制備鯊烯的改良方法技術

從含鯊烯組合物中制備鯊烯的改良方法，所述方法包括步驟(a)在溫度T1進行純化蒸餾;(b)在溫度T2進行變性蒸餾;其中步驟(a)和(b)可以任一順序進行;T1和T2足以使鯊烯沸騰;T2>T1;且T2>200°C。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術處于制造具有適于藥學應用純度的鯊烯的領域。
技術介紹
鯊魚肝油含有稱為鯊烯的支鏈不飽和萜類化合物(C3ciHki ; 2=CHCH2-]2 ；2, 6, 10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳己烯；CAS RN 7683-64-9)。已知鯊烯用于人類疫苗中的水包油乳液，例如用于佐劑化流感病毒疫苗的MF59乳液。鯊烯還用于其他藥物制品(如油膏、栓劑)和化妝品。目前鯊烯的來源主要是魚油，尤其是鯊魚肝油。使用提取自鯊魚肝油的鯊烯可產 生相關問題，尤其是不能維持嚴格的制造標準時(如諾華公司(Novartis)生產MF59期間所用的那些)。例如，鯊魚可被對人也有感染性的病原體感染，或產生對人有害的物質，且可能存在TSE或TSE樣鯊魚制劑。此外，鯊魚可含有人類毒素如真鯊毒素(carchatoxin)。另外，S魚可含有人類對之過敏的蛋白。人類過敏的常見魚蛋白是在S魚中發現的小清蛋白。因此鯊烯的廉價低級別來源不適于人類藥學應用。在鯊烯是部分免疫佐劑的情況中，其對人受體傷害的風險增加，這是由于根據定義，所述佐劑可誘導針對雜質的強烈不利免疫應答。找到制備適于藥學應用的鯊烯的其他和改良過程是有用的，即所述鯊烯是滿足調節標準且不含可傷害人類的污染物、病原體、病毒、人毒素或蛋白的產品。本專利技術過程特定用于純化源自鯊魚肝油的鯊烯。
技術實現思路
本專利技術提供從動物源含鯊烯組合物中制備鯊烯的方法，所述方法包括步驟(a)在溫度T1進行純化蒸餾；(b)在溫度T2進行變性蒸餾；其中步驟(a)和(b)可以任一順序進行；T1和T2足以使鯊烯沸騰；T2XT1 ;且T2 > 200° C。所述動物來源通常是魚類來源，如鯊魚肝油(或其提取物)，即本專利技術提供從鯊魚肝油或從鯊魚肝油提取物中制備鯊烯的方法。本專利技術還提供從含鯊烯組合物中制備鯊烯的方法，所述方法包括步驟(a)在溫度T1進行純化蒸餾；(b)在溫度T2進行變性蒸餾；其中步驟(a)和(b)可以任一順序進行；!\和丁2足以使鯊烯沸騰；1\〈140° (;且1'2>200° C。有用的所述含鯊烯組合物可為鯊魚肝油或其提取物。本專利技術還提供重蒸餾含至少99%鯊烯的組合物的方法，所述重蒸餾是在T2的溫度下進行的變性蒸餾；其中T2 ^ 200。該重蒸餾可將組合物中的含水量降低到如〈O. 01%。本專利技術的方法可用于生產適于藥學應用的產品。具體地，本專利技術方法可用于生產純化的鯊烯，其不含可傷害人類的污染物、病原體、病毒、人類毒素或蛋白，尤其是蛋白小清蛋白。本專利技術還提供制造水包油乳液的方法，包括用上述方法準備的鯊烯制備乳液。本專利技術還提供制備疫苗組合物的方法，包括如上所述制備乳液，并將所述乳液與抗原混合。本專利技術還提供制備疫苗藥盒的方法，包括如上所述制備乳液并將乳液與抗原組分一起包裝到藥盒中作為藥盒組分。本專利技術還提供根據本專利技術方法制備的鯊烯。本專利技術還提供含本專利技術所述方法制備的鯊烯的水包油乳液。本專利技術還提供含本專利技術所述方法制備的鯊烯的疫苗。 本專利技術還提供本專利技術方法所述制備的鯊烯在疫苗中的應用。純化蒸餾含鯊烯組合物可源自任何來源，如黑液皂化物撇渣；妥爾油皂；粗制妥爾油；妥爾油樹脂；甘蔗油；油和脂肪的提取、脫膠和精煉的殘余物；脂肪酸和酯類的蒸餾殘余物；植物油的脫臭餾出物；橄欖油；大豆油；米糠油；鯊魚肝油；牛脂；.咖啡油；魚油；鱈魚肝油；麥胚芽油；玉米胚芽油；棕櫚油；酸洛樹油(andiroba oil);和番爺殘余物的油。具體地，含鯊烯的化合物可源自鯊魚肝油。所述純化蒸餾從含鯊烯組合物中移除雜質，產生純化組合物。含鯊烯組合物通常是液體。純化蒸餾前，含鯊烯組合物可含有雜質如角鯊胺、烷基甘油、脂肪酸(如Ω-3-脂肪酸)、維生素A和D、姥鮫烷(pristine)、甘油三酸酯、甘油醚和脂肪醇。所述純化蒸餾在溫度T1進行，其中T1足以使鯊烯沸騰，即T1可大于或等于鯊烯的沸點。760mm Hg (即I個大氣壓)時鯊烯的沸點為429-430° C。液體的沸點表示該化合物液相的蒸氣壓等于作用于該液體表面上的外部壓力的溫度。因此，鯊烯的沸點，也即T1的下限取決于施加于含鯊烯組合物的表面的外部壓力。該現象為本領域熟知，且技術人員能計算所用給定蒸餾壓力下觀察到的鯊烯沸點。或者，技術人員能基于所需觀察到的鯊烯沸點來計算所需的蒸餾壓力。所述計算可用列線圖進行。在一個實施方式中，所述純化蒸餾可在至少70° C的溫度進行，如至少75° C或至少80° C。在另一實施方式中，所述純化蒸餾可在低于140° C的溫度進行，如低于130° C、低于120° C、低于110° C、低于100° C、低于95° C、低于90° C或低于85° C。在一個實施方式中，所述純化蒸餾可在接近真空下進行。具體地，所述純化蒸餾可在至少O. 5 μ m Hg的壓力下進行,如至少O. 75 μ m Hg或至少I μ m Hg。所述純化蒸懼可在低于5 μ m Hg的壓力下進行，如低于2. 5 μ m Hg或低于2 μ m Hg。本專利技術的其他實施方式包括上述引用的最小和最大溫度以及最小和最大壓力的組合。所述純化蒸餾可產生含至少95%鯊烯的組合物，如至少96%鯊烯、至少97%鯊烯、至少98%鯊烯、至少99%鯊烯、至少99. 5%鯊烯、至少99. 8%鯊烯、至少99. 9%鯊烯或甚至100%鯊烯。本文所引全部百分比是重量百分比且可用氣相色譜(GC)測量。GC技術可通過將溶于己烷的鯊烯樣品注射到配有火焰離子檢測器(FID)的氣相色譜上來進行。分析可在30m X 0. 32mm x 0. 50mm毛細管柱上進行，維持于200° C持續2分鐘，然后以每分鐘提高12° C升到310° C，在此維持9分鐘。注射孔和FID分別維持于300° C和320° C。鯊烯峰值的鑒定用GC/MS (用質量選擇檢測器的氣相色譜)建立。純度報告為鯊烯峰面積占色譜中所有峰面積之和的百分比。所述純化蒸餾可在所述變性蒸餾之前進行，產生純化的組合物。或者，所述純化蒸餾可在所述變性蒸餾之后進行，產生變性的純化組合物。變性蒸餾鯊魚和因而源自鯊魚肝油的鯊烯可含有人類過敏的蛋白。人類可能過敏的常見魚蛋白是在鯊魚中發現的小清蛋白。此外，污染蛋白或材料可在例如純化蒸餾之后或作為鯊烯的降解產物而被引入鯊烯組合物中。可能的污染蛋白或材料包括丙酮、乙醛、甲醛和水。優選地，變性蒸餾步驟使含鯊烯組合物變性和/或從中移除蛋白，尤其是小清蛋白和任何污染蛋白，從而提供變性的組合物。本專利技術方法的另一優點是變性蒸餾可保證含鯊烯組合物中存在的任何潛在病毒失活和/或從純化的組合物中移除。因此所述變性組合物用于人·類應用比非變性組合物安全。不希望被理論所限制，鯊烯的沸點取決于施加在含鯊烯組合物表面的外部壓力。然而，含鯊烯組合物中存在的任何蛋白會變性的溫度通常獨立于施加在含鯊烯組合物表面的外部壓力。因此，變性蒸餾可在特定溫度下進行，而不考慮進行蒸餾的壓力。具體地，所述變性蒸餾可在T2的溫度下進行，其中T2可大于或等于200° C，如大于或等于205° C、大于或等于210° C、大于或等于215° C、大于或等于220° C、大于或等于230° C、大于或等于240° C、大于或等于250° C、大于或本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：M·霍拉，
申請(專利權)人：諾華有限公司，
類型：
國別省市：