一種測定水稻花藥中花粉數的方法技術

本發明專利技術涉及一種測定水稻花藥中花粉數的方法，其特征在于在分劃板的居中位置用金屬烙線制作出168個2280μm×3048μm的網格；在分劃板上滴1-2滴濃度為0.1％--0.3％的I2-KI溶液，將1個花藥用鑷子在I2-KI溶液中的不同位置反復地擠，直至花藥中的花粉完全散出，再在原溶液中加入1-2滴濃度為1％的I2-KI溶液使花粉的染色加深；將花粉樣本均勻地分布在分劃板的網格中；采用數碼顯微鏡對分劃板中的網格按序逐一進行完全拍照記錄；采用圖像分析軟件對所拍圖片中的花粉按活力花粉、失活花粉及總花粉數進行分類計數。本發明專利技術能準確地測定花藥中的活力花粉與失活花粉數，具有測定方法便捷、數據可靠、測定效率高的特點。

【技術實現步驟摘要】

:本專利技術涉及，屬水稻作物種植研究應用

技術介紹
:水稻平均每一花藥中的花粉數大約有800-2500粒，花粉數是水稻品種重要的生殖性能指標之一；水稻品種每藥花粉數及可育花粉數在逆境條件下形成時，常會發生一定變化，因此，花粉數也成為衡量品種對逆境反應的重要特征指標。此外，在雜交水稻的制種生產中，父本有效產粉量也是確定制種田父母本行比的技術依據。因此，水稻研究和生產中常涉及對水稻每藥花粉數的測定。目前用于測定水稻每藥花粉總數的方法主要有三種:(I)人工計數法:將待測花藥直接放在滴有染色液的載玻片上用鑷子搗碎，使花粉充分散出，然后在普通光學顯微鏡下，采用分視野抽樣法，人工數出每一視野中的花粉數和活力花粉數。懸浮液法:首先配制能讓花粉粒懸浮且不引起花粉變質的懸浮液，如甘油、酒精、碘一碘化鉀溶液的混合液、洗衣粉水等；取一定數目的花藥，放入該液體中搗碎，攪拌懸浮液使花粉均勻分布，取一定量的混合液在顯微鏡下多視野抽樣計數獲得樣本花粉數，然后通過所取混合液體積占總混合液體積的比例來推算花粉數和可育花粉數。(3)電腦一掃描儀掃描法:將花藥置于滴有1% I2-KI溶液的載玻片上中，弄破花藥，令花粉逸出，待花粉沉降后輕輕蓋上蓋片，用電腦一掃描儀掃描，根據像素點計數產粉量。上述方法存在的不足之處在于:方法(I)由于水稻的花粉量大，在足夠大的分辨率下，一個顯微視野不能夠完全顯示出待測樣本，常常采用多視野觀測，所以，傳統的方法只能選擇分視野抽樣方法，這樣使得人工計數的工作量很大，計數的準確性低，一次測定的花藥量十分有限。方法(2)存在的問題是準確配制能夠使花粉均勻分布的懸浮液體比較困難，因為該液體的比重必須與花粉質量相匹配，而單粒花粉的質量測定比較困難，且不同品種的花粉的質量可能存在較大的差異；同時此方法的測定主要是通過測定一定視野的花粉數后再根據其體積換算得到每藥的花粉總數，存在一定誤差。方法(3)由于掃描儀不具備顯微功能，而花粉很小，對掃描的花粉照片計數時存在很大誤差；此外，掃描過程中也存在雜質干擾，同時失活花粉在碘一碘化鉀溶液中顏色較淺，也會給準確計數造成困難。因此，上述方法在測定準確性和測定效率等方面均存在明顯的不足，不能滿足水稻研究和生產實際工作的要求
技術實現思路
:為了克服現有技術的不足，本專利技術的目的在于提供，能準確地測定花藥中的活力花粉與失活花粉數，具有測定方法便捷、數據可靠、測定效率高的特點。本專利技術是通過如下技術方案來實現上述目的的。本專利技術提供的，包括如下步驟:(I)、分劃板的制作:分劃板用長為73mm、寬為38mm、厚為Imm的玻片制成；在分劃板的居中位置用金屬烙線制作出168個2280 μ mX 3048 μ m的網格；網格的線寬精度為6± 1.5 μ m，線高不超過2 μ m0(2)、取粉與制片:在分劃板上滴1-2滴濃度為0.1 % —0.3%的I2-KI溶液，然后從一個穎花中取I個花藥用鑷子在I2-KI溶液中的不同位置反復地擠，直至花藥中的花粉完全散出，取出殘留的花藥外壁；再在原溶液中加入1-2滴濃度為1%的I2-KI溶液使花粉的染色加深。(3)、分劃與拍照:將花粉樣本均勻地分布在分劃板的網格中；采用數碼顯微鏡對分劃板中的網格按序逐一進行完全拍照記錄。⑷、計數:采用圖像分析軟件對所拍圖片中的花粉按活力花粉、失活花粉及總花粉數進行分類計數。本專利技術與現有的技術相比具有如下有益效果:1、由于對花藥中散出的所有花粉都進行了拍照及數碼統計，實現了對每藥花粉數的完全計數。2、采用分步染色和數碼區分統計計數技術，能得到每一花藥中準確的活力花粉與失活花粉數。3、由于數據的最后統計是通過分析照片所得的，數據保存完好。4、測定方法便捷、數據可靠、測定效率高。附圖說明:圖1為分劃板的結構規格示意圖。圖2為分劃板中一個網格拍照得到的照片效果圖(X 100倍)。圖3為圖像分析軟件自動分別統計活力花粉數和失活花粉數的效果圖。在圖中:A為失活花粉，B為活力花粉。具體實施方式:實施本專利技術，可按以下步驟進行:(I)、分劃板的制作:分劃板用長為73mm、寬為38mm、厚為Imm的玻片制成；在分劃板的居中位置用金屬烙線制作出168個2280 μ mX3048 μ m的網格；網格的線寬精度為6± 1.5 μ m，線高不超過2 μ m0(2)、取粉與制片:試樣的取樣:取次日即將開放的水稻穎花，將其置于培養皿中，然后放于冰盒中保濕帶回實驗室；或者將整個穗從倒一節拔出，去掉劍葉放入裝有水的瓶中帶回實驗室。在分劃板上滴1-2滴濃度為0.1% —0.3%的I2-KI溶液，然后從一個穎花中取I個花藥用鑷子在I2-KI溶液中的不同位置反復地擠，直至花藥中的花粉完全散出，取出殘留的花藥外壁；再在原溶液中加入1-2滴濃度為1%的I2-KI溶液使花粉的染色加深。(3)、分劃與拍照:將花粉樣本均勻地分布在分劃板的網格中；將分劃板置于載物臺上，采用超景深數碼顯微鏡對分劃板中的網格按序逐一進行完全拍照記錄，拍照時注意調整光強的變化，使背景與花粉能夠很好的區分開。⑷、計數:將所拍照片輸入到計算機中，采用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件的count/size功能對所拍照片進行分析，對圖片中的花粉按活力花粉、失活花粉及總花粉數分類記數；對軟件分析計數中極少數的重復計數或漏數，采用人工判斷方法增加或減少計數。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種測定水稻花藥中花粉數的方法，其特征在于包括以下步驟：(1)、分劃板的制作：分劃板用長為73mm、寬為38mm、厚為1mm的玻片制成；在分劃板的居中位置用金屬烙線制作出168個2280μm×3048μm的網格；(2)、取粉與制片：在分劃板上滴1?2滴濃度為0.1％??0.3％的I2?KI溶液，然后從一個穎花中取1個花藥用鑷子在I2?KI溶液中的不同位置反復地擠，直至花藥中的花粉完全散出，取出殘留的花藥外壁；再在原溶液中加入1?2滴濃度為1％的I2?KI溶液使花粉的染色加深；(3)、分劃與拍照：將花粉樣本均勻地分布在分劃板的網格中；采用數碼顯微鏡對分劃板中的網格按序逐一進行完全拍照記錄；(4)、計數：采用圖像分析軟件對所拍圖片中的花粉按活力花粉、失活花粉及總花粉數進行分類計數。

【技術特征摘要】
1.一種測定水稻花藥中花粉數的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)、分劃板的制作: 分劃板用長為73_、寬為38_、厚為Imm的玻片制成；在分劃板的居中位置用金屬烙線制作出168個2280 μ mX 3048 μ m的網格； (2)、取粉與制片: 在分劃板上滴1-2滴濃度為0.1% —0.3%的I2-KI溶液，然后從一個穎花中取I個花藥用鑷子在I2-KI溶液中的不同位置反復地擠，直至花藥中的花粉完全散出，取出殘留的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：田小海，羅海偉，吳晨陽，溫嬋，馬國輝，鄒華文，徐延浩，
申請(專利權)人：長江大學，
類型：發明
國別省市：