本發(fā)明專利技術(shù)公開一種反芻動物復(fù)合微生態(tài)制劑，制備方法為：將枯草芽胞桿菌CGMCC1.257、嗜酸乳桿菌LB-1、植物乳桿菌WZ47-1、啤酒酵母CGMCC2.597和產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180經(jīng)液體一級種子培養(yǎng)和液體二級培養(yǎng)后，取嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、啤酒酵母和產(chǎn)朊假絲酵母的二級菌種按體積質(zhì)量比5%的接種量接種至固體混合發(fā)酵培養(yǎng)基（麩皮60wt%，豆粕25wt%，玉米粉15wt%），于32~35℃發(fā)酵6h，再接種枯草芽胞桿菌的二級菌種，混勻，繼續(xù)發(fā)酵42h，即得成品。本發(fā)明專利技術(shù)所含菌株耐酸耐膽堿性強、相互之間無拮抗性、安全性好，制備工藝簡單，成品活菌含量高，可顯著提高反芻動物生產(chǎn)性能和免疫力。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于微生物發(fā)酵及微生態(tài)制劑
，具體涉及包含多種益生菌的針對反芻動物的復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
針對反芻動物(牛、羊)疾病的預(yù)防和治療，目前國內(nèi)外獸醫(yī)臨床主要采用的是在飼料中添加抗生素和化學(xué)合成藥物來進行治療。由于反芻動物擁有特殊的消化生理結(jié)構(gòu)，其瘤胃是一個天然發(fā)酵罐，分布有成千上萬種有益微生物和纖毛蟲，長期使用抗生素和化學(xué)合成藥物會導(dǎo)致機體正常菌群失調(diào)，易導(dǎo)致二重感染，另外，抗生素還會在畜產(chǎn)品(肉、奶、皮毛等)中產(chǎn)生殘留，進而通過食物鏈進入人體內(nèi)，威脅人類健康。世界各國飼料行業(yè)對抗生素禁用和限用的呼聲越來越高，并禁用了一批毒性較大和殘留較大的藥物，因此，改變養(yǎng)殖觀念，以提高動物機體免疫力為先，“預(yù)防為主，防重于治”，并開發(fā)應(yīng)用無毒無藥殘的新型綠色飼料添加劑成為必然趨勢。微生態(tài)制劑由益生菌經(jīng)工業(yè)化發(fā)酵制備得到，其包含多種有益微生物及其代謝產(chǎn)物，可直接飼喂動物，通過維持腸道內(nèi)微生態(tài)平衡而發(fā)揮作用，具有防病、增強機體免疫力、促進生長、增加體重等多種功能，是一種多功能、無毒無害、無殘留、不污染環(huán)境的綠色飼料添加劑。目前，市場上的微生態(tài)制劑主要存在以下問題: (1)主要針對單胃動物，不適宜于反芻動物復(fù)雜多變的瘤胃內(nèi)環(huán)境，所含各種益生菌對胃酸和膽堿耐受性不良，活菌數(shù)量少，在消化道內(nèi)難以保持活性； (2)缺乏益生菌間拮抗性的測試和研究，往往只是將各種菌株進行簡單的復(fù)配，未充分考慮到菌種協(xié)同和拮抗效應(yīng)，配比不科學(xué)，影響實際應(yīng)用效果； (3)缺乏菌株毒性測試，存在潛在的食用安全隱患； (4)缺乏針對反芻動物免疫增強作用的應(yīng)用效果檢測數(shù)據(jù)，尤其是針對反芻動物特有常見疾病(如口蹄疫)的免疫防御效果，實際免疫促進效果有待考察； (5)涉及菌株種類較多，發(fā)酵工序復(fù)雜，費時費力。綜上所述，開發(fā)一種針對反芻動物的耐酸耐膽鹽、各益生菌間無拮抗性、安全性好且具有良好促生長以及免疫增強效果的微生態(tài)制劑十分必要。
技術(shù)實現(xiàn)思路
針對現(xiàn)有微生態(tài)制劑存在的上述缺陷，本專利技術(shù)的目的是提供一種反芻動物復(fù)合微生態(tài)制劑及其應(yīng)用。該復(fù)合微生態(tài)制劑所含菌株耐酸耐膽堿性強、相互之間無拮抗性、安全性好，制備工藝簡單，成品活菌含量高，可顯著提高反芻動物生產(chǎn)性能和免疫力。本專利技術(shù)的技術(shù)方案如下: 一種反芻動物復(fù)合微生態(tài)制劑，其制備方法如下:將枯草芽胞桿菌CGMCC1.257、嗜酸乳桿菌LB-1、植物乳桿菌WZ47-1、啤酒酵母CGMCC2.597和產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180分別經(jīng)液體一級種子培養(yǎng)和液體二級培養(yǎng)后得到二級菌種，再取所述嗜酸乳桿菌LB-1、植物乳桿菌WZ47-1、啤酒酵母CGMCC2.597和產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180的二級菌種分別按體積質(zhì)量比5%的接種量接種至固體混合發(fā)酵培養(yǎng)基，混勻，于32 35°C發(fā)酵6h，然后按相同的接種量接種所述枯草芽胞桿菌CGMCC1.257的二級菌種，混勻，繼續(xù)發(fā)酵42h，取發(fā)酵物于4 8°C真空密封保存，即得復(fù)合微生態(tài)制劑成品；所述固體混合發(fā)酵培養(yǎng)基所含成分按重量百分?jǐn)?shù)計為:麩皮60%，豆柏25%，玉米粉15% ;所述復(fù)合微生態(tài)制劑的活菌含量分別為:枯草芽胞桿菌CGMCC1.257和植物乳桿菌WZ47-1不低于108cfu/g，嗜酸乳桿菌LB-1不低于IO7Cfu/g、啤酒酵母CGMCC2.597和產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180不低于106cfu/g。其進一步的技術(shù)方案為: 所述枯草芽胞桿菌CGMCC1.257的液體一級種子培養(yǎng)和液體二級培養(yǎng)方法如下:挑取營養(yǎng)瓊脂斜面上生長的菌種接種于2(T30ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，于34 37°C，180 r/min振蕩培養(yǎng)18 24h，得到一級種子液；再取l(T25ml該一級種子液接種于20(T250ml營養(yǎng)肉湯培基中繼續(xù)振蕩培養(yǎng)18 24h，得到二級菌種。所述嗜酸乳桿菌LB-1和植物乳桿菌WZ47-1的液體一級種子培養(yǎng)和液體二級培養(yǎng)方法如下:分別挑取MRS斜面上生長的嗜酸乳桿菌LB-1和植物乳桿菌WZ47-1并接種于2(T30mlMRS肉湯培養(yǎng)基，于34 37°C，180 r/min振蕩培養(yǎng)24 48h，得到一級種子液；再取l(T25ml各菌株的一級種子液分別接種于20(T250mlMRS肉湯培養(yǎng)基中繼續(xù)振蕩培養(yǎng)24 48h，得到二級菌種。所述啤酒酵母CGMCC2.597和產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180的液體一級種子培養(yǎng)和液體二級培養(yǎng)方法如下:分別挑取孟加拉紅培養(yǎng)基斜面上生長的啤酒酵母CGMCC2.597和產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180并接種于2(T30ml麥芽汁培養(yǎng)基，于28 36°C，180 r/min振蕩培養(yǎng)24 30h，得到一級種子液；再取15 30ml各菌株的一級種子液分別接種于20(T250ml麥芽汁培養(yǎng)基，繼續(xù)振蕩培養(yǎng)24 36h，得到二級菌種。所述二級菌種的活菌含量均為IO8 cfu/ml。所述固體發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為34 35°C。本專利技術(shù)還提供一種上述反芻動物復(fù)合微生態(tài)制劑在提高反芻動物生產(chǎn)性能和免疫力上的應(yīng)用，是將所述復(fù)合微生態(tài)制劑作為飼料添加劑按照每頭4(T45g的量添加到反芻動物基礎(chǔ)日糧中進行飼喂。本專利技術(shù)的有益技術(shù)效果如下: 本專利技術(shù)針對反芻動物特有的生理消化特點,提供一種專門針對反芻動物的復(fù)合微生態(tài)制劑，與現(xiàn)有市售微生態(tài)制劑相比，具有以下突出優(yōu)點: (I)本專利技術(shù)所含菌株對酸性和膽鹽的耐受性好，適宜于反芻動物復(fù)雜多變的瘤胃內(nèi)環(huán)境，可保證在消化道內(nèi)的有效活菌數(shù)量。(2)本專利技術(shù)充分考慮到菌種間的協(xié)同和拮抗效應(yīng)，選用相互之間完全無拮抗性的五株益生菌，通過科學(xué)配比可起到協(xié)同增效作用。(3)本專利技術(shù)所選菌株菌為“飼料添加劑品種目錄(2008年)”中規(guī)定的菌株，且經(jīng)過毒性測試證明其無毒無害，安全性好。(4)本專利技術(shù)采固體混合發(fā)酵的制備方法，預(yù)先篩選出最佳混合發(fā)酵培養(yǎng)條件，將五株菌置于同一固體發(fā)酵培養(yǎng)基進行同時發(fā)酵，避免了各菌株分別單獨發(fā)酵的繁瑣工序，操作簡便，制備工藝簡單，成品活菌含量高。(5)養(yǎng)殖生產(chǎn)實踐證明:本專利技術(shù)復(fù)合微生態(tài)制劑可顯著提高反芻動物的綜合生產(chǎn)性能，促生長效果明顯；同時能有效增強機體淋巴細(xì)胞和吞噬細(xì)胞活性，進而增強機體免疫力和抗病力，符合“預(yù)防為主，防重于治”的現(xiàn)代養(yǎng)殖理念，具有廣闊的應(yīng)用前景。具體實施例方式以下通過實施例對本專利技術(shù)進行具體說明。本專利技術(shù)實施例所使用生物材料如下: 嗜酸乳桿菌LB-1和植物乳桿菌WZ47-1均由本申請人所在的內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院預(yù)防教研室微生物實驗中心分離、鑒定和真空冷凍干燥保藏，并已在下述非專利文獻公開:嗜酸乳桿菌LB-1 (2005年內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文《奶牛微生態(tài)制劑的研制》，作者:王美秀)，植物乳桿菌WZ47-1 (2006年內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文《內(nèi)蒙古牧區(qū)傳統(tǒng)乳制品中乳桿菌生物學(xué)特性及其益生作用的研究》，作者:周雨霞)，以下分別簡稱嗜酸乳桿菌和植物乳桿菌；枯草芽孢桿菌CGMCC1.257、啤酒酵母CGMCC2.597、產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180均購自中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)，并由本申請人所在實驗中心(同上)真空冷凍干燥保藏，以下分別簡稱枯草芽孢桿菌、啤酒酵母、產(chǎn)朊假絲酵母；致病性大腸桿菌CVCC本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種反芻動物復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于制備方法如下：將枯草芽胞桿菌CGMCC1.257、嗜酸乳桿菌LB?1、植物乳桿菌WZ47?1、啤酒酵母CGMCC2.597和產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180分別經(jīng)液體一級種子培養(yǎng)和液體二級培養(yǎng)后得到二級菌種，再取所述嗜酸乳桿菌LB?1、植物乳桿菌WZ47?1、啤酒酵母CGMCC2.597和產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180的二級菌種分別按體積質(zhì)量比5%的接種量接種至固體混合發(fā)酵培養(yǎng)基，混勻，于32~35℃發(fā)酵6h，然后按相同的接種量接種所述枯草芽胞桿菌CGMCC1.257的二級菌種，混勻，繼續(xù)發(fā)酵42h，取發(fā)酵物于4~8℃真空密封保存，即得復(fù)合微生態(tài)制劑成品；所述固體混合發(fā)酵培養(yǎng)基所含成分按重量百分?jǐn)?shù)計為：麩皮60%，豆粕25%，玉米粉15%；所述復(fù)合微生態(tài)制劑的活菌含量分別為：枯草芽胞桿菌CGMCC1.257和植物乳桿菌WZ47?1不低于108cfu/g，嗜酸乳桿菌LB?1不低于107cfu/g、啤酒酵母CGMCC2.597和產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180不低于106cfu/g。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種反芻動物復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于制備方法如下:將枯草芽胞桿菌CGMCC1.257、嗜酸乳桿菌LB-1、植物乳桿菌WZ47-1、啤酒酵母CGMCC2.597和產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180分別經(jīng)液體一級種子培養(yǎng)和液體二級培養(yǎng)后得到二級菌種，再取所述嗜酸乳桿菌LB-1、植物乳桿菌WZ47-1、啤酒酵母CGMCC2.597和產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180的二級菌種分別按體積質(zhì)量比5%的接種量接種至固體混合發(fā)酵培養(yǎng)基，混勻，于32 35°C發(fā)酵6h，然后按相同的接種量接種所述枯草芽胞桿菌CGMCC1.257的二級菌種，混勻，繼續(xù)發(fā)酵42h，取發(fā)酵物于4 8°C真空密封保存，即得復(fù)合微生態(tài)制劑成品；所述固體混合發(fā)酵培養(yǎng)基所含成分按重量百分?jǐn)?shù)計為:麩皮60%，豆柏25%，玉米粉15%;所述復(fù)合微生態(tài)制劑的活菌含量分別為:枯草芽胞桿菌CGMCC1.257和植物乳桿菌WZ47-1不低于108cfu/g，嗜酸乳桿菌LB-1不低于107cfu/g、啤酒酵母CGMCC2.597和產(chǎn)朊假絲酵母CGMCC2.1180不低于IO6Cfu/g°2.根據(jù)權(quán)利要求1所述反芻動物復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于所述枯草芽胞桿菌CGMCC1.257的液體一級種子培養(yǎng)和液體二級培養(yǎng)方法如下:挑取營養(yǎng)瓊脂斜面上生長的菌種接種于2(T30ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，于34 37°C，180 r/min振蕩培養(yǎng)18 24h，得到一級種子液；再取l(T25ml該一級種子液接種于20(T250ml營養(yǎng)肉湯培基中繼續(xù)振蕩培養(yǎng)18 24h，得到二級菌種。3....
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：郝永清，劉志偉，徐春光，張愛榮，陳曉杰，范麗霞，張萍慧，王美秀，
申請(專利權(quán))人：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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