一種劍麻超氧化物歧化酶的分離方法，是以劍麻葉片為材料，經(jīng)過清洗、勻漿、過濾、離心、丙酮沉淀，沉淀用磷酸鹽緩沖溶液溶解，離心，所得上清液經(jīng)透析、濃縮，得到濃縮液。該濃縮液經(jīng)過葡聚糖凝膠過濾，收集活性峰洗脫液，離心，得到上清液為超氧化物歧化酶液，本發(fā)明專利技術方法簡便快速安全價廉，適合推廣。
【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及ー種從植物中分離超氧化物歧化酶的方法，具體涉及ー種從劍麻分離超氧化物歧化酶的方法。
技術介紹
超氧化物岐化酶廣泛存在于生物體的自由基清除劑，其通過催化超氧陰離子自由基歧化為過氧化氫和氧氣，減輕或消除超氧陰離子自由基對機體的氧化或過氧化損害，具有抗輻射、抗腫瘤、抗逆境及延緩機體衰老等功能，在藥品、食品、保健品和化妝品等使用。如何從豐富的植物資源中分離超氧化物歧化酶，具有重要的現(xiàn)實意義，現(xiàn)有技術中分離提取超氧化物歧化酶的方法有ー些非常復雜、成本較高。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術的目的是提供一種從劍麻分離超氧化物歧化酶的方法。本專利技術的目的實現(xiàn)方案是以劍麻葉片為材料，經(jīng)過清洗、勻漿、過濾、離心、丙酮沉淀、溶解、透析、濃縮、葡聚糖凝膠過濾，分離出超氧化物歧化酶。本專利技術以劍麻葉片為超氧化物歧化酶分離材料。超氧化物歧化酶存在于正常展開、生長正常的健康葉片中。具體技術方案為ー種劍麻超氧化物歧化酶的分離方法，包括下述步驟(I)取新鮮成熟健康的劍麻葉片，洗浄、晾干，切碎，按質(zhì)量體積比I : 2 3的比例加入pH為7 8，濃度為O. 01 O. 09mol/L的磷酸鹽緩沖溶液，經(jīng)勻漿、過濾、離心，收集上清液；(2)取步驟(I)所得上清液加入丙酮，靜置3 4小時，離心，收集沉淀；用濃度為O. 001 O. 005mol/L磷酸鹽緩沖溶液溶解所得沉淀，離心，得上清液；上清液在濃度為O. 001 O. 005mol/L磷酸鹽緩沖溶液中透析得透析液；將透析液離心，收集上清液，經(jīng)濃縮，收集濃縮液；(3)取步驟(2)所得濃縮液用葡聚糖凝膠過濾，用pH為7 8，濃度為O. 001 O. 005mol/L的磷酸鹽緩沖溶液進行洗脫，收集洗脫液，經(jīng)離心，得上清液，經(jīng)濃縮，得超氧化物歧化酶液，冷藏或冷凍干燥得超氧化物歧化酶。本專利技術方法分離所得的ー種劍麻超氧化物歧化酶經(jīng)氰化鉀、過氧化氫和氯仿-乙醇選擇性試劑的抑制實驗，發(fā)現(xiàn)其對氰化鉀和過氧化氫敏感。同吋，紫外光吸收光譜特征分析結果表明，其在266nm有較強吸收。此外，原子吸收光譜特征分析結果表明，其銅、鋅元素含量較高。該酶是ー種植物天然蛋白，不含有害物質(zhì)，對人、動物無害、無病毒，可用于藥品、食品、保健品和化妝品等。本專利技術以劍麻葉片為材料，經(jīng)過清洗、晾干、勻漿、過濾、離心、丙酮沉淀、溶解、透析、濃縮、葡聚糖凝膠過濾，分離超氧化物歧化酶，方法簡單快速，所獲得的超氧化物歧化酶3可以直接或經(jīng)改性后應用于藥品、食品、保健品和化妝品等，拓寬超氧化物歧化酶的來源。附圖說明圖I是本專利技術エ藝生產(chǎn)流程圖。具體實施例方式實施例I :I、取新鮮成熟健康的劍麻葉片，洗浄、切碎，按質(zhì)量體積比I : 2 3的比例加入pH為7 8，濃度為O. 01 O. 09mol/L的磷酸鹽緩沖溶液，經(jīng)勻漿、過濾、離心，收集上清液。2、取步驟I所得上清液加入丙酮，靜置3 4小時，離心，收集沉淀。用濃度為O. 001 O. 005mol/L磷酸鹽緩沖溶液溶解所得沉淀，離心，上清液在對濃度為O. 001 O.005mol/L磷酸鹽緩沖溶液中透析過夜。離心，收集上清液，經(jīng)濃縮，收集濃縮液。3、取步驟2所得濃縮液上葡聚糖凝膠柱，用pH為7 8，濃度為0.001 O.005mol/L的磷酸鹽緩沖溶液進行洗脫，收集洗脫液，合并活性峰洗脫液，經(jīng)離心，得到超氧化物歧化酶液。權利要求1.ー種劍麻超氧化物歧化酶的分離方法，其特征在于，包括下述步驟 (1)取新鮮成熟健康的劍麻葉片，洗浄、晾干、切碎，按質(zhì)量體積比I: 2 3的比例加入pH為7 8，濃度為O. 01 O. 09mol/L的磷酸鹽緩沖溶液，經(jīng)勻漿、過濾、離心，收集上清液； (2)取步驟(I)所得上清液加入丙酮，靜置3 4小時，離心，收集沉淀；用濃度為O. 001 O. 005mol/L磷酸鹽緩沖溶液溶解所得沉淀，離心，得上清液；上清液在濃度為O. 001 O. 005mol/L磷酸鹽緩沖溶液中透析得透析液；將透析液離心，收集上清液，經(jīng)濃縮，收集濃縮液； (3)取步驟(2)所得濃縮液用葡聚糖凝膠過濾，用pH為7 8，濃度為0.001 O. 005mol/L的磷酸鹽緩沖溶液進行洗脫，收集洗脫液，經(jīng)離心，得上清液，經(jīng)濃縮，得超氧化物歧化酶液，冷藏或冷凍干燥得超氧化物歧化酶。全文摘要，是以劍麻葉片為材料，經(jīng)過清洗、勻漿、過濾、離心、丙酮沉淀，沉淀用磷酸鹽緩沖溶液溶解，離心，所得上清液經(jīng)透析、濃縮，得到濃縮液。該濃縮液經(jīng)過葡聚糖凝膠過濾，收集活性峰洗脫液，離心，得到上清液為超氧化物歧化酶液，本專利技術方法簡便快速安全價廉，適合推廣。文檔編號C12N9/08GK102911921SQ20111022340公開日2013年2月6日 申請日期2011年8月5日 優(yōu)先權日2011年8月5日專利技術者陳冰 申請人:湛江師范學院本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
一種劍麻超氧化物歧化酶的分離方法，其特征在于，包括下述步驟：(1)取新鮮成熟健康的劍麻葉片，洗凈、晾干、切碎，按質(zhì)量體積比1∶2～3的比例加入pH為7～8，濃度為0.01～0.09mol/L的磷酸鹽緩沖溶液，經(jīng)勻漿、過濾、離心，收集上清液；(2)取步驟(1)所得上清液加入丙酮，靜置3～4小時，離心，收集沉淀；用濃度為0.001～0.005mol/L磷酸鹽緩沖溶液溶解所得沉淀，離心，得上清液；上清液在濃度為0.001～0.005mol/L磷酸鹽緩沖溶液中透析得透析液；將透析液離心，收集上清液，經(jīng)濃縮，收集濃縮液；(3)取步驟(2)所得濃縮液用葡聚糖凝膠過濾，用pH為7～8，濃度為0.001～0.005mol/L的磷酸鹽緩沖溶液進行洗脫，收集洗脫液，經(jīng)離心，得上清液，經(jīng)濃縮，得超氧化物歧化酶液，冷藏或冷凍干燥得超氧化物歧化酶。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：陳冰，
申請(專利權)人：湛江師范學院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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