面膜復合活性物及其制備方法技術

本發明專利技術涉及日用品的面膜工藝，具體為哺乳動物細胞原代培養余液在制備面膜活性物質中的應用；本發明專利技術以國內外以細胞培養液余液為生長因子類物質的來源，價廉物美，余液再生利用，安全可靠；細胞培養液余液中所含的酶類，在常溫下對絲素蛋白進行有效的降解，得到小分子的絲素蛋白，操作簡便，安全；其次，蠶絲中的絲膠具有免疫原性，會引發過敏反應，后部絲腺來源的絲素蛋白完全不含有絲膠，使得過敏反應的可能大大降低；蠶絲面膜的成膜性是制備的難點，本發明專利技術中絲素蛋白在多次的高溫、攪拌及干燥過程中，蛋白分子的silk?I構象逐漸向silk?II轉變，結構穩定，具有良好的機械性能。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于日用品領域，特別涉及面膜的制備工藝。
技術介紹
面膜是人們日常生活中最常使用的化妝品之一。對人體面部皮膚起到補充水分是目前的面膜產品最有保障的功能。然而人們更期待解決的問題是面膜能夠促進人體面部皮膚的新陳代謝，起到美容作用。為此，需要研制一種具有皮膚營養作用的面膜，其中的主要活性物質是面膜能否達到預期效果的關鍵。目前，面膜制備工藝主要存在如下問題1)面部皮膚的感染人體面部皮膚在諸如去“死皮”，擠“暗瘡”等日常護理操作，都有可能導致表皮結構乃至腺體結構不同程度的物理損傷，并導致不同程度的炎癥反應。所以消炎和預防感染是面臨的首要問題。2)面部·皮膚的吸收面部皮膚具有一定的吸收功能，但是僅限于小分子物質，對于大分子量的蛋白類物質沒有吸收作用。特別對于蛋白質的降解產物(如氨基酸，小分子多肽等分子量較小的物質)具有一定的吸收作用。所以，面膜功效成分采用非小分子物質將導致吸收困難。3)生物活性物質的價格問題生物活性物質主要是指生長因子類物質。生長因子類物質的促組織修復和增強細胞活力的功能是不容置疑的，在美容護膚產品中添加生長因子類物質無疑會起到很好的美容護膚效果。但是，此類物質極其昂貴，每毫克干粉的平均售價為近萬元人民幣左右。另外，需要指出的是人體面部皮膚美容保健的實質是促進新的表皮細胞迅速有序地替代壞死表皮細胞，以促進表皮更新的過程。這一過程的實現，需要多種生長因子類物質的協同作用，這些物質有已知的，也有未知的。而現有面膜制劑片面地強調單因素的作用，忽略了多種生長因子的協同作用，但過多的生長因子又可能增加皮膚過敏的風險。細胞培養液余液是指細胞原代培養過程中更換下來的培養液。本專利技術中特指哺乳動物的細胞培養余液；原代培養是泛指非細胞株或細胞系的細胞培養。在細胞培養過程中，培養液主要由兩個部分構成。一是基礎培養基，如DMEM等，主要為細胞的生長提供能量來源如葡萄糖、適宜的PH值及滲透壓、以及其他無機條件；二是血清，如胎牛血清、類胎牛血清、小牛血清等；它們除了提供細胞生長的有機營養外，還提供指導細胞生長的生長因子類物質。含不同濃度血清的基礎培養基被稱為完全培養基。在細胞培養過程中，由于物質(主要是葡萄糖)的消耗，培養基中的指示劑會由紅色變為透明的淺黃色，此時，則意味著必須更換新的完全培養基。在細胞的培養中，除了人工制備的完全培養基成分外，被培養的細胞會根據一些目前人們還未徹底了解的一些原理和信號通路分泌一些特定濃度的生長因子類物質。這些物質的分泌種類及其分泌量以及濃度控制的雙向反饋機制，目前，人們還沒有完全掌握。但是，可以確定的是，在細胞培養過程中，細胞會向培養基中分泌多種酶類以及生長因子類物質，這些物質以適宜的生理濃度存在，對細胞的生長和類似在體條件下功能的表達起協同調節作用。這些即將被傾倒的培養基與新鮮完全培養基相比，有機成分，如葡萄糖、蛋白質等被大量消耗，但是卻富集了很多種類的酶類及生長因子類物質，所以，它們是提取生長因子類物質的最佳原料。正是由于這一原因，國外有報道稱，成功利用原代培養牛血管內皮細胞培養液余液，添加到原代培養的人包皮來源微血管內皮細胞的培養基中，成功實現了體外誘導微血管內皮細胞形成微血管。但是，目前還沒有關于細胞培養余液制備面膜活性成分的研究。
技術實現思路
本專利技術的目的之一在于提供絀胞培養余液的一種新應用，該應用以細胞培養余液中含有的多種生長因子類物質作為面膜的活性物質，為面膜制備提供了新的思路。為實現上述目的，本專利技術的技術方案是哺乳動物細胞的原代培養余液在制備面膜活性物質中的應用。哺乳動物細胞原代培養余液具體是指哺乳動物細胞原代培養過程中更換下來的培養液，這里所指的“原代培養”是泛指非細胞株或細胞系的細胞培養；哺乳動物細胞原代培養余液中含有多種已知和未知的生長因子類物質，這些物質都以生理濃度存在，與市售的生長因子類物質昂貴的價格相比，價廉物美。 進一步，所述應用為哺乳動物細胞原代培養余液與絲素蛋白聯合在制備面膜活性物質中的應用。優選的，所述絲素蛋白為家蠶后部絲腺來源的絲素蛋白。所述哺乳動物細胞包括上皮細胞、間充質細胞、神經外胚層細胞、造血細胞、干細胞和生殖腺細胞中的任一種或多種。通常制作蠶絲面膜或其他蠶絲生物材料成分之一的絲素蛋白都是再生絲素，即將蠶絲經過物理或化學的方法去除絲膠后得到的絲素蛋白。但實驗證明，目前還沒有能完全去除絲膠的方法，再生絲素中都存在有絲膠的殘留，這就使得絲素蛋白存在生物安全性的隱患。有實驗證明，絲膠會引發Type I型過敏反應。同時在絲素蛋白的二級結構中，由于絲膠的存在使得silk I構象向silk II轉變的難度加大。穩定性和力學性質都受到不同程度的影響。利用后部絲腺來源的絲素蛋白制備面膜材料，不但完全沒有絲膠，而且力學性質容易控制，安全性高。本專利技術的目的之二在于提供一種面膜活性物質的原料物，其可以通過相應的工藝制備得到面膜活性物質。本專利技術還提供了利用所述原料物制備膜活性物質的方法，該方法操作簡單，適用于工業化生產。為實現上述目的，本專利技術的技術方案為面膜復合活性物的原料物，由哺乳動物絀胞的原代培養余液和絲素蛋白組成，所述哺乳動物細胞包括上皮細胞、間充質細胞、神經外胚層細胞、造血細胞、干細胞和生殖腺細胞中的任一種或多種。所述絲素蛋白為家蠶后部絲腺來源的絲素蛋白，所述面膜復合活性物中的所述絲素蛋白的質量體積百分濃度為50-90 %。優選的，面膜復合活性物的原料物，由所述原代培養余液和絲素蛋白組成，所述絲素蛋白來源于家蠶后部絲腺，所述面膜復合活性物中的所述絲素蛋白的質量體積百分濃度為 60-80%。由所述的原料物制備面膜活性物質的制備方法，具體包括以下步驟I)將所述哺乳動物細胞在哺乳動物細胞原代培養基中培養不少于8小時，得哺乳動物細胞的原代培養余液；將絲素蛋白置于所述哺乳動物細胞原代培養余液中降解，37±2°C孵育不少于12小時，優選24小時，得絲素蛋白降解液(含絲素蛋白的多肽小分子)，所述絲素蛋白降解液中絲素蛋白的用量(以質量體積百分比計)為60-80% ；2)冷凍干燥處理，即得面膜活性物質。進一步，步驟I)中，所述哺乳動物細胞在培養基中培養12-24小時，所述哺乳動物細胞原代培養基為 MEM、DMEM、F12、M199、L15、RPMI1640、McCoys5A、Fischer 和 CMRL1066 中任一種。進一步，步驟I)中，絲素蛋白的獲得的具體步驟為將家蠶后部絲腺放入蒸餾水中，在3-6°C條件下搖床處理48-80小時，并滅菌，得絲素蛋白。本專利技術的目的之三在于提供制備面膜的方法，所述面膜活性物質價格便宜，含有多種生長因子成份；其制備面膜的方法簡單，適用于大眾使用。另外，還提供降解絲素蛋白的方法，該方法效率高，為制備面膜提供了有效的中間工藝。為實現上述目的，本專利技術的技術方案為應用所述的面膜活性物質制備面膜的方法，將所述面膜活性物質與水介質按照 I 5-25的重量比充分混合，或將所述面膜活性物質與面膜基質按照I :9-10的重量比充分混合，得面膜。降解絲素蛋白的方法將絲素蛋白置于哺乳動物細胞的原代培養余液中，37±2°C孵育不少于12小時，優選為24小時，得絲素蛋白降解液。絲素蛋白以干重計和原代培養余液的用量范圍為每50mL原代培養余液中置入2本文檔來自技高網...

【技術保護點】
哺乳動物細胞的原代培養余液在制備面膜活性物質中的應用。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：周嬋，王永亮，曾秀，馬群忠，
申請(專利權)人：重慶市畜牧科學院，
類型：發明
國別省市：