本發明專利技術克服現有吡哆醛參與的轉氨化方法存在著反應時間長，產率低的問題，提供一種設計并合成的吡哆醛衍生物用于改善蛋白質N端氨基酸的轉氨化效率，尤其是對高位阻的氨基酸，如亮氨酸，異亮氨酸，纈氨酸等。一種吡哆醛衍生物，其特征在于，具有如下式VIII的結構。本發明專利技術公開的吡哆醛衍生物，提高了蛋白質N端氨基酸的轉氨化效率，尤其是N端含有大位阻氨基酸(Leu，Ile，Val)的多肽的轉氨化反應，有利于蛋白質進一步的聚乙二醇化修飾。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及蛋白質的化學合成與修飾領域，涉及用于蛋白質N端聚乙二醇化修飾 的新型吡咯醛衍生物及其制備方法與應用。
技術介紹
隨著現代生物技術的發展，蛋白質藥物發展迅速。特別是隨著人類基因組計劃的完成，以及蛋白質組學研究的進行，將會有越來越多的蛋白質藥物用于疾病治療。但是，這類藥物由于快速的腎臟排除和蛋白質酶解，體內半衰期較短。為了維持藥效，通常需要使用高劑量的蛋白質藥物，不僅提高了治療成本，而且容易增加免疫反應等不良副作用。迄今為止，解決蛋白質藥物缺陷最成功的手段是通過共價偶聯聚乙二醇來修飾和屏蔽蛋白質的表面，這種方法稱為“聚乙二醇化”(PEGylation)。吡哆醛(PLP)是天然產物維生素B6在生物體內的活性形式，Francis等發展了一種溫和并且通用的修飾方法，該方法利用吡哆醛(PLP)與蛋白質N端氨基酸發生轉氨化反應達到定點修飾的效果。N端氨基轉氨化得到的羰基能與聚乙二醇修飾劑選擇性地通過肟或腙的形成實現蛋白質末端的聚乙二醇化修飾。然而該吡哆醛參與的轉氨化方法存在著反應時間長，產率低這兩個不容忽視的缺點，而且只適用于N端為丙氨酸，甘氨酸，天冬氨酸，谷氨酸和天冬酰胺的多肽和蛋白質，其他氨基酸參與的轉氨化反應會生成副產物或表現出惰性。為了改善這一缺點，得到高效修飾蛋白質的方法，有必要設計合成新的吡哆醛衍生物。
技術實現思路
本專利技術所要解決的第一問題在于克服現有吡哆醛參與的轉氨化方法存在著反應時間長，產率低的問題，提供一種設計并合成的吡哆醛衍生物用于改善蛋白質N端氨基酸的轉氨化效率，尤其是對高位阻的氨基酸，如亮氨酸，異亮氨酸，纈氨酸等。本專利技術所要解決的又一技術問題提供一種吡哆醛衍生物的制備方法。本專利技術所要解決的又一技術問題在于提供一種吡哆醛衍生物的應用。本專利技術所要解決的又一技術問題在于優化并篩選出能夠明顯改善對模型多肽的N端轉氨化效率的反應條件。為了解決現有技術中的這些問題，在第一個方面，本專利技術提供的技術方案是一種吡哆醛衍生物，其特征在于，為4-甲酰基-3-羥基-5-(甲氧基甲基)-I，2-二甲基吡啶鹽，具有如下式VIII的結構其中，H R3都為烷基。權利要求1.用于蛋白質N端聚乙二醇修飾的吡哆醛衍生物，其特征在于，為4-甲酰基-3-羥基-5-(甲氧基甲基)-1，2_ 二甲基吡啶鹽，具有如下式VIII的結構其中，所述的Rl、R2、R2分別為烷基。2.一種制備式VIII的用于蛋白質N端聚乙二醇修飾的吡哆醛衍生物的方法，其特征在于，包括如下步驟(I)將式I吡哆醇溶解于丙酮中，加入催化量對甲苯磺酸，反應液回流過夜，冷卻后，真空條件下旋去溶劑，重新溶解于二氯甲烷中，溶液用碳酸氫鈉水溶液洗滌，水層進一步用二氯甲烷萃取，合并有機相，干燥過濾，進一步使用柱層析分離純化，得到式II (2，2，8-三甲基-4H- 二氧基吡啶-5-基)甲醇。3.式VIII的吡哆醛衍生物用于蛋白質N端氨基酸發生轉氨化反應進行定點修飾。4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，式III的吡哆醛衍生物用于蛋白質N端高位阻的氨基酸發生轉氨化反應進行定點修飾，如亮氨酸，異亮氨酸，纈氨酸。5.式III的吡哆醛衍生物進行蛋白質N端氨基酸轉氨化反應的方法，其特征在于，采用磷酸緩沖鹽或咪唑作為緩沖體系。6.根據權利要求5所述的蛋白質N端氨基酸轉氨化反應的方法，其特征在于，優選地，采用咪唑作為緩沖體系。7.根據權利要求5所述的蛋白質N端氨基酸轉氨化反應的方法，其特征在于，反應溫度為 25 0C -37 0C ο8.根據權利要求7所述的蛋白質N端氨基酸轉氨化反應的方法，其特征在于，優選地，反應溫度為37°C。9.根據權利要求5所述的蛋白質N端氨基酸轉氨化反應的方法，其特征在于，反應時間為4-5小時。10.根據權利要求9所述的蛋白質N端氨基酸轉氨化反應的方法，其特征在于，優選地，反應時間為4小時。全文摘要本專利技術克服現有吡哆醛參與的轉氨化方法存在著反應時間長，產率低的問題，提供一種設計并合成的吡哆醛衍生物用于改善蛋白質N端氨基酸的轉氨化效率，尤其是對高位阻的氨基酸，如亮氨酸，異亮氨酸，纈氨酸等。一種吡哆醛衍生物，其特征在于，具有如下式VIII的結構。本專利技術公開的吡哆醛衍生物，提高了蛋白質N端氨基酸的轉氨化效率，尤其是N端含有大位阻氨基酸(Leu，Ile，Val)的多肽的轉氨化反應，有利于蛋白質進一步的聚乙二醇化修飾。文檔編號C07D213/66GK102952067SQ20111025260公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月30日 優先權日2011年8月30日專利技術者趙勁, 張美娟, 劉磊, 李娟 申請人:蘇州欣諾科生物科技有限公司本文檔來自技高網...
【技術保護點】
用于蛋白質N端聚乙二醇修飾的吡哆醛衍生物，其特征在于，為4?甲酰基?3?羥基?5?(甲氧基甲基)?1，2?二甲基吡啶鹽，具有如下式VIII的結構：其中，所述的R1、R2、R2分別為烷基。FDA0000087454120000011.tif
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：趙勁，張美娟，劉磊，李娟，
申請(專利權)人：蘇州欣諾科生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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