本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)涉及內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點(diǎn)的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，該方法具體包括以下步驟：1)采用共沉淀法制備納米四氧化三鐵，并用聚乙烯亞胺表面改性，微波熱解法制備碳量子點(diǎn)并將其加入改性的磁粒子溶液中，形成磁性碳量子點(diǎn)；2)采用低壓成膜-高壓孵化的方法將磁性碳量子點(diǎn)載入脂質(zhì)體內(nèi)水相，pH及熱敏性三嵌段共聚物通過(guò)疏水作用在脂質(zhì)體表面，制得納米粒子和聚合物改性的脂質(zhì)體。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)方法簡(jiǎn)單，成本較低，制備產(chǎn)物可發(fā)展為具有磁靶向，熒光成像或示蹤功能的診斷治療劑，pH及熱控釋藥物的載藥體系，對(duì)于發(fā)展其它類(lèi)型的多功能藥物載體具有重要的參考價(jià)值。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)屬于生物材料與納米醫(yī)藥
，具體涉及。
技術(shù)介紹
脂質(zhì)體是指由磷脂為膜材及附加劑組成的封閉囊泡，具有類(lèi)似生物膜的雙分子層結(jié)構(gòu)，可包封水溶性和脂溶性藥物于囊內(nèi)而成為一種新型的藥物載體。脂質(zhì)體的基本組分——磷脂，是生物體的固有成分，可在體內(nèi)經(jīng)生物轉(zhuǎn)化而降解，無(wú)毒性及免疫原性。鑒于其具有提高藥物穩(wěn)定性，減少藥物用量，降低毒性，減輕免疫反應(yīng)，延緩釋放，降低體內(nèi)消化速度，改變藥物在體內(nèi)分布等優(yōu)點(diǎn)，脂質(zhì)體被認(rèn)為是目前最具發(fā)展前途的藥物載體之一，可廣泛用于腫瘤、感染性疾病、心血管疾病和皮膚病等的臨床治療。半導(dǎo)體量子點(diǎn)(如CdSe、CdS、InAs等)因其獨(dú)特的光學(xué)性質(zhì)在現(xiàn)代生物技術(shù)中的應(yīng)用呈現(xiàn)日益增長(zhǎng)的趨勢(shì)，但其存在的缺陷亦十分明顯，如合成條件苛刻，成本較高，具有生物毒性和環(huán)境危害等，限制了在生命科學(xué)中的應(yīng)用。目前，碳源材料被大量合成，并作為高性能材料在許多領(lǐng)域展現(xiàn)出了應(yīng)用價(jià)值，尤其是類(lèi)似于半導(dǎo)體的發(fā)光碳量子點(diǎn)，一問(wèn)世，即以其良好的光學(xué)性質(zhì)、合成方便、原料豐富和毒性小等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用于熒光標(biāo)記、成像、傳感等生物科學(xué)領(lǐng)域。通過(guò)對(duì)脂質(zhì)體磷脂雙分子層進(jìn)行功能聚合物(如pH及熱雙敏性嵌段共聚物)修飾，然后將無(wú)機(jī)納米顆粒(如納米金、氧化鐵、量子點(diǎn)等)負(fù)載進(jìn)入脂質(zhì)體的內(nèi)水相和雙分子層中，獲得一種多功能化的脂 質(zhì)體藥物載體。這種新型的脂質(zhì)體-納米顆粒的復(fù)合物系統(tǒng)，可用于光學(xué)、磁共振、表面等離子共振成像，活體細(xì)胞和組織的熒光標(biāo)記和示蹤等領(lǐng)域，展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用前景。近年來(lái)，相關(guān)工作者一直致力于開(kāi)發(fā)多功能脂質(zhì)體藥物載體的研究，尤其是在脂質(zhì)體-納米顆粒復(fù)合物方面，陸續(xù)取得了一系列的研究進(jìn)展，相關(guān)研究成果已發(fā)表在國(guó)際權(quán)威期干1J上(例如；Al_Jamal ff. T. , Kostarelos K. Liposome-nanoparticlehybrids formultifunctional diagnostic and therapeutic application. Nanomedicine. 2007，2，85 ~ 98. ；Xie J.，Huang J.，Li X.，Sun S.，Chen X.1ron oxide nanoparticle platformforbiomedical applications. Curr. Med. Chem. 2009，16，1278 1294. ；Smith A. M.，NieS.Semiconductor nanocrystals -structure， properties, and band gap engineering.Acc. Chem. Res. 2009，43，190 200. ；Pan J. ,Wan D.，Gong J. PEGylated liposome coatedQDs/mesoporous silica core-shell nanoparticles for molecular imaging. Chem.Commun. 2011，47，3442 3444.)。截至目前，有關(guān)多功能脂質(zhì)體藥物載體的制備方法已有中國(guó)專(zhuān)利報(bào)道。例如，儲(chǔ)茂泉等采用薄膜分散法制成脂質(zhì)為膜，量子點(diǎn)為核的脂質(zhì)體，然后加入正硅酸乙酯，在脂質(zhì)體表面形成二氧化硅，制得脂質(zhì)體包埋量子點(diǎn)的二氧化硅微球(公開(kāi)號(hào)CN101362066A)。賀蓉等將水溶性半導(dǎo)體量子點(diǎn)和5-氟尿嘧啶分散在乙醇脂質(zhì)體內(nèi)部，采用薄膜擠出器分別通過(guò)聚碳酸酯膜，制備了納米乙醇脂質(zhì)體(公開(kāi)號(hào)CN101327189A)。常津等將聚乳酸-羥基乙酸共聚物微球內(nèi)部包載量子點(diǎn)與抗癌藥物，外面包覆賴(lài)氨酸/殼聚糖/十八烷基季銨鹽/膽固醇制備而成的陽(yáng)離子高分子脂質(zhì)體，制得一種核/殼結(jié)構(gòu)的載藥微球體系(公開(kāi)號(hào)CN102525941A)。盡管以上文獻(xiàn)和專(zhuān)利中涉及了負(fù)載量子點(diǎn)的功能化脂質(zhì)體的制備方法，但某些關(guān)鍵的技術(shù)問(wèn)題依然亟待解決，如制備工藝復(fù)雜，量子點(diǎn)的毒性，脂質(zhì)體的多功能，以及藥物釋放的可控性等。因此，發(fā)展一種制備簡(jiǎn)單、成本低、多功能化的脂質(zhì)體，對(duì)于發(fā)展高質(zhì)量藥物載體的基礎(chǔ)研究及最終應(yīng)用都具有十分重要的意義。迄今為止，尚未見(jiàn)PH及熱雙敏性聚合物表面修飾的脂質(zhì)體，水熱合成內(nèi)水相負(fù)載碳量子點(diǎn)/納米四氧化三鐵復(fù)合顆粒，以及具有集熒光、磁性、PH及熱敏感性于一體的新型多功能脂質(zhì)體的相關(guān)中國(guó)專(zhuān)利報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種方法簡(jiǎn)單，快速、成本低的內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點(diǎn)的PH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法。本專(zhuān)利技術(shù)的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)一種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點(diǎn)的PH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟(I)溶解氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代乙醇酸形成均質(zhì)水溶液，在堿性條件和65°C下反應(yīng)至出現(xiàn)大量黑色微粒，即為納米四氧化三鐵；在超聲作用下逐滴加入聚乙烯亞胺，形成帶正電的磁性納米粒； (2)葡萄糖與聚乙二醇溶解在去離子水中，轉(zhuǎn)入微波反應(yīng)器反應(yīng)一段時(shí)間，制得水溶性碳量子點(diǎn)溶液；在超聲作用下，將碳量子點(diǎn)溶液逐滴加入步驟(I)得到的磁性納米粒體系中，通過(guò)靜電吸附形成磁性碳量子點(diǎn)復(fù)合微粒；(3)聚丙烯酸PA A、十二烷胺DDA與交聯(lián)劑I溶解在有機(jī)溶劑I中，在一定的溫度I發(fā)生羧-胺反應(yīng)生成PAA-DDA接枝聚合物，將此聚合物、N-異丙基丙烯酰胺NIPAM與交聯(lián)劑II溶解在有機(jī)溶劑II中，在一定的溫度II發(fā)生聚合反應(yīng)，生成PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD ；(4)將卵磷脂、膽固醇、PNAD以一定的質(zhì)量比溶解在氯仿/甲醇的混合液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中抽真空，使溶劑完全揮發(fā)后成膜，加入去離子水，在磁力攪拌下使膜脫落，制得脂質(zhì)體懸濁液；(5)將步驟(4)所得脂質(zhì)體懸濁液與步驟(2)所得復(fù)合微粒水溶液一起放入置于恒溫水浴的高壓反應(yīng)釜中，通入二氧化碳?xì)怏w，在一定的溫度和壓力下攪拌孵化；孵化結(jié)束后，冷卻至室溫，緩慢釋放二氧化碳?xì)怏w，即得目標(biāo)脂質(zhì)體溶液。步驟(I)中所述的氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代乙醇酸濃度比為1:1 : 2 5:1: 6，堿性條件為pH7 8，磁性納米粒的尺寸為10 30nm，聚乙烯亞胺的加入量為所述均質(zhì)水溶液質(zhì)量的O.1 O. 5%。步驟(2)中所述的葡糖糖與聚乙二醇的質(zhì)量體積比為I 5 5 25g/mL,所述的微波反應(yīng)器的微波功率為540W，反應(yīng)時(shí)間為I lOmin。步驟(3)中所述的PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD中PNIPAM、PAA、DDA單體摩爾比為94 :1 : 5 79 :1 : 20，交聯(lián)劑I為二環(huán)己基碳二亞胺DDC，有機(jī)溶劑I為N，N’-二甲基甲酰胺DMF，溫度I為20 90°C，交聯(lián)劑II為偶氮二異丁腈AIBN，有機(jī)溶劑II為1,4- 二氧六環(huán),溫度II為50 80°C。步驟⑷中所述的卵磷脂、膽固醇、PNAD的質(zhì)量比為1:1 :1 5 :1 : O. 1，氯仿/甲醇的體積比為1:1 3 : 1，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為35 45°C。步驟(5)中所述的復(fù)合微粒水溶液與脂質(zhì)體懸濁液的質(zhì)量比為1: 5 1: 10，水浴溫度為40 50°C，設(shè)定壓力為10 30MPa，攪拌孵化時(shí)間為20 50min。本專(zhuān)利技術(shù)的效果是選用低毒碳量子點(diǎn)和超順磁四氧化本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點(diǎn)的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟：(1)溶解氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代乙醇酸形成均質(zhì)水溶液，在堿性條件和65℃下反應(yīng)至出現(xiàn)大量黑色微粒，即為納米四氧化三鐵；在超聲作用下逐滴加入聚乙烯亞胺，形成帶正電的磁性納米粒；(2)葡萄糖與聚乙二醇溶解在去離子水中，轉(zhuǎn)入微波反應(yīng)器反應(yīng)一段時(shí)間，制得水溶性碳量子點(diǎn)溶液；在超聲作用下，將碳量子點(diǎn)溶液逐滴加入步驟(1)得到的磁性納米粒體系中，通過(guò)靜電吸附形成磁性碳量子點(diǎn)復(fù)合微粒；(3)聚丙烯酸PAA、十二烷胺DDA與交聯(lián)劑I溶解在有機(jī)溶劑I中，在一定的溫度I發(fā)生羧?胺反應(yīng)生成PAA?DDA接枝聚合物，將此聚合物、N?異丙基丙烯酰胺NIPAM與交聯(lián)劑II溶解在有機(jī)溶劑II中，在一定的溫度II發(fā)生聚合反應(yīng)，生成PNIPAM?PAA?DDA三嵌段共聚物PNAD；(4)將卵磷脂、膽固醇、PNAD以一定的質(zhì)量比溶解在氯仿/甲醇的混合液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中抽真空，使溶劑完全揮發(fā)后成膜，加入去離子水，在磁力攪拌下使膜脫落，制得脂質(zhì)體懸濁液；(5)將步驟(4)所得脂質(zhì)體懸濁液與步驟(2)所得復(fù)合微粒水溶液一起放入置于恒溫水浴的高壓反應(yīng)釜中，通入二氧化碳?xì)怏w，在一定的溫度和壓力下攪拌孵化；孵化結(jié)束后，冷卻至室溫，緩慢釋放二氧化碳?xì)怏w，即得目標(biāo)脂質(zhì)體溶液。...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點(diǎn)的PH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟 (1)溶解氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代こ醇酸形成均質(zhì)水溶液，在堿性條件和65°C下反應(yīng)至出現(xiàn)大量黑色微粒，即為納米四氧化三鉄；在超聲作用下逐滴加入聚こ烯亞胺，形成帶正電的磁性納米粒； (2)葡萄糖與聚こニ醇溶解在去離子水中，轉(zhuǎn)入微波反應(yīng)器反應(yīng)一段時(shí)間，制得水溶性碳量子點(diǎn)溶液；在超聲作用下，將碳量子點(diǎn)溶液逐滴加入步驟(I)得到的磁性納米粒體系中，通過(guò)靜電吸附形成磁性碳量子點(diǎn)復(fù)合微粒； (3)聚丙烯酸PAA、十二烷胺DDA與交聯(lián)劑I溶解在有機(jī)溶劑I中，在一定的溫度I發(fā)生羧-胺反應(yīng)生成PAA-DDA接枝聚合物，將此聚合物、N-異丙基丙烯酰胺NIPAM與交聯(lián)劑II溶解在有機(jī)溶劑II中，在一定的溫度II發(fā)生聚合反應(yīng)，生成PNIPAM-PAA-DDA三嵌段共聚物PNAD ； (4)將卵磷脂、膽固醇、PNAD以一定的質(zhì)量比溶解在氯仿/甲醇的混合液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中抽真空，使溶劑完全揮發(fā)后成膜，加入去離子水，在磁力攪拌下使膜脫落，制得脂質(zhì)體懸濁液； (5)將步驟(4)所得脂質(zhì)體懸濁液與步驟(2)所得復(fù)合微粒水溶液一起放入置于恒溫水浴的高壓反應(yīng)釜中，通入ニ氧化碳?xì)怏w，在一定的溫度和壓カ下攪拌孵化；孵化結(jié)束后，冷卻至室溫，緩慢釋放ニ氧化碳?xì)怏w，即得目標(biāo)脂質(zhì)體溶液。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種內(nèi)水相負(fù)載磁性碳量子點(diǎn)的pH及熱雙敏性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，步驟(I)中所述的氯化鐵、硫酸亞鐵與硫代こ醇酸濃度比為1:1 : ...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：萬(wàn)錒俊，桂日軍，李慧麗，金輝，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：上海交通大學(xué)，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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