本發明專利技術公開了一種雙水相氣浮溶劑浮選分離/富集痕量氯霉素的方法，屬于分析化學領域。本發明專利技術是以小分子醇為浮選劑，以無機鹽作為分相的鹽析劑，以一定流速的氮氣浮選一定時間后，移取上層有機相，用高效液相檢測法在波長276nm處測定氯霉素含量。本發明專利技術集小分子醇雙水相萃取優點(樣品易分離、操作簡單、適用于極性和弱極性及非極性物質的分離/富集等)和氣浮浮選優點(高富集倍數、高選擇性、有機溶劑用量少、適合大劑量樣品分離/富集等)于一體，改變了有機溶劑只能浮選非極性物質的局限性，富集倍數高、選擇性好。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于分析化學領域，涉及一種分離/富集食品中痕量氯霉素的方法，尤其涉及。
技術介紹
氯霉素(CAP)是由委內瑞拉鏈絲菌產生的抗生素，氯霉素類抗生素可作用于細菌核糖核蛋白體的50S亞基，而阻撓蛋白質的合成，屬抑菌性廣譜抗生素。氯霉素對革蘭陽性、陰性細菌均有抑制作用，且對后者的作用較強，其中對傷寒桿菌、流感桿菌、副流感桿菌和百日咳桿菌的作用比其他抗生素強，對立克次體感染如斑疹傷寒也有效。如果氯霉素在食用動物中殘留，可通過食物鏈傳給人類，對人類的健康造成危害。氯霉素能抑制骨髓造血功能造成過敏反應，引起包括白細胞減少、紅細胞減少、血小板減少等在內的再生障礙性貧血，此外還可引起腸道菌群失調及抑制抗體的形成，該藥已在國外較多國家禁用。因此， 建立一個有效快速的方法來分離/富集食品中的氯霉素類藥物很有必要。樣品分析最重要的環節是樣品的前處理，它對分析方法的可靠性、準確性有重要影響。由于環境樣品具有被測物濃度低、組分復雜、干擾物多，故一般都要經過前處理才能進行分析測定。目前，氯霉素類抗生素殘留的前處理方法主要為液-液萃取法、固相萃取法、基質固相分散萃取法、固相微萃取法、超臨界萃取法、加壓溶劑萃取法、超聲波提取法和雙水相萃取法。其中最常用的是固相萃取法，但是固相萃取使用有機溶劑，對環境污染較大，并且解吸附過程操作非常耗時。因此，需要建立一種高效、無毒、無污染的綠色分離/富集方法。雙水相體系是一類新型萃取分離體系，它是由兩種聚合物或一種聚合物和一種鹽的水溶液在一定濃度下混合自發形成的兩相體系，具有無毒、無污染、萃取條件溫和、樣品易分離、操作簡單等優點。與傳統的雙水相萃取體系相比，小分子醇-鹽雙水相體系使用的有機溶劑成本低且易于蒸發回收，分相時間短，萃取過程不易乳化。Sebba于1962年首次提出溶劑浮選(Solvent Sublation,簡稱SS),是指將一定量非極性、弱極性或混合有機溶劑加在待浮選溶液的表層，直接將目標物浮選至上相。與常規分離方法相比，具有設備簡便、操作簡單、濃縮分離快、富集倍數高(通常達IO4)、耗能低等特點，尤其適用于處理大量試樣和分離富集極稀溶液中的痕量成分。本專利技術建立了一種全新的樣品前處理體系-小分子醇雙水相氣浮溶劑浮選法(ATSS)，該方法是將小分子醇雙水相萃取與氣浮溶劑浮選相耦合，將氣浮溶劑浮選的氣泡傳質方式引入到小分子醇雙水相體系中而形成的一種新的分離技術。
技術實現思路
小分子醇雙水相氣浮溶劑浮選法分離/富集食品中氯霉素(CAP)，是以低成本的小分子醇一正丙醇代替傳統的有機溶劑和聚合物作為浮選溶劑，以磷酸氫二鉀(K2HPO4)作為鹽析劑，利用惰性氣體N2對氯霉素進行分離/富集的方法。特指以正丙醇為浮選劑，以無機鹽磷酸氫二鉀(K2HPO4)作為分相的鹽析劑，在惰性氣體N2的作用下基于雙水相氣浮溶劑浮選法(Aqueous two-phase solvent sublation, ATSS)分離/富集食品中痕量氯霉素的方法。本專利技術的具體內容一種雙水相氣浮溶劑浮選法分離/富集痕量氯霉素的方法，是以小分子醇為浮選齊U，以無機鹽作為分相的鹽析劑，以一定流速的氮氣浮選一定時間后，移取上層有機相，用高效液相檢測法在波長276nm處測定氯霉素含量，其中，所述的小分子醇為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、丙酮中的一種；所述的無機鹽為磷酸氫二鉀。在本專利技術的一個較優實施例中，所述的小分子醇為正丙醇。 在本專利技術的一個較優實施例中，所述的磷酸氫二鉀濃度為O. 6^1. Og · mL'優選O. 85g · mL 1O在本專利技術的一個較優實施例中，所述的氮氣流速為l(T50mL · mirT1，優選3OmL · mirT1。在本專利技術的一個較優實施例中，所述的浮選時間為l(T60min，優選40min。在本專利技術的一個較優實施例中，所述的正丙醇的體積為I飛mL，優選2mL。本專利技術集小分子醇雙水相萃取優點(樣品易分離、操作簡單、適用于極性和弱極性及非極性物質的分離/富集等)和氣浮浮選優點(高富集倍數、高選擇性、有機溶劑用量少、適合大劑量樣品分離/富集等)于一體，改變了有機溶劑只能浮選非極性物質的局限性，富集倍數高、選擇性好。可以應用于分離/富集樣品中的痕量氯霉素。雙水相浮選最佳條件的選擇一、有機溶劑的選擇選擇一種合適的有機溶劑是雙水相浮選的一個重要因素，小分子醇雙水相浮選是將一層小分子醇加在待分離物質試液的表面，該小分子醇應具有能很好地溶解被浮選捕集成分、密度小、粘度小等特點。小分子醇主要是指甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、丙酮等。由于甲醇和丙酮毒性大，且甲醇分相困難，所以專利技術中驗證了乙醇、正丙醇、異丙醇三種有機溶劑對CAP浮選率的影響。固定上相體積加入量為3mL，實驗結果如圖I所示。當K2HPO4的濃度分別為O. 3,0. 4,0. 5g · mL-1時，才能與正丙醇、異丙醇、乙醇形成雙水相體系。從圖中可以看出，在這三個體系中，隨著K2HPO4濃度的增加，CAP的浮選率也增大；當K2HPO4的濃度為O. 90g · mL—1時，CAP的浮選率達到最大值；然后隨著K2HPO4濃度繼續增加，CAP的浮選率降低。這是因為當K2HPO4的濃度很高時，下相鹽溶液的粘度也相應的增大，使得在上升氣泡的空氣-水界面上的CAP轉移能力減弱，從而CAP的浮選率下降。在正丙醇-K2HPO4雙水相體系中，CAP的浮選率始終大于異丙醇/乙醇-K2HPO4雙水相體系，專利技術人最終選擇正丙醇作為雙水相浮選的有機溶劑。二、K2HPO4濃度對CAP浮選率的影響從圖I中可以看出，當K2HPO4的濃度小于O. 6g πιΓ1時，CAP的浮選率均小于40%，所以在這部分專利技術人選擇實驗K2HPO4的濃度范圍為O. 6^1. Og 結果如圖2，隨著K2HPO4濃度增加，CAP浮選率不斷增大，在K2HPO4濃度為O. 75g · mL—1時CAP浮選率大于90% ;在K2HPO4濃度為O. 85g · mL—1時CAP浮選率達到最大值95. 87% ;隨后CAP浮選率隨K2HPO4濃度增加而降低。專利技術人選擇K2HPO4的濃度為O. 85g · mL-1進行后續實驗。三、浮選時間對CAP浮選率的影響浮選時間對CAP浮選率的影響結果見圖3，隨著浮選時間的增加，CAP的浮選率升高；當浮選時間為50min時，CAP的浮選率最大(95. 82%);浮選時間為60min時，CAP浮選率略有下降。這是由于隨著浮選時間的增加，上升的氣泡和CAP分子之間有足夠的接觸時間，這樣目標物吸附在氣泡表面的幾率就會增加，因此通過氣泡吸附從下相轉移到上相的CAP的量也會增加，即CAP浮選率增加。CAP吸附在氣泡表面隨氣泡移動到界面后小的氣泡開始聚集成較大的氣泡，當氣泡足夠大時就會穿過界面到達上相，氣泡在上相表層與空氣接觸后破裂釋放出CAP，CAP便會溶解在上相有機溶劑中；但是，有些氣泡未穿過界面便會破裂，CAP會重新溶解在下相鹽溶液中，同時一部分溶解在上相的CAP會重新穿過界面返回下相鹽溶液中。從圖3可以看出，長時間的浮選并不會使浮選率一直增加，反而會稍有下降，而且浮選時間越長成本也會增加。因此從浮選率和節約成本考慮，專利技術人選擇40min作為浮 選的最佳時間。四、浮選流速對CAP浮選率的影本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種雙水相氣浮溶劑浮選分離/富集痕量氯霉素的方法，是以小分子醇為浮選劑，以無機鹽作為分相的鹽析劑，以一定流速的氮氣浮選一定時間后，移取上層有機相，用高效液相檢測法在波長276？nm處測定氯霉素含量，其特征在于：所述的小分子醇為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、丙酮中的一種；？？？？所述的無機鹽為磷酸氫二鉀。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：李艷芳，閆永勝，
申請(專利權)人：江蘇大學，
類型：發明
國別省市：
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