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    一種防治真菌病害代謝產物的制備方法技術

    技術編號:8648981 閱讀:217 留言:0更新日期:2013-05-01 12:50
    本發明專利技術涉及微生物技術領域,本發明專利技術所述的枸骨內生菌是從浙江杭州采集的枸骨植物活體中采用內生菌微生物分離技術分離獲得的,經微生物分類學鑒定為鹽屋鏈霉菌(Streptomyces?sioyaensis),定名為鹽屋鏈霉菌107。該菌株已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏,保藏日期2012年12月12日,保藏登記號CGMCC?No.6984。本發明專利技術最顯著的特征是該菌株液體發酵能夠產生對植物真菌病害病原菌如黃瓜立枯病菌(Rhizoctonia?solani)和水稻紋枯病菌(Thanatephorus?cucumeris)等有抑制作用的活性代謝產物,是農業上重要的微生物資源。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術涉及微生物
    ,特別是涉及生防內生放線菌一鹽屋鏈霉菌(Streptomyces sioyaensis)的培養及其代謝產物的應用。
    技術介紹
    植物體內都存在大量的內生菌,內生菌最早發現于牧草,后來又在木本植物、草本植物、禾本植物、苔蘚、地衣、海藻等植物中被發現。迄今的研究表明,植物內生菌可增強宿主的抗病性、提高植物的生產力、抗逆抗蟲等。發揮這些作用是由于內生菌在植物體內繁殖和生長,并在體內產生有生物活性的次生代謝產物。因此,內生菌可能成為生物防治中有潛力的生物控制劑,在生態農業和生物農藥研制方面具有重要的用途。近年來植物內生菌已引起了微生物學家、生態學家、植物保護學家的廣泛興趣,逐漸成為國內外研究的熱點。目前微生物源農藥的研究和開發在我國十分活躍,但微生物資源及其應用潛力尚沒有得到充分的發揮,而植物內生菌即是這樣一類有待開發的新興微生物資源。目前對植物病害的防治,主要采用化學農藥殺滅病原菌,但化學農藥對人畜的毒副作用和殘留問題至今仍難以有效的解決。利用內生菌產生的抗病原真菌的活性物質進行植物病原真菌病害的生物防治,則具有周期短、易于研究、便于生產和低毒等優點。本專利技術從枸骨中分離到一株生防內生放線菌,并對該菌株發酵代謝產物進行了抑菌作用研究。該專利技術為微生物源農藥的進一步研制和開發提供優良的出發菌株。
    技術實現思路
    本專利技術的目的是針對化學農藥不安全與微生物源農藥種類較少的不足,提供一株`從枸骨中分離篩選出的內生放線菌-鹽屋鏈霉菌(Streptomyces sioyaensis);本專利技術的另一目的是提供利用該菌株代謝產物防治植物真菌病害的方法。本專利技術鹽屋鏈霉菌的分離、篩選與鑒定:是于2012年7月在浙江杭州采集的枸骨莖中,經分離、純化、培養、發酵和活性測定等步驟獲得并保存;經微生物分類學鑒定為鹽屋鏈霉菌(Streptomyces sioyaensis),定名為鹽屋鏈霉菌107。該菌株已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏,保藏日期2012年12月12日,保藏登記號CGMCC N0.6984。鹽屋鏈霉菌107,顯微形態特征:孢子絲直、螺旋形,孢子長圓或橢圓形。本專利技術所述的鹽屋鏈霉菌107,經發酵提取可獲得對部分植物真菌病害病原菌具有抑制作用的代謝產物。本專利技術目的通過以下技術方案來實現: 一種防治水稻紋枯病、黃瓜立枯病、番茄灰霉病、黃瓜枯萎病或西瓜枯萎病等植物真菌病害微生物代謝產物的制備方法,按以下步驟進行:(I)菌種的活化培養:將分離保存的鹽屋鏈霉菌107菌種移至馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)斜面平板上,在28°C ±1°C條件下培養至試管斜面長滿孢子,供接種用;(2)發酵培養:發酵培養液為每IOOOmL中含有黃豆餅粉20g,玉米粉15g,麩皮10g,蛋白胨 5g,(NH4)2SO4 5g, CaCO3 5g, MgSO4 10g,每 300mL 三角瓶裝發酵培養液 60mL ;配制后121°C滅菌20min,待冷卻至40°C在無菌條件下挑取一鉬金環鹽屋鏈霉菌107孢子接種,在28°C 土 1°C條件下,搖床轉速180轉/分鐘,發酵培養128h ;(3)發酵物提取:發酵完畢,離心收集發酵上清液,用常規有機溶劑萃取經真空濃縮后獲得浸膏,用于抑菌活性測定。本專利技術的有益效果:一是本專利技術從植物枸骨莖中分離篩選出代謝物對部分植物真菌病害病原菌具有較強抑制作用的鹽屋鏈霉菌107,這為農業上防治植物真菌病害病原菌提供了一株微生物菌株;二是本專利技術提供了利用鹽屋鏈霉菌107發酵獲得活性代謝產物的方法;該代謝產物可應用于植物真菌病害的防治,為農用殺菌劑的開發增添了新的途徑。具體實施例方式實施例1:(鹽屋鏈霉菌107的分離與篩選)本專利技術于2012年7月在浙江杭州采集枸骨莖,經表面消毒、內生菌分離、培養、發酵、活性測定以及對抑制植物真菌病害病原菌活性菌株的篩選等步驟,從中獲得鹽屋鏈霉菌107,保存。鹽屋鏈霉菌107抑菌活性測定:取經0.22 μ m膜過濾的發酵上清液ImL于無菌培養皿內,與9mL冷卻至50°C的PDA培養基迅速混勻,冷卻后在每個培養基平面分別放I個直徑為4mm的水稻紋 枯病菌(Thanatephorus cucumeris)或黃瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum.sp.cucu mebrium Owen)或黃瓜立枯病菌(Rhizoctonia solani)或西瓜枯萎病菌(F.0xysporum f.sp.niveum)或番爺灰霉病菌(Botrytis cinerea)等供試菌菌餅,菌餅接于培養皿中央(培養皿直徑為9cm),置培養箱中28°C培養72h,以無菌水處理作為對照,重復3次;采用十字交叉法測定菌落直徑,以下列公式計算抑制率:本文檔來自技高網...

    【技術保護點】
    一種防治真菌病害代謝產物的制備方法,所述代謝產物按以下方法制備:(1)菌種的活化培養:將分離保存的鹽屋鏈霉菌(Streptomyces?sioyaensis)107菌種移至馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)斜面平板上,在28℃±1℃條件下培養至試管斜面長滿孢子,供接種用,所述的鹽屋鏈霉菌107已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏,保藏日期2012年12月12日,保藏登記號CGMCC?No.6984;(2)發酵培養:發酵培養液為每1000mL中含有黃豆餅粉20g,玉米粉15g,麩皮10g,蛋白胨5g,(NH4)2SO4?5g,CaCO3?5g,MgSO4?10g,每300mL三角瓶裝發酵培養液60mL;配制后121℃滅菌20min,待冷卻至40℃在無菌條件下挑取一鉑金環鹽屋鏈霉菌107孢子接種,在28℃±1℃條件下,搖床轉速180轉/分鐘,發酵培養128h;(3)發酵物提取:發酵完畢后離心收集發酵液,加入等體積乙酸乙酯萃取,取下層,再用等體積正丁醇萃取,取上層,在真空條件下濃縮至浸膏,得正丁醇萃取物。

    【技術特征摘要】
    1.一種防治真菌病害代謝產物的制備方法,所述代謝產物按以下方法制備: (1)菌種的活化培養:將分離保存的鹽屋鏈霉菌(Streptomycessioyaensis) 107菌種移至馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PM)斜面平板上,在28°C ±1°C條件下培養至試管斜面長滿孢子,供接種用,所述的鹽屋鏈霉菌107已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏,保藏日期2012年12月12日,保藏登記號CGMCC N0.6984 ; (2)發酵培養:發酵培養液為每IOOOmL中含有黃豆餅...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:俞曉平申屠旭萍湯谷劉葉丹陳昳麗俞葉微曾惠娟
    申請(專利權)人:中國計量學院
    類型:發明
    國別省市:

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