一種銀杏內酯有效部位檢測方法技術

本發明專利技術為一種銀杏內酯有效部位檢測方法。本發明專利技術涉及植物提取領域，具體涉及一種銀杏內酯的提取分離方法。本發明專利技術所解決的技術問題是提供一種銀杏內酯的提取分離方法，該提取分離方法可得到組分固定的銀杏內酯。該方法經提取、萃取、過柱、析晶、混晶步驟所得銀杏內酯中，含白果內酯(C15H18O8)25.0％～50.0％、銀杏內酯A(C20H24O9)20.0％～45.0％、銀杏內酯B(C20H24O10)10.0％～30.0％、銀杏內酯C(C20H24O11)5.0％～15.0％，且白果內酯、銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C總量大于95％。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及植物提取領域，具體涉及。
技術介紹
自上世紀60年代開始，許多國家采用現代分離技術對銀杏葉的化學成分進行研究，經藥理實驗和臨床驗證，發現銀杏葉的多方面生物活性與其所含特定化學成分有關。德國Dr.WillarSchwabe首次注冊了銀杏葉的一種簡單提取物，于1972年申請了專利(WSchwabe DE 176708和DE 2117429)，定名為EGb761，用于治療心腦血管疾病和神經系統疾病，具有顯著療效，且無毒副作用，銀杏內酯類化合物(ginkgolids)具有強血小板活化因子(PAF)拮抗作用。銀杏制劑被列為治療藥物的國家有德國、法國和中國，其他國家均用為保健食品或非處方用藥，美國開發出的銀杏保健食品已經獲得FDA批準。銀杏內酯屬于萜類化合物，稱為萜類內酯，由倍半萜內酯和二萜內酯組成，是銀杏葉中一類重要的活性成分。白果內酯(bilobalide)屬倍半職內酯，由R.T.Major于1967年和K.Weinges于1969年分離得到，目前從銀杏葉中發現的唯一的一個倍半職內酯化合物，銀杏內酯 A、B、C、M、J(ginkgolid A、B、C、M、J)為二萜內酯化合物，于 1932 年由 S.Furukawa首次從銀杏葉中分離出來，1967年才由K.Nakanish>M.Maruyama和K.0kabe等人進一步分離和確定其化學結構。從結構上看，白果內酯類分子骨架由15個碳原子組成，具有互相稠合在一起的4個五元環，其中有I個五元碳環，3個五元內酯碳環，五元環上連有I個天然產物中罕見的叔丁基。白果內酯有很強的生物活性，具有促進神經生長的作用，可防止腦細胞線粒體氧化應激引起的功能改變，改善老年記憶功能，防止老年癡呆的發生，以及防止腦、脊髓神經脫髓鞘作用，其神經營養、神經保護作用比銀杏內酯強。銀杏內酯B有抗炎、抗休克、保護心腦血管、治療急性胰腺炎等作用。而銀杏內酯類化合物的分子骨架由20個碳原子組成，具有6個五元環，其中有2個五元碳環，3個五元內酯環，I個四氫呋喃環，兩個五元碳環以螺環的形式連接在一起，其余的環以稠合的方式連接，形成一個剛性蘢狀的特殊立體化學結構。銀杏內酯分子中均具有天然產物中罕見的叔丁基。銀杏內酯包括二萜類和倍半萜類內酯，二萜類內酯主要有銀杏內酯A、B、C、J、M等，半萜類內酯有白果內酯。自20世紀70年代初發現了PAF后，藥理學家對銀杏內酯進行了研究，明確銀杏萜內酯是強血小板活化因子拮抗劑，免疫系統、中樞神經系統、缺血損傷有保護作用，并有抗休克、抗過敏及抗炎作用。銀杏內酯A、B、C、M、J結構差別在于含有的羥基數目和羥基連接的位置不同。銀杏內酯均為強血小板活化因子拮抗劑，是銀杏葉中特殊生理活性的關鍵成分。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
銀杏內酯有效部位的檢測方法，其包括以下分項檢測：?a)性狀：類白色或微黃色結晶性粉末；?b)水分：60℃減壓干燥減失重量小于5.0％；?c)蛋白質：在595nm波長處吸光度小于0.05；?d)鞣質、樹脂、草酸鹽、鉀離子的檢測：?鞣質：取蛋白質檢查項供試品溶液1ml，加入稀醋酸1滴，再加明膠氯化鈉試液5滴，搖勻，放置10分鐘，未出現渾濁或沉淀；?樹脂：取蛋白質檢查項供試品溶液5ml，加鹽酸1滴，放置30分鐘，無樹脂狀物質析出；?草酸鹽：取蛋白質檢查項供試品溶液2ml，用稀鹽酸調節pH值至1～2，濾過，濾液用氨水調節pH值為5～6，加3％氯化鈣溶液3滴，放置10分鐘，未出現渾濁或沉淀；?鉀離子：取蛋白質檢查項供試品溶液2ml，置10ml納氏比色管中，加堿性甲醛溶液0.6ml、3％EDTA溶液2滴、3％四苯硼鈉溶液0.5ml，加水稀釋至10ml，另取標準氯化鉀溶液0.8ml，同法試驗，供試品溶液的濁度不高于對照溶液；?e)殘留溶劑?(1)乙醇、乙酸乙酯和正己烷：含乙醇和乙酸乙酯均小于0.5％，正己烷小于0.029％；?(2)樹脂殘留量：含己內酰胺小于0.0015％；?f)總銀杏酸：含總銀杏酸小于5ppm；?g)大分子和聚合物：凝膠色譜法測定無殘留大分子和聚合物，LC?MS法測定，結果無分子量大于1000的大分子和聚合物，?h)重金屬：小于10ppm；?i)砷鹽：小于2ppm；?j)異常毒性：制成每1ml中含0.2mg的溶液，符合靜脈注射法給藥；?k)指紋圖譜：HPLC法測定，記錄60分鐘的色譜圖，按中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統，四個共有峰相似度大于0.95；?1)含量：HPLC法測定，按干燥品計算，含白果內酯(C15H18O8)應為25.0％～50.0％、銀杏內酯A(C20H24O9)應為20.0％～45.0％、銀杏內酯B(C20H24O10)應為10.0％～30.0％、銀杏內酯C(C20H24O11)應為5.0％～15.0％，且白果內酯、銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C總量大于95％；?m)熱原檢查：體溫升高低于0.6℃。...

【技術特征摘要】
1.杏內酯有效部位的檢測方法，其包括以下分項檢測: a)性狀:類白色或微黃色結晶性粉末； b)水分:60°C減壓干燥減失重量小于5.0% ; c)蛋白質:在595nm波長處吸光度小于0.05 ； d)鞣質、樹脂、草酸鹽、鉀離子的檢測: 鞣質:取蛋白質檢查項供試品溶液1ml，加入稀醋酸I滴，再加明膠氯化鈉試液5滴，搖勻，放置10分鐘，未出現渾濁或沉淀； 樹脂:取蛋白質檢查 項供試品溶液5ml，加鹽酸I滴，放置30分鐘，無樹脂狀物質析出；草酸鹽:取蛋白質檢查項供試品溶液2ml，用稀鹽酸調節pH值至I 2，濾過，濾液用氨水調節pH值為5 6，加3%氯化鈣溶液3滴，放置10分鐘，未出現渾濁或沉淀； 鉀離子:取蛋白質檢查項供試品溶液2ml，置IOml納氏比色管中，加堿性甲醛溶液0.6ml,3% EDTA溶液2滴、3%四苯硼鈉溶液0.5ml，加水稀釋至10ml，另取標準氯化鉀溶液0.8ml,同法試驗，供試品溶液的濁度不高于對照溶液； e)殘留溶劑 (1)乙醇、乙酸乙酯和正己烷:含乙醇和乙酸乙酯均小于0.5%，正己烷小于0.029% ； (2)樹脂殘留量:含己內酰胺小于0.0015% ； f)總銀杏酸:含總銀杏酸小于5ppm； g)大分子和聚合物:凝膠色譜法測定無殘留大分子和聚合物，LC-MS法測定，結果無分子量大于1000的大分子和聚合物， h)重金屬:小于IOppm； i)砷鹽:小于2ppm； j)異常毒性:制成每Iml中含0.2mg的溶液，符合靜脈注射法給藥；k)指紋圖譜:HPLC法測定，記錄60分鐘的色譜圖，按中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統，四個共有峰相似度大于0.95 ； I)含量:HPLC法測定，按干燥品計算，含白果內酯(C15H18O8)應為25.0% 50.0%、銀杏內酯A (C20H24O9)...

【專利技術屬性】
技術研發人員：孫毅，朱永紅，童正兵，王婕，
申請(專利權)人：成都百裕科技制藥有限公司，
類型：發明
國別省市：