一種豬脫細胞真皮基質包被膠原的復合敷料及其制備方法，制備方法包括（1）清洗，將皮片在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌；（2）分離表皮與真皮，將皮片在DispaseII溶液中浸泡消化，分解IV型膠原和纖維黏蛋白，分離表皮與真皮，然后再在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌；（3）脫真皮細胞，將皮片浸泡在TritonX-100溶液進一步去除真皮細胞成分，然后再在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌；（4）超聲清洗，然后浸泡于磷酸緩沖鹽溶液中暫存；（5）膠原包被，將皮片浸泡于I型膠原中灌裝密封；或者浸泡于I型膠原中進行凍干處理，將凍干物密封包裝制得成品。本發明專利技術細胞去除徹底，纖維支架完整，適用性強，敷用效果好。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫學皮膚組織工程
，特別是涉及。
技術介紹
近些年來，隨著工業的發展，人身事故傷害也不可避免地呈遞增趨勢，另外人們在生活和工作中對自身形象的要求也不斷提高，因此需要進行皮膚修復的人更是越來越多。現有技術中，在創面修復領域，已發現真皮能夠促進組織的修復，減少愈合過程中瘢痕的形成，因此真皮組織的選擇、提取、制備以及應用一直是皮膚修復領域的研究熱點。 但是，由于真皮組織在修復過程中很容易出現一系列的免疫排斥反應，產生免疫排斥反應的原因主要來自于細胞，由此就推動了對真皮組織的無細胞化技術的研究。而現有技術中限于自體皮以及異體皮的來源極為有限，異種(如豬等)脫細胞真皮就成為了當今皮膚修復技術研究的一大主題。現有技術中，豬脫細胞真皮基質的制備方法主要有酶消化法、高滲鹽-SDS法、平衡鹽溶液法等。而在實際操作中發現高滲鹽-SDS法中十二烷基硫酸鈉(SDS)作為去污劑脫除細胞時，強度過大，會造成部分支架結構的破壞。因此，通常選用較溫和的TritonX-IOO非離子型表面活性劑進行后期細胞脫除。平衡鹽溶液法由于要輔以較繁瑣的物理方法處理，如Y射線照射、反復凍融等。使得處理過程比較復雜，處理時間也相對較長，相對于其他化學方法處理時間過長，費時費力。且平衡鹽溶液法處理中會使真皮中的膠原蛋白和基質膜受到相當程度的損傷。酶消化法也存在操作復雜，不易控制等缺陷。 因此針對現有技術的不足，提供一種細胞去除徹底、真皮纖維支架完整、可制備具有良好的生物相容性和合適的生物降解速率的異種脫細胞真皮基質包被膠原的應用產品及其制備技術以克服現有技術不足甚為必要。
技術實現思路
本專利技術的目的在于避免現有技術的不足之處而提供一種，該專利技術具有細胞去除徹底、真皮纖維支架完整、所制備的產品具有良好的生物相容性和合適的生物降解速率的特點。 本專利技術的目的通過以下技術措施實現。一種豬脫細胞真皮基質包被膠原的復合敷料的制備方法，包括下列步驟 (1)清洗，具體是將皮片在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌； (2)分離表皮與真皮，具體是將步驟(I)得到的皮片在DispaseII溶液中浸泡消化，分解IV型膠原和纖維黏蛋白，分離表皮與真皮，然后再在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌； (3)脫真皮細胞，具體是將步驟(2)得到的皮片浸泡在TritonX-IOO溶液進一步去除真皮細胞成分，然后再在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌； (4)超聲清洗，具體是將步驟(3)得到的皮片進行超聲清洗，然后浸泡于磷酸緩沖鹽溶液中暫存； (5)膠原包被，具體是將步驟(4)得到的皮片浸泡于I型膠原中，灌裝密封；或者 將步驟(4)得到的皮片浸泡于I型膠原中，進行凍干處理，將凍干物密封包裝。上述步驟(I)具體是，將皮片在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌10-15分鐘。上述步驟(2)具體是，將步驟(I)得到的皮片在濃度為2. 0-3. OU/mL DispaseII溶液中浸泡，并在3-6°C條件下消化40-60小時，分解IV型膠原和纖維黏蛋白，分離表皮與真皮；然后再在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌10-15分鐘，清洗干凈。優選的，上述步驟(2)具體是，將步驟(I)得到的皮片在濃度為2. 5U/mLDispaseII溶液中浸泡，并在4°C條件下消化48小時，分解IV型膠原和纖維黏蛋白，分離表皮與真皮； 然后再在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌10-15分鐘，清洗干凈。上述步驟(3)具體是，將步驟(2)得到的皮片在體積分數為0.3-0.8%的TritonX-IOO溶液中浸泡40-60小時，進一步去除真皮細胞成分，然后再在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌10-15分鐘。優選的，上述步驟(3)具體是，將步驟(2)得到的皮片在體積分數為O. 5%的TritonX-IOO溶液中浸泡48小時，進一步去除真皮細胞成分，然后再在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌10-15分鐘。上述步驟(4)具體是，將步驟(3)得到的皮片放在超聲波清洗機中，在50-150小時z的頻率下震蕩洗滌4-8小時，然后浸泡于磷酸緩沖鹽溶液中暫存。上述步驟(5)膠原包被具體是將步驟(4)得到的皮片浸泡于濃度為1-5 mg/mL的I型膠原中，灌裝密封制得成品；或者 將步驟(4)得到的皮片浸泡于濃度為1-5 mg/mL的I型膠原中，置于_20°C至_50°C條件下冷卻1-5小時，然后在-20°C至_50°C循環凍干20-50小時，接著進行室溫回溫5_10小時.，然后將凍干物密封包裝制得成品。更佳的，上述步驟(I)之前還包括取皮步驟，具體是將健康白豬的整張皮浸泡于O. 1%新潔爾滅溶液中，消毒15-30分鐘，用鑷子夾除豬皮上殘留的毛，用取皮刀取O. 3mm-0. 5mm厚的皮片。本專利技術同時提供一種豬脫細胞真皮基質包被膠原的復合敷料，該豬脫細胞真皮基質包被膠原的復合敷料通過上述的方法制備而成。本專利技術的一種，制備方法包括下列步驟(1)清洗，具體是將皮片在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌；(2)分離表皮與真皮，具體是將步驟(I)得到的皮片在DispaseII溶液中浸泡消化，分解IV型膠原和纖維黏蛋白，分離表皮與真皮，然后再在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌；(3)脫真皮細胞，具體是將步驟(2)得到的皮片浸泡在TritonX-IOO溶液進一步去除真皮細胞成分，然后再在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌；(4)超聲清洗，具體是將步驟(3)得到的皮片進行超聲清洗，然后浸泡于磷酸緩沖鹽溶液中暫存；(5)膠原包被，具體是將步驟(4)得到的皮片浸泡于I型膠原中，灌裝密封；或者將步驟(4)得到的皮片浸泡于I型膠原中，進行凍干處理，將凍干物密封包裝。本專利技術采用DispaseII >TritonX-100系統，處理過程中對真皮的支架結構破壞較小，能很好的保證纖維支架的完整性，有利于后期上皮細胞的粘附與生長。此外，本專利技術增加I型膠原包被步驟，可根據具體情況適用于不同的創面，適用性強，敷用效果好。具體實施例方式結合以下實施例對本專利技術作進一步描述。實施例I。一種豬脫細胞真皮基質包被膠原的復合敷料的制備方法，包括下列步驟。( I)清洗，具體是將皮片在PBS磷酸緩沖鹽溶液中洗滌。 (2)分離表皮與真皮，具體是將步驟(I)得到的皮片在DispaseII溶液中浸泡消化，分解IV型膠原和纖維黏蛋白，分離表皮與真皮，然后再在PBS磷酸緩沖鹽溶液中洗滌。(3)脫真皮細胞，具體是將步驟(2)得到的皮片浸泡在TritonX-IOO溶液進一步去除真皮細胞成分，然后再在PBS磷酸緩沖鹽溶液中洗滌。(4)超聲清洗，具體是將步驟(3)得到的皮片進行超聲清洗，然后浸泡于PBS磷酸緩沖鹽溶液中暫存。(5)膠原包被，具體是將步驟(4)得到的皮片浸泡于I型膠原中，灌裝密封制得成品O本專利技術采用Dispasell、TritonX-IOO系統,此系統性質溫和，處理過程中對真皮的支架結構破壞較小，能很好的保證纖維支架的完整性，有利于后期上皮細胞的粘附與生長，采用該系統細胞去除徹底。此外，本專利技術增加I型膠原包被步驟采用浸泡灌裝密封形式，使用時為濕態，有利于干燥創面的保濕濕潤。 實踐證明，該方法制備的產品具有良好的生物相容性和合適的生物降解速率。實施例2。一種豬脫細胞真皮基質包被膠原的復合敷料的制備方法，具體包括下列步驟。(I)清洗，將皮片在PBS磷酸緩沖鹽溶液中洗滌10-15分鐘。(2)分離表皮與真皮，具本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種豬脫細胞真皮基質包被膠原的復合敷料的制備方法，其特征在于，包括有下列步驟：（1）清洗，具體是將皮片在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌；（2）分離表皮與真皮，具體是將步驟（1）得到的皮片在DispaseII溶液中浸泡消化，分解IV型膠原和纖維黏蛋白，分離表皮與真皮，然后再在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌；（3）脫真皮細胞，具體是將步驟（2）得到的皮片浸泡在TritonX？100溶液進一步去除真皮細胞成分，然后再在磷酸緩沖鹽溶液中洗滌；（4）超聲清洗，具體是將步驟（3）得到的皮片進行超聲清洗，然后浸泡于磷酸緩沖鹽溶液中暫存；（5）膠原包被，具體是將步驟（4）得到的皮片浸泡于I型膠原中，灌裝密封制得成品；或者將步驟（4）得到的皮片浸泡于I型膠原中，進行凍干處理，將凍干物密封包裝制得成品。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：遲妍妍，雷靜，鐘翠紅，盛曉曉，黃冬晶，
申請(專利權)人：廣州創爾生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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