【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術大體涉及包含氨酰-tRNA合成酶和其他蛋白的新鑒定的蛋白片段的組合物，編碼它們的多核苷酸及其互補物，相關試劑，及其在診斷、藥物發現、研究和治療應用中的使用方法。
技術介紹
在過去的四十年，氨酰-tRNA合成酶(AARS)被認為是催化tRNA分子氨酰化所必需的管家蛋白，而tRNA分子氨酰化是蛋白翻譯過程中遺傳信息解碼的一部分。AARS在這方面已經得到廣泛研究，并且克隆了許多它們的全長序列以進行序列分析并提供生化實驗的豐富來源。然而，一些AARS片段和其他蛋白具有意想不到的與氨酰化無關的活性，包括調節超出蛋白翻譯的途徑的細胞外信號傳導活性。一般而言，在全長或親本蛋白序列的情況下未發現這些意想不到的活性；反而在從其親本序列去除或切除AARS蛋白片段之后，或者通過表達并充分純化AARS片段序列，然后測試新的非合成酶相關的活性，發現了這些活性。雖然AARS的全長序列已經知道了一段時間，但是還沒有進行系統的實驗分析來闡釋此類AARS蛋白片段或來自有關或相關蛋白的蛋白片段，或者評價全長AARS蛋白在氨基酸合成之外的新生物活性方面的潛在作用。在本說明書的多個部分，此類AARS蛋白片段、AARS結構域或AARS選擇性剪接變體在本文被稱為“切除蛋白(resectin) ”。在其最廣的范圍內，術語“切除蛋白”指已經從其天然的全長或親本蛋白序列切離或限制(通過蛋白水解、選擇性剪接、誘變或重組基因工程)的一部分蛋白，否則其常常掩蓋其新的生物活性。同樣，還沒有進行系統的實驗分析以考察此類切除蛋白在治療各種醫學病癥中作為生物治療劑、診斷劑或藥物靶的用途，或者它們與人類疾病的...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.04.28 US 61/328,871;2010.04.28 US 61/328,867;1.種組合物，包含至少100個氨基酸的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段，所述蛋白片段包含表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的氨基酸序列，其中所述蛋白片段具有至少約5mg/mL的溶解度，并且其中所述組合物以蛋白基計具有至少約95%的純度，小于約IOEU內毒素/mg蛋白，并且基本上沒有血清。2.利要求1所述的組合物，其中所述AARS蛋白片段包含與選自以下的序列至少90%同一的氨基酸序列:SEQ.1D.No 12、SEQ.1D.N0.59、SEQ.1D.N0.43、SEQ.1D.N0.81 和 SEQ.1D.N0.142。3.利要求1-2中任一項所述的組合物，其中所述AARS蛋白片段包含非常規生物活性。4.利要求3所述的組合物，其中所述非常規生物活性選自:細胞外信號傳導的調節、細胞增殖的調節、細胞分化的調節、基因轉錄的調節、細胞因子生成或活性的調節、細胞因子受體活性的調節、和炎癥的調節。5.利要求4所述的組合物，其中所述非常規生物活性是基因轉錄的調節。6.利要求1-5中任一項所述的組合物，其中所述AARS蛋白片段與異源多肽融合。7.利要求6所述的AARS融合蛋白，其中所述AARS融合蛋白基本上保持所述AARS蛋白片段的非常規活性。8.利要求6所述的AARS融合蛋白，其中所述AARS融合蛋白抑制所述AARS蛋白片段的非常規活性。9.利要求6所述的AARS融合蛋白，其中所述異源多肽與所述AARS蛋白片段的N端連接。10.利要求6所述的AARS融合蛋白，其中所述異源多肽與所述AARS蛋白片段的C端連接。11.利要求6所述的AARS融合蛋白，其中所述異源多肽選自:純化標簽、表位標簽、靶向序列、信號肽、膜易位序列和PK調節物。12.利要求1-5中任一項所述的組合物，其中所述組合物包含濃度為最少約10mg/mL的AARS蛋白片段。13.利要求12所述的組合物，其中所述AARS蛋白片段是至少90%單分散的。14.利要求12或13所述的組合物，其中所述組合物包含小于約3%的高分子量聚集蛋白。15.利要求12至14中任一項所述的組合物，其中所述組合物在4°C下在PBS中以至少lOmg/mL的濃度保存I周時表現出小于3%的聚集。16.種組合物，包含至少100個氨基酸的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段，所述蛋白片段與表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的氨基酸序列相差約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11個氨基酸的置換、缺失和/或添加，其中改變的蛋白片段基本上保持未改變的蛋白的非常規活性，其中所述蛋白片段具有至少約lOmg/mL的溶解度，并且其中所述組合物以蛋白基計具有至少約95%的純度，小于約IOEU內毒素/mg蛋白，并且基本上沒有血清污染。17.種組合物，包含特異性結合表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段的分離的抗體，其中所述抗體對所述AARS蛋白片段的親和力比所述抗體對相應的全長AARS多肽的親和力強約10X，并且其中所述抗體拮抗所述AARS蛋白片段的非常規活性。18.種組合物，包含特異性結合表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段的分離的抗體，其中所述抗體具有至少約IOnM的對所述AARS蛋白片段的親和力，和至少約IOOnM的對相應全長AARS多肽的親和力。19.利要求17或18中任一項所述的組合物，其中所述抗體結合位于表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的AARS多肽獨特剪接點內的表位，或者結合該剪接位點的C端氨基酸序列。20.利要求17或18中任一項所述的組合物，其中所述抗體結合包含選自以下的至少5 個連續氨基酸的表位:SEQ.1D.N0.50、SEQ.1D.N0.52、SEQ.1D.N0.54、SEQ.1D.N0.56、SEQ.1D.N0.130、SEQ.1D.N0.132、SEQ.1D.N0.134、和 SEQ.1D.N0.136。21.利要求17或18中任一項所述的組合物，其拮抗所述AARS多肽的非常規活性。22.種生物測定系統，包 含至少100個氨基酸的基本上純的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段和結合所述AARS蛋白片段的結合配偶體，所述蛋白片段包含表1_3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的氨基酸序列。23.利要求22所述的生物測定系統，其中所述結合配偶體選自:細胞表面受體蛋白、核酸、脂質膜、細胞調節蛋白、酶和轉錄因子。24.利要求22所述的組合物，其中所述AARS蛋白片段包含與選自以下的序列至少90% 同一的氨基酸序列:SEQ.1D.No 12、SEQ.1D.N0.59、SEQ.1D.N0.43、SEQ.1D.N0.81 和SEQ.1D.N0.142。25.種細胞組合物，包含:至少100個氨基酸的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段，所述蛋白片段包含表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的氨基酸序列；和工程化的細胞群，其中至少一個細胞包含編碼所述AARS蛋白片段的多核苷酸，其中所述細胞能夠在無血清培養基中生長。26.種檢測系統，包含:至少100個氨基酸的基本上純的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段，所述蛋白片段包含表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的氨基酸序列；包含結合所述蛋白片段的細胞表面受體或其細胞外部分的細胞；和調節所述AARS蛋白片段和細胞外受體的結合或相互作用的小于約2000道爾頓的分子或第二多肽。27.種診斷系統，包含:至少100個氨基酸的基本上純的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段，所述蛋白片段包含表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的氨基酸序列；和包含特異性結合所述AARS蛋白片段的細胞表面受體或其細胞外部分的細胞，其中所述細胞包含指示分子，所述指示分子允許檢測所述細胞表面受體或其細胞外部分的水平或活性的變化。28.種細胞生長裝置，包含:至少100個氨基酸的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段，所述蛋白片段包含表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的氨基酸序列；工程化的細胞群，其中至少一個細胞包含編碼所述AARS蛋白片段的多核苷酸；至少約10升的無血清生長培養基；和無菌容器。29.種反義或RNA干擾(RNAi)劑，包含靶向對抗表1_3、或表4_6、或表7_9任一個中所列的AARS剪接變體的獨特剪接點的序列。30.種治療組合物，包含至少100個氨基酸的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段，所述蛋白片段包含表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的氨基酸序列，其中所述蛋白片段特異性結合結合配偶體以發揮生理效應并且具有至少約5mg/mL的溶解度，并且其中所述組合物以蛋白基計具有至少約95%的純度和小于約IOEU內毒素/mg蛋白。31.利要求29所述的治療組合物，其中所述AARS蛋白片段包含與選自以下的序列至少 90% 同一的氨基酸序列:SEQ.1D.No 12、SEQ.1D.N0.59、SEQ.1D.N0.43、SEQ.1D.N0.81 和SEQ.1D.N0.142。32.利要求29或30所述的治療組合物，其中所述結合配偶體選自:細胞表面受體、核酸、脂質膜、調節蛋白、酶和轉錄因子。33.利要求29或30所述的治療組合物，其中所述AARS蛋白片段與異源多肽融合。34.利要求32所述的治療組合物，其中所述AARS融合蛋白基本上保持所述AARS蛋白片段的非常規活性。35.利要求32所述的治療組合物，其中所述AARS融合蛋白抑制所述AARS蛋白片段的非常規活性。36.利要求32所述的治療組合物，其中所述異源多肽與所述AARS蛋白片段的N端連接。37.利要求32所述的治療組合物，其中所述異源多肽與所述AARS蛋白片段的C端連接。38.利要求32所述的治療組合物，其中所述異源多肽選自:純化標簽、表位標簽、靶向序列、信號肽、膜易位序列和PK調節物。39.利要求29-30中任一項所述的治療組合物，其中所述組合物包含濃度為最少約lOmg/mL的AARS蛋白片段。40.利要求29-30中任一項所述的治療組合物，其中所述AARS蛋白片段是至少90%單分散的。41.利要求39所述的治療組合物，其中所述組合物包含小于約3%的高分子量聚集蛋白。42.利要求39所述的治療組合物，其中所述組合物在4°C下在PBS中以至少10mg/mL的濃度保存I周時表現出小于3%的聚集。43.種組合物，包含至少100個氨基酸的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段，所述蛋白片段與表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的氨基酸序列至少80%、85%、90%、95%、98%或100%同一，其中所述蛋白片段具有至少約5mg/mL的溶解度，并且其中所述組合物以蛋白基計具有至少約95%的純度和小于約IOEU內毒素/mg蛋白。44.種組合物，包含至少100個氨基酸的基本上純的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段和至少一個與之共價或非共價連接的部分，所述蛋白片段包含表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的氨基酸序列。45.利要求42所述的組合物，其中所述AARS蛋白片段包含與選自以下的序列至少90% 同一的氨基酸序列:SEQ.1D.No 12、SEQ.1D.N0.59、SEQ.1D.N0.43、SEQ.1D.N0.81 和SEQ.1D.N0.142。46.利要求42或43所述的組合物，其中所述部分是可檢測的標記物。47.利要求42或43所述的組合物，其中所述部分是水溶性聚合物。48.利要求42或43所述的組合物，其中所述水溶性聚合物是PEG。49.利要求42或43所述的組合物，其中所述部分與所述蛋白片段的N端連接。50.利要求42或43所述的組合物，其中所述部分與所述蛋白片段的C端連接。51.種組合物，包含與至少100個氨基酸的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段連接的固體基底，所述蛋白片段包含表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的氨基酸序列，其中所述蛋白片段具有至少約5mg/mL的溶解度，并且所述組合物以蛋白基計具有至少約95%的純度。52.種組合物，包含特異性結合表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)蛋白片段的結合劑，其中所述結合劑具有至少約InM的對所述蛋白片段的親和力。53.利要求52所述的組合物，其中所述結合劑結合位于表1-3、或表4-6、或表7-9任一個中所列的AARS多肽獨特剪接點內的表位，或者結合該剪接位點的C端氨基酸序列。54.利要求52所述的組合物，其中所述結合劑結合包含選自以下的至少5個連續氨基酸的表位:SEQ.1D.N0.50、SEQ.1D.N0.52、SEQ.1D.N0.54、SEQ.1D.N0.56、SEQ.1D.N0.130、SEQ.1D.N0.132、SEQ.1D.N0.134、和 SEQ.1D.N0.136。55.利要求52所述的組合物，其拮抗所述AARS多肽的非常規活性。56.種分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)多肽，包含表1_3、或表4_6、或表7_9任一個中所列的AARS蛋白片段的氨基酸序列。57.利要求56所述的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)多肽，其中所述AARS多肽包含選自以下的氨基酸序列:SEQ.1D.No 12、SEQ.1D.N0.59、SEQ.1D.N0.43、SEQ.1D.N0.81 和SEQ.1D.N0.142。58.種分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)多肽，包含與表1_3、或表4_6、或表7_9任一個中的序列至少80%、85%、90%、95%、98%或100%同一的氨基酸序列。59.利要求58所述的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)多肽，其中所述AARS多肽選自:SEQ.1D.No 12、SEQ.1D.N0.59、SEQ.1D.N0.43、SEQ.1D.N0.81 和 SEQ.1D.N0.142。60.種分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)多肽，基本上由與表1_3、或表4_6、或表7_9任一個中的序列至少80%、85%、90%、95%、98%或100%同一的氨基酸序列組成。61.利要求60所述的分離的氨酰-tRNA合成酶(AARS)多肽，其中...
【專利技術屬性】
技術研發人員：萊斯利·安·格林尼，凱爾·P·基昂格，洪非，阿蘭·P·瓦瑟洛特，羅詠詩，杰弗里·D·沃特金斯，約翰·D·門德萊恩，謝麗爾·L·奎恩，
申請(專利權)人：ATYR醫藥公司，盤古生物制藥有限公司，
類型：
國別省市：
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