一種重組腫瘤疫苗及其生產方法技術

本申請涉及用于預防和治療腫瘤以及癌癥的腫瘤疫苗。腫瘤疫苗可以含有編碼用于預防和治療腫瘤以及癌癥的抗原提呈肽、細胞因子和其它因子的核酸，或含有此類核酸的表達載體或病毒，或含有此類核酸或表達載體的宿主細胞。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
技術介紹
抗原提呈是適應性免疫應答中的一個過程，期間抗原提呈細胞捕獲抗原并將抗原提呈至其表面以供T細胞識別。抗原和主要組織相容性復合物(MHC)分子位于抗原提呈細胞表面，其能夠被T細胞受體識別和結合，藉此促進抗原提呈。一旦T細胞識別了細胞表面的抗原，其活化并產生針對抗原的免疫應答。通過抗原提呈，T細胞能夠產生針對外源性抗原和內源性抗原的免疫應答。細胞因子在免疫應答調控中發揮著重要作用。細胞因子是由免疫系統中的細胞分泌的低分子量蛋白，其具有發送調節免疫系統信號的功能。不同細胞因子能夠傳送不同信號。例如，某些細胞因子能夠刺激免疫細胞的增殖或成熟；某些細胞因子能夠引導免疫細胞的遷移；以及某些細胞因子能夠增強基于細胞的免疫應答。 據信，癌癥或腫瘤至少部分地與人體內對癌變的免疫應答減弱或缺乏相關。多種療法已被用于治療癌癥，包括基因療法。用于癌癥治療的基因療法可以涉及到輸送能夠殺傷或抑制癌細胞的基因、能夠增強針對癌細胞免疫應答的基因、能夠修復或代替基因突變或改變的基因、或能夠使癌細胞對化療或放療更為敏感的基因。專利技術概述本專利技術涉及用于預防或治療腫瘤和癌癥的重組腫瘤疫苗。該腫瘤疫苗可以包含編碼用于預防和治療腫瘤以及癌癥的抗原提呈肽、細胞因子和其它因子的核酸，和/或含有此類核酸的表達載體，和/或含有此類核酸和/或表達載體的宿主細胞。本專利技術還涉及包含腫瘤疫苗的藥物組合物以及使用腫瘤疫苗預防和治療腫瘤和癌癥的方法。一方面，本專利技術提供了一種重組腫瘤疫苗，其包含編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸、編碼細胞因子的第二多核苷酸、和至少一個啟動子的組合物，其中至少一個啟動子操作性地連接至第一多核苷酸和第二多核苷酸中的至少一個。另一方面，本專利技術提供了一種重組腫瘤疫苗，其包含具有編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸片段、編碼細胞因子的第二多核苷酸片段、和至少一個啟動子的表達載體，其中至少一個啟動子操作性地連接至第一多核苷酸片段和第二多核苷酸片段中的至少一個。另一方面，本專利技術提供了一種藥物組合物，包含藥學上可接受的載體以及含有編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸、編碼細胞因子的第二多核苷酸、和至少一個啟動子的腫瘤疫苗，其中至少一個啟動子操作性地連接至第一多核苷酸和第二多核苷酸中的至少一個。另一方面，本專利技術提供了一種治療腫瘤的方法，包括向對象給予藥物組合物，其包含藥學上可接受的載體以及含有編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸、編碼細胞因子的第二多核苷酸、和至少一個啟動子的腫瘤疫苗，其中至少一個啟動子操作性地連接至第一多核苷酸和第二多核苷酸中的至少一個。另一方面，本專利技術提供了一種藥物組合物，包含藥學上可接受的載體以及含有編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸片段、編碼細胞因子的第二多核苷酸片段、和至少一個啟動子的腫瘤疫苗，其中至少一個啟動子操作性地連接至第一多核苷酸片段和第二多核苷酸片段中的至少一個。另一方面，本專利技術提供了一種治療腫瘤的方法，包括向對象給予藥物組合物，其包含藥學上可接受的載體以及含有編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸片段、編碼細胞因子的第二多核苷酸片段、和至少一個啟動子的腫瘤疫苗，其中至少一個啟動子操作性地連接至第一多核苷酸片段和第二多核苷酸片段中的至少一個。前述專利技術概述僅僅是示例性的，而非旨在以任何方式進行限定。另外除上文所述示例性的方面、實施方式和特征外，更多方面、實施方式和特征將通過引用附圖和下文的詳細說明給出。附圖的簡要說明圖I為表達載體pAd-HSP-hGM-CSF的示意圖。圖2為腺病毒基因組Ad-HSP-hGM-CSF的示意圖。圖3為腺病毒基因組Ad-HSP-mGM-CSF的示意圖。圖4顯示了在B16細胞(a)、Ifep3B細胞(b)、和Hela細胞(C)中通過ELISA測定的mGM-CSF的表達水平，其分別在10、100和1000的感染復數(MOI)下被Ad-HSP-mGM-CSF感染。圖5顯示了在B16細胞(a)、Ifep3B細胞(b)、和Hela細胞(C)中通過ELISA測定的hHSP70的表達水平，其分別在10、100和1000的MOI下被Ad-HSP-mGM-CSF感染。圖6顯示了在感染復數為300時Ad-HSP-hGM-CSF對不同腫瘤細胞的細胞毒性作用。圖7顯示了在感染復數為100時Ad-HSP-hGM-CSF對不同腫瘤細胞的細胞毒性作用。圖8顯示了在感染復數為30時Ad-HSP-hGM-CSF對不同腫瘤細胞的細胞毒性作用。圖9顯示了 Ad-HSP-mGM-CSF對7種不同類型細胞的細胞毒性作用。附圖說明圖10顯示了給予小鼠Ad-HSP-mGM-CSF后腫瘤尺寸的改變。專利技術詳述在以下詳細說明中，引用附圖作為參考，這些附圖也為本專利技術的其中一部分。附圖中，除非上下文另有說明，否則類似符號一般表示類似的組分。在詳細說明、附圖和權利要求中描述的示例性實施方式不具有限定作用。在不脫離本專利技術主旨和范圍的前提下，可以利用其它實施方式并可以進行其它改變。核酸組合物本專利技術涉及一種重組腫瘤疫苗，其具有含編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸、編碼細胞因子的第二多核苷酸、和至少一個啟動子的組合物，其中至少一個啟動子操作性地連接至第一多核苷酸和第二多核苷酸中的至少一個。本文使用的術語“重組”指使用一種或多種分子生物學技術對一種或多種生物分子如多核苷酸或多肽分子進行人工處理，以使得此類生物分子處于不同于其自然狀態。本文使用的術語“多核苷酸”或“核酸”指核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)、或核糖核酸_脫氧核糖核酸的混合物如DNA-RNA雜交物。多核苷酸或核酸可以是單鏈或雙鏈DNA或RNA或DNA-RNA雜交物。多核苷酸或核酸可以是線性的或環狀的。本文使用的術語“編碼”或“為……編碼”指能夠轉錄為mRNA和/或翻譯為肽或蛋白。“編碼序列”或“基因”指編碼mRNA、肽或蛋白的多核苷酸序列。在本專利技術中這兩個術語可以互換使用。本文使用的術語“mRNA”指與模版DNA序列互補并且能夠作為蛋白合成模版的RNA分子。本文使用的術語“抗原提呈多肽”指能夠結合抗原、提呈抗原至抗原提呈細胞并且促進抗原提呈細胞識別抗原的多肽或蛋白。本文使用的術語“抗原提呈細胞”指能夠在其表面呈現抗原和其主要組織相容性復合物(MHC)的細胞，這樣T細胞能夠識別所呈現的抗原。呈現的抗原能夠被免疫細胞如T細胞識別，藉此產生針對抗原的免疫應答。在某些實施方式中，抗原提呈細胞是樹突狀細胞、巨噬細胞、B-細胞或上皮細胞。在某些示例性實施方式中，抗原提呈細胞是樹突狀細胞。 本文使用的術語“操作性地連接”指所述編碼序列以允許其表達的方式直接或間接地連接或關聯至一個或多個調控序列本文使用的術語“表達”指編碼序列轉錄為mRNA和/或編碼序列翻譯為肽或蛋白。本文使用的術語“轉錄”指RNA的合成過程，通過RNA聚合酶讀取DNA序列以生成與DNA序列互補的RNA鏈。本文使用的術語“翻譯”指肽或蛋白的合成過程，通過核糖體讀取mRNA序列以根據mRNA序列中含有的氨基酸密碼子產生氨基酸鏈。本文使用的術語“調控序列”指對編碼序列表達所必須的或有益的任意核苷酸序列。調控序列可以包括，但不限于，一個或多個啟動子、增強子、轉錄終止子、多聚腺苷酸化序列和內在核糖體插入位點。本文使用的術語“啟動子”指能夠控制編碼序列轉錄的多核本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：梁旻，
申請(專利權)人：東源生物醫藥科技上海有限公司，
類型：
國別省市：