靶向氣體填充微囊制造技術

靶向氣體填充微囊與包含氨基酸序列的多肽結合，所述序列顯示出對于選擇素特別是p-選擇素的結合親和力。氣體填充微囊可以用于超聲成像中。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】靶向氣體填充微囊
本專利技術一般而言涉及特別用于在診斷方法中使用的靶向氣體填充微囊和含有所述微泡的水混懸液。專利技術背景近年來造影劑的快速發展已生成許多不同制劑，其在人或動物體的器官和組織的對比增強成像中是有用的。最近以來，已關注了所謂的“分子成像”，其中合適的靶特異性組分用于造影劑的制劑中，用于允許器官或組織的選擇性對比增強成像。此外，任選與分子成像組合的造影劑制劑的治療用途也已得到描述。特別對于超聲對比成像有用的造影劑類別包括在水介質中分散的納米和/或微米大小的氣泡懸液。特別有利的是其中氣泡例如通過使用乳化劑、油、增稠劑或糖，或者通過在多種系統中誘陷或封裝氣體或其前體得到穩定化的那些制劑。這些穩定化的氣泡一般在本領域中由多種術語提及，一般取決于用于其制備的穩定化材料；這些術語包括例如“微球體”、“微泡”、“微膠囊”或“微球”。如本文使用的術語“氣體填充微囊”或簡短地“微囊”包括上述術語中的任何。氣體填充微囊的制劑可以適當地進行修飾，用于改善診斷效應（例如通過分子成像）和/或用于治療目的，例如藥物遞送和/或血栓溶解。例如，微囊可以與治療劑和/或特異性組分結合（例如通過包括在其邊界外殼中），所述特異性組分能夠連接至在患者體內的確定靶（稱為“靶向配體”）。靶向配體的例子包括例如肽、蛋白質、抗體、適體或碳水化合物，其能夠與在致病過程例如血管生成、炎癥或血栓形成期間由器官或組織表達的特異性受體結合。選擇素（特別是P-、L-和E-選擇素）是在炎癥過程期間尤其通過血管內皮表達的細胞粘附分子。選擇素配體且特別是P-選擇素糖蛋白配體-1（PSGL-1：GenBank登記號Q14242.1）在所有白細胞（嗜中性細胞、單核細胞和大多數淋巴細胞）和髓樣細胞上組成性表達。像這樣，它在這些細胞與表達P-選擇素以及E和L-選擇素（盡管具有更低親和力）的活化血小板或內皮的栓系中起關鍵作用。P-選擇素配體的例子例如公開于美國專利號5,840,679中。國際專利申請公開號WO2008/131217公開了包含針對P-選擇素的靶向配體的微泡組合物。特別地，靶向配體是包含P-選擇素配體和二聚結構域的融合蛋白。在特定實施方案中，該申請公開了重組P-選擇素配體的用途，其由在融合至人IgG1（rPSGL-Ig）的Fc部分的選擇素結合糖形中的PSGL-1的氨基末端區域組成，以經由與含生物素微泡結合的生物素-鏈霉親和素綴合。雖然所述申請未公開P-選擇配體的任何確切序列，但它參考由美國專利申請公開號2003/0166521公開的P-選擇配體及其片段的例子。US2003/0166521公開了通過截短成熟PSGL-1的N末端47個氨基酸且將所述PSGL-1的N末端47個氨基酸連接至人免疫球蛋白G-1（IgG1）的Fc部分產生的PSGL-1融合蛋白（dimPSGL-1），也稱為重組PSGL-Ig（或rPSGL-Ig）。申請人目前已觀察到當與荷有完全蛋白質的微囊相比較時，僅荷有所述rPSGL-1蛋白質的片段的微囊可以具有一些優點，例如在結合功效方面和/或在含有微囊的水混懸液的穩定性方面。專利技術概述本專利技術的一個方面涉及與多肽結合的氣體填充微囊的水混懸液，所述多肽由至多200個氨基酸殘基的序列組成，且包含如SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸5-16。優選地，所述多肽更優選通過共價鍵與微囊的組分結合。優選地，所述多肽包含如SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸1-19，更優選如SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸5-41，且甚至更優選如SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸1-47。根據優選實施方案，所述多肽包含至多100個氨基酸殘基，更優選至多75個氨基酸殘基。根據優選實施方案，所述多肽由式（I）的氨基酸序列組成：（XA）n–Y–（XB）m（I）其中：（XA）n代表n個氨基酸XA的序列，包含如SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸5-16，其中：p是12–199的整數；和XA代表除了賴氨酸外的任何氨基酸；（XB）m代表m個氨基酸XB的序列，其中；m是0–10的整數，條件是總和m+n至多是199；和XB代表除了賴氨酸和半胱氨酸外的任何氨基酸；和Y代表包含用于使多肽與微囊的組分結合的反應部分的氨基酸。優選地，Y殘基的反應部分是–NH2或–SH；更優選地Y是賴氨酸或半胱氨酸，甚至更優選賴氨酸。根據進一步優選實施方案，所述多肽由式（II）的序列代表：（X1）p–[（C–（X2）a]q–[（C–（X3）b]r–Y–（X4）s（II）其中C代表半胱氨酸；Y代表賴氨酸或半胱氨酸，優選賴氨酸；（X1）p代表p個氨基酸X1的序列，包含如SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸5-16，（X2）a代表a個氨基酸X2的序列，（X3）b代表b個氨基酸X3的序列，（X4）s代表s個氨基酸X2的序列，其中：X1、X2、X3、X4獨立地代表除了賴氨酸和半胱氨酸外的任何氨基酸；n是12–199的整數，優選12–99，更優選12-74；a和b獨立地是0–50，優選0–20且更優選0–10的整數；q和r獨立地是0或1，至少是1；和s是0–10的整數；條件是總和p+（a·q）+（b·r）+s至多是199，優選至多是99且甚至更優選74。上文舉例說明的多肽優選包含與序列的氨基酸結合的至少一個O-聚糖部分和/或至少一個硫酸殘基。根據本專利技術的優選實施方案，上文舉例說明的多肽是二聚體形式，優選是同源二聚體形式。根據特別優選的實施方案，所述多肽由如SEQIDNO:3中所示的序列組成。優選地，序列的兩個半胱氨酸殘基可以結合相應序列的分別半胱氨酸殘基，以提供以二聚體形式的多肽。本專利技術進一步涉及以干粉或凍干殘渣形式的所述氣體填充微囊的前體。通過使其與生理學可接受的含水載體接觸，所述前體特別是可重構的，以在氣體的存在下在混合物攪動后形成所述氣體填充微囊的水混懸液。本專利技術的進一步方面涉及包含所述氣體填充微囊的前體和生理學可接受的含水載體的藥物試劑盒。專利技術詳述術語“氣體填充微囊”包括包含由穩定化材料的外殼或層（包括成膜層）圍繞的微米或納米大小的氣體泡的任何結構。該術語包括本領域稱為氣體填充脂質體、微泡、微球體、微球或微膠囊的那種。微囊一般懸浮于含水載體中，特別是生理學可接受的含水載體中。穩定化材料可以是本領域一般已知的任何材料，包括例如表面活性劑、脂質、鞘脂、寡聚脂、磷脂、蛋白質、多肽、碳水化合物和合成或天然聚合材料。術語“微泡”包括懸浮于含水載體中的氣體泡，其在氣體/液體界面由極薄的外殼（薄膜）結合，涉及沉積在氣體與液體界面上的穩定化兩性分子材料（本領域有時也稱為“消失式”外殼）。微泡混懸液可以通過下述進行制備：使其合適前體例如粉末狀兩性分子材料（例如冷凍干燥的預形成的脂質體或冷凍干燥的或噴霧干燥的磷脂分散體或溶液）與空氣或其他氣體接觸，且隨后與含水載體接觸，同時攪動以生成微泡混懸液，其隨后可以施用，優選在其制備后不久。氣體微泡的水混懸液、其前體及制備的例子公開于例如US5,271,928、US5,445,813、US5,413,774、US5,556,610、5,597,549、US5,827,504和WO04/069284中，其通過引用整體合并入本文。術語“微球”或“微膠囊”包括其中氣體泡由天然或合成聚合物的脂本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.08.09 EP 10172318.71.包含氣體填充微囊的水混懸液，所述微囊包含靶向構建體，該靶向構建體包含：a)兩性分子化合物；和b)同源二聚體多肽，所述同源二聚體多肽由兩個多肽單體組成，其中每個多肽由至多200個氨基酸殘基組成，包含單個賴氨酸殘基、至少一個半胱氨酸殘基和SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸1-19；其中所述多肽單體通過各自的半胱氨酸殘基形成二硫橋；其中所述同源二聚體多肽通過所述賴氨酸殘基上的氨基反應部分與所述兩性分子化合物共價結合。2.根據權利要求1的水混懸液，其中所述多肽包含SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸1-47。3.根據前述權利要求1的水混懸液，其中所述多肽包含至多100個氨基酸殘基。4.根據前述權利要求1的水混懸液，其中所述多肽包含至多75個氨基酸殘基。5.根據前述權利要求2的水混懸液，其中所述多肽包含至多100個氨基酸殘基。6.根據前述權利要求2的水混懸液，其中所述多肽包含至多75個氨基酸殘基。7.根據權利要求1的水混懸液，其中所述多肽由SEQIDNO:3中所示的氨基酸序列組成。8.根據權利要求1的水混懸液，其中所述多肽由式(I)的氨基酸序列組成：(XA)n–Y–(XB)m(I)其中：(XA)n代表n個氨基酸XA的序列，包含SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸1-19和至少一個半胱氨酸殘基，其中：n是12–199的整數；和XA是除了賴氨酸外的任何氨基酸；(XB)m代表m個氨基酸XB的序列，其中；m是0–10的整數，條件是總和m+n至多是199；和XB是除了賴氨酸和半胱氨酸外的任何氨基酸；和Y是半胱氨酸或賴氨酸。9.根據權利要求8的水混懸液，其中(XA)n包含SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸1-47。10.根據權利要求8的水混懸液，其中n是12–99的整數，并且m+n至多是99。11.根據權利要求8的水混懸液，其中n是12–74的整數，并且m+n至多是74。12.根據權利要求6－11中任一項的水混懸液，其中XA包含兩個半胱氨酸殘基。13.根據前述權利要求1–11中任一項的水混懸液，其中所述多肽是包含與序列的氨基殘基結合的O-聚糖部分的糖基化的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：T·貝亭格，P·布塞，B·拉米，S·舍卡烏伊，I·吉爾伯特布利戈，
申請(專利權)人：博萊科瑞士股份有限公司，
類型：
國別省市：