本發明專利技術公開了一種靶向肝臟的caspase-1抑制劑，由人乙型肝炎病毒Pre-S1肽通過柔性接頭與caspase-1抑制劑連接而成，Pre-S1肽由Pre-S1蛋白的第1-50位氨基酸組成，caspase-1抑制劑由YVAD四肽的三分子聚合物通過柔性接頭與VAD三肽的三分子聚合物連接而成；該制劑利用特異性靶向肝臟的載體Pre-S1肽將caspase-1抑制劑特異性靶向肝細胞，既有利于通過終止肝細胞內的caspase-1活化來阻斷由損傷肝細胞釋放的內源性危險信號導致的肝內持續性慢性炎癥，進而阻斷肝細胞的繼發性損傷，也有利于減少caspase-1廣泛抑制可能導致的機體不良反應，從而對肝細胞起到特異有效的保護，可用于制備由損傷肝細胞釋放的內源性危險信號導致的肝內慢性炎癥的治療藥物。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥領域，涉及一種酶抑制劑及其在醫藥領域中的用途。
技術介紹
以慢性肝炎為主要原因導致的慢性肝損傷是我國的重大健康問題，也是當前世界衛生組織公布的人類主要死亡病因之一。慢性肝臟炎癥一旦啟動，難以終止，進一步造成肝硬化、肝功能衰竭、肝癌的發生，稱為“慢性肝病三步曲”；并且，肝細胞的損傷也難以終止，被喻為“永不愈合的創傷”。既往研究認為，病毒在肝內的活動是肝內炎癥持續存在的重要原因，所以抗病毒治療是目前治療慢性乙肝最常采用的方式。但研究發現，即使是有效抑制了病毒復制，也難以終止慢性乙肝進展到肝硬化/肝功能衰竭的惡性病程，而這恰恰是慢性乙肝的主要危害。目前臨床尚無能夠阻斷慢性肝炎惡性進展的有效治療策略和治療藥物。炎癥體(inf Iammasome )在炎癥應答和免疫調控中具有重要作用，通過感知各種內源性和外源性的危險信號，活化以caspase-1為主的激酶，促進IL-I P的分泌，啟動炎癥應答，生理狀況下，清除感染和死亡細胞，維持機體內環境穩態，也有報道caspase-1的異?；罨c多種自身免疫病或自身炎癥性疾病相關。
技術實現思路
根據專利技術人和其他研究人員的最新研究結果，炎癥體與慢性肝損傷包括慢性乙肝病毒感染相關的慢性肝炎密切相關。專利技術人的研究結果顯示慢性乙肝的炎癥持續原因并不僅僅包括乙肝病毒的活動，也能由損傷肝細胞特別是凋亡肝細胞釋放的內源性危險信號引起；這些內源性危險信號以損傷肝細胞釋放的ATP為代表，通過活化炎癥體，導致肝內慢性炎癥和慢性損傷。同時，專利技術人在肝細胞等組織細胞中的研究也發現，肝細胞(一種非免疫細胞)中也存在caspase-1的應答機制，肝內微環境中常見的內源性危險信號(如HMGB1、尿酸、ATP等)能夠有效啟動肝細胞內caspase-1的活化，進而促進炎癥應答。因此，阻斷肝細胞內caspase-1的活化有可能阻斷由損傷肝細胞釋放的內源性危險信號導致的肝內慢性炎癥，進而阻斷肝細胞的繼發性損傷和慢性肝炎的惡性進展。有鑒于此,本專利技術的目的之一在于研制一種祀向肝臟的caspase-1抑制劑，并考察其是否可以通過終止肝細胞內的caspase-1活化來阻斷由損傷肝細胞釋放的內源性危險信號導致的肝內慢性炎癥，進而阻斷肝細胞的繼發性損傷，同時避免caspase-1廣泛抑制可能引起的機體不良反應，最終實現對肝細胞特異有效的保護；目的之二在于提供所述革巴向肝臟的caspase-1抑制劑在制藥領域中的用途。經過研究，本專利技術提供如下技術方案 I.祀向肝臟的caspase-1抑制劑，由人乙型肝炎病毒Pre-Sl肽通過柔性接頭與caspase-1抑制劑連接而成,所述Pre-Sl肽由Pre-Sl蛋白的第1_50位氨基酸組成,所述caspase-1 抑制劑由 YVAD (Tyr-Val-Ala-Asp)四妝的三分子聚合物即 Tyr-Val-Ala-Asp-Tyr-Val-Ala-Asp-Tyr- Val-Ala-Asp 通過柔性接頭與 VAD (Val-Ala-Asp)三肽的三分子聚合物即 Val-Ala-Asp-Val-Ala- Asp-Val-Ala-Asp 連接而成。進一步,所述祀向肝臟的caspase-1抑制劑由SEQ ID No. I所示的氨基酸序列組成，即所述Pre-Sl肽與caspase-1抑制劑之間的柔性接頭以及YVAD肽三分子聚合物與VAD肽三分子聚合物之間的柔性接頭均由3個甘氨酸組成。2.所述靶向肝臟的caspase-1抑制劑在制備由損傷肝細胞釋放的內源性危險信號導致的肝內慢性炎癥的治療藥物中的用途。本專利技術的有益效果在于本專利技術利用特異性靶向肝臟的載體Pre-Sl肽與caspase-1抑制劑連接,制得了一種祀向肝臟的caspase-1抑制劑,并對其藥理活性進行了實驗研究。研究結果顯示，該靶向肝臟的caspase-1抑制劑能夠特異有效地被原代肝細胞 攝取，能夠有效抑制由內源性危險信號ATP啟動的原代肝細胞內caspase-1的活化，減少促炎癥細胞因子IL-I P的產生，并能夠有效阻斷由內源性危險信號ATP啟動的原代肝細胞的死亡，從而初步證實了可以通過阻斷肝細胞內caspase-1的活化來阻斷由損傷肝細胞釋放的內源性危險信號導致的肝內持續性慢性炎癥，進而阻斷肝細胞的繼發性損傷，這是治療慢性肝炎的一種創新性策略，可能阻斷慢性肝炎的惡性進展，將是目前常規臨床治療方式的重要且必要的補充。將caspase-1抑制劑特異性靶向肝臟，不僅有利于終止肝細胞內的caspase-1活化，而且有利于減少全身系統性的caspase-1抑制可能導致的嚴重的內環境紊亂和免疫缺陷等不良反應，從而實現對肝細胞特異有效的保護。因此，本專利技術的靶向肝臟的caspase-1抑制劑可用于制備由損傷肝細胞釋放的內源性危險信號導致的肝內慢性炎癥的治療藥物，在終止包括慢性乙肝在內的各種慢性肝炎病程進展方面具有潛在、良好的應用前景。附圖說明為了使本專利技術的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合附圖對本專利技術作進一步描述，其中 圖I為流式細胞儀檢測原代肝細胞對靶向肝臟的caspase-1抑制劑的攝取比例，其中a表示陰性對照(熒光標記的無關七肽)，b表示熒光標記的靶向肝臟的caspase-1抑制劑，c表示突光標記的caspase-1抑制劑。圖2為蛋白免疫印跡檢測靶向肝臟的caspase-1抑制劑對內源性危險信號ATP啟動的原代肝細胞內caspase-1活化的影響,其中I表示未干預的正常肝細胞,顯示有大量的caspase-1活化后產生的plO亞單位,2、3、4分別表不祀向肝臟的caspase-1抑制劑5 ii M、20iiM、40iiM 處理組。圖3為ELISA實驗檢測靶向肝臟的caspase-1抑制劑對內源性危險信號ATP啟動原代肝細胞內Caspase-I活化后產生IL_1 ^能力的影響。圖4為乳酸脫氫酶釋放實驗檢測靶向肝臟的caspase-1抑制劑對內源性危險信號ATP啟動的原代肝細胞死亡的影響。圖3和圖4中“block”表不革巴向肝臟的caspase-1抑制劑。具體實施方式以下將參照附圖，對本專利技術的優選實施例進行詳細的描述。優選實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照制造廠商所建議的條件。一、革巴向肝臟的caspase-1抑制劑的制備 設計并委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成氨基酸序列如SEQ ID No. I所示的靶向肝臟的caspase-1抑制劑。在SEQ ID No. I所示序列中，第1_50位氨基酸為來源于乙型肝炎病毒株FMC#97的Pre-Sl蛋白的第1_50位氨基酸序列，第51-53位氨基酸為柔性接頭，第54-65位氨基酸為YVAD (Tyr-Val-Ala-Asp)四肽的三分子聚合物，第66-68位氨基酸為柔性接頭，第69-77位氨基酸為VAD (Val-Ala-Asp)三肽的三分子聚合物。同時,合成缺少祀向載體的caspase-1抑制劑作為對照，即從SEQ ID No. I所示序 列中去除第1-53位氨基酸。二、祀向肝臟的caspase-1抑制劑的活性檢測 I、人原代肝細胞的培養 取非HBV相關的肝癌患者外科手術腫瘤切除的無相鄰的正常組織，按文獻方法(Methods for pr本文檔來自技高網...
【技術保護點】
靶向肝臟的caspase?1抑制劑，其特征在于，由人乙型肝炎病毒Pre?S1肽通過柔性接頭與caspase?1抑制劑連接而成，所述Pre?S1肽由Pre?S1蛋白的第1?50位氨基酸組成，所述caspase?1抑制劑由YVAD四肽的三分子聚合物即Tyr?Val?Ala?Asp?Tyr?Val?Ala?Asp?Tyr?Val?Ala?Asp通過柔性接頭與VAD三肽的三分子聚合物即Val?Ala?Asp?Val?Ala?Asp?Val?Ala?Asp連接而成。
【技術特征摘要】
1.革巴向肝臟的caspase-1抑制劑,其特征在于，由人乙型肝炎病毒Pre-Sl肽通過柔性接頭與caspase-Ι抑制劑連接而成,所述Pre-Sl肽由Pre-Sl蛋白的第1_50位氨基酸組成， 所述caspase-Ι抑制劑由YVAD四妝的三分子聚合物即Tyr-Val-Ala-Asp-Tyr-Val-Ala-As p-Tyr-Val-Ala-Asp通過柔性接頭與VAD三肽的三分子...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王靖雪，吳玉章，劉錢，劉宏利，
申請(專利權)人：中國人民解放軍第三軍醫大學，
類型：發明
國別省市：
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