹，滴加濃鹽酸，透明質酸與鹽酸摩爾比為1: 2，繼續反應30 60min，沉降得沉淀，75%酒精洗滌多次至中性，95%酒精脫水，乙醚常溫干燥。2.透明質酸羧基活化:稱取脫鹽純化的透明質酸溶解于甲酰胺中，溶液濃度控制在0.25 2.5 %，氮氣保護，均勻攪拌，加入EDC和NHS活化羧基，EDC和NHS對羧基的用量為I 10: I 10: 1(摩爾比)。3.透明質酸酯復合物制備:稱取單雙脂肪酸甘油酯溶解于丙酮中，溶液濃度控制在0.25 2.5%，氮氣保護，將羧基活化的透明質酸溶液滴加至甘油酯溶液中，均勻攪拌，其中透明質酸與甘油酯的摩爾比為，0.2 5: 1，室溫持續反應10 36h。4.產物的分離純化:將反應產物離心(10000 15000rpm，4°C，15 30min)，棄去沉淀，將上層液體與50 70%丙酮水溶液混合，丙酮水溶液用量為I 3: I (v/v)，攪拌0.5 Ih后相同條件下再次離心得上清，去離子水中充分透析，凍干得白色固體即透明質酸酯復合物。本專利技術中所述的單雙脂肪酸甘油酯中的脂肪酸可以是油酸、亞油酸、亞麻酸、棕櫚酸、山崳酸、硬脂酸、月桂酸。以下結合附圖、附表和實施例對本專利技術做出進一步說明。附圖說明:圖1透明質酸酯復合物的紅外光譜2透明質酸酯復合物的1H核磁共振圖譜實施例1.1.透明質酸鈉的脫鹽及純化:稱取Ig透明質酸鈉產品，分散于100ml75%乙醇水溶液中，攪拌下充分溶脹，滴加37%濃鹽酸至濃度為0.05M，繼續反應40min，沉降得沉淀，75%酒精洗滌多次至中性，95%酒精脫水，乙醚常溫干燥。2.透明質酸羧基活化將0.6g脫鹽純化的透明質酸，溶解于40ml甲酰胺中，氮氣保護，分別向溶液中加入EDC和NHS，與羧基的用量比為5: 5: 1，活化羧基。3.透明質酸酯復合物制備:稱取0.12g單硬脂酸甘油酯，溶解于48ml丙酮中，氮氣保護，將羧基活化的透明質酸溶液滴加至甘油酯溶液中，室溫攪拌，持續反應12h。4.產物的分離純化將反應產物于離心(15000rpm，4°C，20min)，棄去沉淀，將上層液體與IOOml丙酮水溶液(50% )混合，攪拌0.5h后相同條件下再次離心得上清，去離子水中充分透析48小時，凍干得白色固體。實施例2.1.透明質酸鈉的脫鹽及純化稱取2g透明質酸鈉產品，分散于400ml75%乙醇水溶液中，攪拌下充分溶脹，滴加37%濃鹽酸至濃度為0.025M，繼續反應60min，沉降得沉淀，75%酒精洗滌多次至中性，95 %酒精脫水，乙醚常溫干燥。2.透明質酸羧基活 化將Ig脫鹽純化的透明質酸，溶解于40ml甲酰胺中，氮氣保護，分別向溶液中加入EDC和NHS，與羧基的用量比為10: 10: 1，活化羧基。3.透明質酸酯復合物制備:稱取0.5g單硬脂酸甘油酯，溶解于40ml丙酮中，氮氣保護，將羧基活化的透明質酸溶液滴加至甘油酯溶液中，室溫攪拌，持續反應24h。4.產物的分離純化將反應產物于離心(15000rpm，4°C，20min)，棄去沉淀，將上層液體與200ml丙酮水溶液(50%)混合，攪拌Ih后相同條件下再次離心得上清，去離子水中充分透析48小時，凍干得白色固體。實施例3.1.透明質酸鈉的脫鹽及純化稱取0.5g透明質酸鈉產本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種透明質酸酯的制備方法，其主要特征在于包括以下四個步驟：第一步透明質酸鈉的脫鹽及純化：將透明質酸鈉分散于75％乙醇水溶液中，乙醇水溶液的用量為50～200ml/g透明質酸鈉，攪拌下充分溶脹，滴加濃鹽酸，透明質酸與鹽酸摩爾比為1∶2，繼續反應30～60min，沉降得沉淀，75％酒精洗滌多次至中性，95％酒精脫水，乙醚常溫干燥。第二步透明質酸羧基活化：稱取脫鹽純化的透明質酸溶解于甲酰胺中，溶液濃度控制在0.25～2.5％，氮氣保護，均勻攪拌，加入EDC和NHS活化羧基。第三步透明質酸酯復合物制備：稱取單雙脂肪酸甘油酯溶解于丙酮中，溶液濃度控制在0.25～2.5％，氮氣保護，將羧基活化的透明質酸溶液滴加至丙酮溶液中，均勻攪拌，室溫持續反應10～36h。第四步產物的分離純化：將反應產物離心(10000～15000rpm，4℃，15～30min)，棄去沉淀，將上層液體與50～70％丙酮水溶液混合，丙酮水溶液用量為1～3∶1(v/v)，攪拌0.5～1h后相同條件下再次離心得上清，去離子水中充分透析，凍干得白色固體即透明質酸酯復合物。

【技術特征摘要】
1.一種透明質酸酯的制備方法，其主要特征在于包括以下四個步驟: 第一步透明質酸鈉的脫鹽及純化: 將透明質酸鈉分散于75%乙醇水溶液中，乙醇水溶液的用量為50 200ml/g透明質酸鈉，攪拌下充分溶脹，滴加濃鹽酸，透明質酸與鹽酸摩爾比為1: 2，繼續反應30 60min，沉降得沉淀，75%酒精洗滌多次至中性，95%酒精脫水，乙醚常溫干燥。第二步透明質酸羧基活化: 稱取脫鹽純化的透明質酸溶解于甲酰胺中，溶液濃度控制在0.25 2.5%，氮氣保護，均勻攪拌，加入EDC和NHS活化羧基。第三步透明質酸酯復合物制備: 稱取單雙脂肪酸甘油酯溶解于丙酮中，溶液濃度控制在0.25 2.5%，氮氣保護，將羧基活化的透明質酸溶液滴加至丙酮溶液中，均勻攪拌，室溫持續反應10 36h。第四步產物的分離純化: 將反應產物離心(10000...

【專利技術屬性】
技術研發人員：孔明，陳西廣，程曉杰，
申請(專利權)人：中國海洋大學，
類型：發明
國別省市：