一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體復合物及其制備方法技術

本發明專利技術公開了一種雞傳染性支氣管炎復合物，具體是將純化好的抗原的和血凝抑制效價大于1：28的抗體按體積比3:4～8時進行配比，制得雞傳染性支氣管炎抗原抗體復合物，該復合物穩定性好，副作用少，免疫效果好。

【技術實現步驟摘要】

本專利涉及，屬于生物疫苗領域。背景知識雞傳染性支氣管炎(IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的一種高度接觸傳染的疾病，主要侵害雞的呼吸系統、泌尿生殖系統和消化系統。雛雞發病后通常表現流鼻液、呼吸困難等呼吸道癥狀，甚至會發生死亡；此外，該病還可導致蛋雞產蛋量下降和蛋白品質下降，是目前嚴重危害世界養禽業的重大傳染病之一，給家畜養殖業造成巨大的經濟 損失。目前尚無特效療法，主要采用接種疫苗方式。由于傳染性支氣管炎病毒血清型復雜且相互之間交叉保護力弱，而且新的血清型和變異株不斷出現，如果選擇的疫苗不當，不但起不到預防的效果，而且還可能給當地增添新的病毒株。所以用疫苗前必須掌握當地疾病流行的病毒血清型，并使用與當地流行毒株抗原性一致的疫苗品系，這樣才能達到有效的免疫預防目的。目前市場上還是主要以弱毒苗為主，雖然有一定的治療效果，但是，效果還不是很好，針對目前這種狀況，研制出一種安全、有效、經濟、穩定的疫苗就顯得尤為重要。
技術實現思路
本專利技術目的在于提供一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體復合物，該復合物性能穩定、免疫作用快、免疫力強。本專利技術的目的還在于提供一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體復合物的制備方法，該方法操作簡單，成本低。為實現上述目的，本專利技術通過以下技術方案實現首先按常規方法制備抗原，然后制得抗體，最后將抗原抗體按最合適的比例進行配比。具體實施方案如下I.抗原的制備(I)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接種雞胚,繁殖溫度為35_37°C,每天照兩次蛋，收獲24-60h死亡的雞胚尿囊液；對于60h的活胚需置2-8°C過夜，然后收獲尿囊液,收獲尿囊液時,需棄去24h之前死亡的雞胚；對收獲的病毒尿囊液進行檢驗,凡菌檢為陽性，毒價彡IO7EID5tlA). lmL，作為制備疫苗的部分的抗原液。(2)病毒液的濃縮、純化用醋酸鋅沉淀法濃縮病毒液，Sepharose 4FF凝膠層析柱純化病毒液。2.抗體的制備用抗原配制油乳劑滅活疫苗免疫25日齡的SPF雞，胸部肌肉分點注射，免疫3次，每次間隔2周，最后I次免疫是在第3周后用活毒加強免疫I次，第2周后心臟無菌采血分離血清，初步得到的IBV抗血清，首先在54-58°C的水浴鍋中水浴20-40min滅活補體，在3-5°C下以4000-6000r/min離心20_40min，吸取淡黃色上清液作為制備疫苗的抗體。經檢驗，制備的抗體無菌，血凝抑制價大于I :28的血清經檢驗合格后保存備用。3.抗原抗體復合物疫苗的配制及檢測用制備好的抗原和抗體按不同的體積比例進行復合，抗原與抗體的體積比分別為3:4 8，加入凍干保護劑充分混合后進行真空凍干。配制成抗原抗體復合物疫苗用HA試驗檢測復合物的血凝價，并按常規方法測定復合物的EID5(i。制備的抗原抗體復合物每份所含的抗原量與常規疫苗所含的抗原量一樣。經試驗測定，復合物的HA效價在抗原抗體的比例在3:4 8時效價最大,免疫力效果最好。本專利技術獲得的復合物具有性能穩定、安全性好、動物免疫后產生免疫作用快、免疫力強、保護率高特點。具體實施方式 下面結合一些具體實施方式對本專利技術進一步詳細介紹。實施例I(I)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接種雞胚,繁殖溫度為35°C,每天照兩次蛋，收獲24_60h死亡的雞胚尿囊液；對于60h的活胚需置5°C過夜，然后收獲尿囊液，收獲尿囊液時，需棄去24h之前死亡的雞胚；對收獲的病毒尿囊液進行檢驗，凡菌檢為陰性，毒價> IO7EID5tlA). lmL，作為制備疫苗的部分的抗原液。(2)病毒液的濃縮、純化用醋酸鋅沉淀法濃縮病毒液，Sepharose 4FF凝膠層析柱純化病毒液。(3)用抗原配制油乳劑滅活疫苗免疫25日齡的SPF雞，胸部肌肉分點注射，免疫3次，每次間隔2周，最后I次免疫3周后用活毒加強免疫I次，2周后心臟無菌采血分離血清，初步得到雞傳染性支氣管炎病毒IBV血清；(4)56°C水浴30min滅活補體，在4°C以5000r/min離心30min，淡黃色上清液作為制備疫苗的抗體；(5)用制備好的抗原和抗體按體積比3:8進行混合，加入凍干保護劑進行真空凍干，得到抗原抗體復合物。實施例2(I)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接種雞胚,繁殖溫度為37°C,每天照兩次蛋，收獲24_60h死亡的雞胚尿囊液；對于60h的活胚需置2°C過夜，然后收獲尿囊液，收獲尿囊液時，需棄去24h之前死亡的雞胚；對收獲的病毒尿囊液進行檢驗，凡菌檢為陰性，毒價> IO7EID5tlA). lmL，作為制備疫苗的部分的抗原液。(2)病毒液的濃縮、純化用醋酸鋅沉淀法濃縮病毒液，Sepharose 4FF凝膠層析柱純化病毒液。(3)用抗原配制油乳劑滅活疫苗免疫25日齡的SPF雞，胸部肌肉分點注射，免疫3次，每次間隔2周，最后I次免疫3周后用活毒加強免疫I次，2周后心臟無菌采血分離血清，初步得到雞傳染性支氣管炎病毒IBV血清；(4)54°C水浴40min滅活補體，在3°C下以4000r/min離心40min,淡黃色上清液作為制備疫苗的抗體；(5)用制備好的抗原和抗體按體積比3:5進行混合，加入凍干保護劑進行真空凍干，得到抗原抗體復合物。實施例3(I)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接種雞胚,繁殖溫度為36°C,每天照兩次蛋，收獲24-60h死亡的雞胚尿囊液；對于60h的活胚需置8°C過夜，然后收獲尿囊液，收獲尿囊液時，需棄去24h之前死亡的雞胚；對收獲的病毒尿囊液進行檢驗，凡菌檢為陰性，毒價> IO7EID5tlA). lmL，作為制備疫苗的部分的抗原液。(2)病毒液的濃縮、純化用醋酸鋅沉淀法濃縮病毒液，Sepharose 4FF凝膠層析柱純化病毒液。(3)用抗原配制油乳劑滅活疫苗免疫25日齡的SPF雞，胸部肌肉分點注射，免疫3次，每次間隔2周，最后I次免疫3周后用活毒加強免疫I次，2周后心臟無菌采血分離血清，初步得到雞傳染性支氣管炎病毒IBV血清； (4)58°C水浴20min滅活補體，在5°C下以6000r/min離心20min,淡黃色上清液作為制備疫苗的抗體；(5)用制備好的抗原和抗體按體積比3:4進行混合，加入凍干保護劑進行真空凍干，得到抗原抗體復合物。免疫效力試驗I日齡SPF雛雞200只分成10組，每組20只，分別飼養于隔離器內。第I組至第8組分別經頸部皮下接種復合物疫苗I 8 (I 3組接種實施例I的復合物疫苗，4 6組接種實施例2的復合疫苗，7 8接種實施例3的復合物疫苗)；第9組免疫雞傳染性支氣管炎常規活疫苗;第10組是空白對照組。免疫后觀察記錄雞的疫苗反應情況，3周后采血檢測雞傳染性支氣管炎HI抗體水平。結果疫苗免疫后雞群的臨床癥狀I組 8組雞接種復合物疫苗后均無任何反應，采食飲水正常；第9組雞接種疫苗后，有3只雞出現雞傳染性支氣管炎癥狀，表現有精神萎頓，羽毛松亂，輕微喘氣甚至張口呼吸，3d 4d后癥狀消失;第10組雞一直保持健康，說明隔離器運轉正常。免疫組的抗體水平比常規苗的抗體水平要高。攻毒試驗免疫接種28d后，即28日齡時，用雞傳染性支氣管炎病種(M41)進行攻毒試驗，攻毒劑量為每只雞108_°EID5(I,肌肉注射0. 2mL。攻毒本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體復合物，其特征在于：抗原與抗體按體積比3:4～8進行混合后成為保護機體的復合物。

【技術特征摘要】
1.一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體復合物，其特征在于抗原與抗體按體積比3:4 8進行混合后成為保護機體的復合物。2.如權利要求I所述的一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體復合物，其特征在于抗原毒價彡 IO7EID50A). ImL03.如權利要求I所述的一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體復合物，其特征在于抗體血凝抑制價HA大于I :28。4.一種如權利要求I所述的雞傳染性支氣管炎抗原抗體復合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟 (1)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接種雞胚,繁殖溫度為35_37°C,每天照兩次蛋，收獲24-60h死亡的雞胚尿囊液；對于60h的活胚需置2-8°C過夜，然后收獲尿囊液，收獲尿囊液時，需棄去24h之前死亡的雞胚；對收獲的病毒尿囊液進...

【專利技術屬性】
技術研發人員：吳紅云，徐進，韓改會，
申請(專利權)人：鄭州后羿制藥有限公司，
類型：發明
國別省市：