一種高純度棘白菌素B的制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種利用曲霉屬(Aspergillus?sp.)發(fā)酵代謝產(chǎn)物制備棘白菌素B(Echinocandin?B)的方法。該方法經(jīng)過曲霉屬發(fā)酵代謝產(chǎn)物浸提、大孔樹脂吸附、解吸、脫色、結(jié)晶等步驟，得到棘白菌素B粗提物，再借助Fracl?ite800樹脂對(duì)粗提物進(jìn)行層析分離，得到高純度的棘白菌素B產(chǎn)品。本發(fā)明專利技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于采用大孔吸附樹脂提取分離棘白菌素B，工藝簡(jiǎn)單易行，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)；并首次將Fraclite800用于棘白菌素B的層析分離，可以制備高純度的產(chǎn)品。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于工業(yè)微生物
，具體涉及一種高純度棘白菌素B的制備方法。
技術(shù)介紹
棘白菌素類是近年來新上市的一種抗真菌藥物。棘白菌素類藥作為新一代全身性抗真菌藥，不經(jīng)過肝代謝和腎清除，使聯(lián)合用藥以及肝、腎功能不良患者無需調(diào)整劑量成為可能。它們能夠抑制真菌細(xì)胞中1，3-β-D葡聚糖的合成，具有毒性低和良好的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。其獨(dú)特的作用靶點(diǎn)和確切顯著的療效，必將使其很快替代三唑類藥成為醫(yī)生和患者抗真菌藥物的首選。目前進(jìn)入臨床研究的此類藥物有三種卡泊芬凈、米卡芬凈和阿尼芬凈。阿尼芬凈是第三代棘白菌素類的半合成抗真菌藥，對(duì)治療念珠菌和霉曲菌引起的嚴(yán)重感染具有廣闊 的前景。2006年2月21日，由輝瑞公司生產(chǎn)的阿尼芬凈通過了美國(guó)FDA認(rèn)證，用于治療食管感染和其他形式的念珠菌感染。阿尼芬凈以發(fā)酵產(chǎn)物棘白菌素B(EchinocandinB)為原料，經(jīng)猶他游動(dòng)放線菌(Actinoplanes utahensis)產(chǎn)生的酰化酶作用脫去側(cè)鏈亞油酰基,然后在DMF中與活性中間體4” -戊氧基- 三苯基-4-甲酸-2，4，5-三氯-苯基酯反應(yīng)制得。Echinocandin B是曲霉菌屬(Aspergillus sp.)的發(fā)酵代謝產(chǎn)物,結(jié)構(gòu)式如下權(quán)利要求1.一種高純度棘白菌素B的制備方法，包括下述步驟 1)棘白菌素B發(fā)酵液固液分離，得到固形發(fā)酵培養(yǎng)物； 2)在固形發(fā)酵培養(yǎng)物中加入極性溶劑浸泡； 3)浸泡液固液分離，得到棘白菌素B提取液； 4)將提取液極性溶劑濃度調(diào)低，導(dǎo)入大孔吸附樹脂進(jìn)行富集； 5)吸附完畢，用極性溶劑洗滌樹脂，然后用解吸劑進(jìn)行解吸； 6)加入脫色物質(zhì)對(duì)解吸液脫色，攪拌均勻后過濾； 7)脫色液濃縮、加入極性溶劑萃取、結(jié)晶得棘白菌素B粗提物； 8)粗提物經(jīng)FracliteSOO層析分離，利用層析溶劑洗脫，得到棘白菌素B濕粉； 9)棘白菌素B濕粉經(jīng)真空干燥，得到高純度的棘白菌素B產(chǎn)品。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟2)極性溶劑為乙醇或甲醇，濃度為70-90%，加入量為每千克固形發(fā)酵培養(yǎng)物2-6升。3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟4)極性溶劑濃度調(diào)低至30-40%。4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟4)大孔吸附樹脂為HZ816、HZ830、DA201樹脂中的一種，樹脂的用量為棘白菌素B提取液體積的1/10-1/33。5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟5)中極性溶劑為30-50%的乙醇，解吸劑為70-90%的乙醇。6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟6)中脫色物質(zhì)為活性炭，加入量為解吸液體積的 O. 5-2%。7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟7)萃取所用極性溶劑為乙酸乙酯。8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟7)的結(jié)晶用極性溶劑為丙酮、異丙醇或石油醚中的一種。9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟8)中的層析分離時(shí)層析溶劑為甲醇-水、乙醇-水或丙酮-水中的一種。10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟9)中真空干燥條件為在40-50°C條件下干燥24小時(shí)。全文摘要本專利技術(shù)公開了一種利用曲霉屬(Aspergillus sp.)發(fā)酵代謝產(chǎn)物制備棘白菌素B(Echinocandin B)的方法。該方法經(jīng)過曲霉屬發(fā)酵代謝產(chǎn)物浸提、大孔樹脂吸附、解吸、脫色、結(jié)晶等步驟，得到棘白菌素B粗提物，再借助Fracl ite800樹脂對(duì)粗提物進(jìn)行層析分離，得到高純度的棘白菌素B產(chǎn)品。本專利技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于采用大孔吸附樹脂提取分離棘白菌素B，工藝簡(jiǎn)單易行，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)；并首次將Fraclite800用于棘白菌素B的層析分離，可以制備高純度的產(chǎn)品。文檔編號(hào)C07K1/16GK102952180SQ201110244359公開日2013年3月6日 申請(qǐng)日期2011年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月24日專利技術(shù)者林毅, 張雪霞, 李曉露, 李寧, 任風(fēng)芝, 王海燕, 張金娟, 張麗, 林旸, 陳書紅, 張艷立, 成曉迅, 高月麒, 王寧, 蔣沁, 段寶玲 申請(qǐng)人:華北制藥集團(tuán)新藥研究開發(fā)有限責(zé)任公司本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種高純度棘白菌素B的制備方法，包括下述步驟：1)棘白菌素B發(fā)酵液固液分離，得到固形發(fā)酵培養(yǎng)物；2)在固形發(fā)酵培養(yǎng)物中加入極性溶劑浸泡；3)浸泡液固液分離，得到棘白菌素B提取液；4)將提取液極性溶劑濃度調(diào)低，導(dǎo)入大孔吸附樹脂進(jìn)行富集；5)吸附完畢，用極性溶劑洗滌樹脂，然后用解吸劑進(jìn)行解吸；6)加入脫色物質(zhì)對(duì)解吸液脫色，攪拌均勻后過濾；7)脫色液濃縮、加入極性溶劑萃取、結(jié)晶得棘白菌素B粗提物；8)粗提物經(jīng)Fraclite800層析分離，利用層析溶劑洗脫，得到棘白菌素B濕粉；9)棘白菌素B濕粉經(jīng)真空干燥，得到高純度的棘白菌素B產(chǎn)品。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：林毅，張雪霞，李曉露，李寧，任風(fēng)芝，王海燕，張金娟，張麗，林旸，陳書紅，張艷立，成曉迅，高月麒，王寧，蔣沁，段寶玲，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：華北制藥集團(tuán)新藥研究開發(fā)有限責(zé)任公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：