一種NGAL納米磁珠免疫快速定量檢測試劑盒制造技術

本實用新型專利技術公開了一種NGAL納米磁珠免疫快速定量檢測試劑盒，包括底襯、吸水墊，底襯上從左到右依次粘貼樣品墊、免疫納米磁珠結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述免疫納米磁珠結合墊上包被有NGAL單克隆抗體相偶聯的納米磁珠，所述硝酸纖維素膜上包被有NGAL抗體作為檢測線和兔抗鼠IgG抗體作為質控線。本實用新型專利技術實現了快速檢測，同時具有操作方便、準確率和靈敏度高的優點。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本技術屬于臨床醫學診斷領域，具體涉及一種NGAL納米磁珠免疫快速定量檢測試劑盒。
技術介紹
中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(neutrophil gelatinase-associatedlipocalin, NGAL)是1993年在中性粒細胞內首次被發現的，與炎癥、胚胎發育、免疫應答、趨化作用、信號轉導以及多種腫瘤的發生于發展等過程相關。近年來國內外研究表明，NGAL蛋白在多種疾病發生過程中具有特異性表達變化的特點，使得NGAL成為檢測疾病的生物標志物。近年美國臨床化學協會(AACC)年度會議的研究結果發表得知檢測尿中中性粒細胞明膠酶相關載脂蛋白可能有助于臨床醫生檢測心臟移植患者環孢霉素誘導的毒性，以及調節環孢霉素劑量以預防其對腎臟造成的不可逆傷害。中國專利CN101163971研究在急性腎衰竭(ARF)、急性腎小管壞死(ATN)和急性腎小管間質性腎病(ATIN)發病的早期，尿液和血液中NGAL水平顯著增加，因此NGAL是早期檢測腎臟對缺血性損傷的標志物。目前，檢測NGAL方法主要有酶聯免疫法(中國專利CN101650369)、基于抗體免疫的微型柱測試法(中國專利CN101163971)和膠乳免疫比濁法(中國專利CN102072960A)。酶聯免疫法操作容易受到酶活性變化的影響，結果不太準確；膠乳比濁法反應特異性不好，所需試劑比較復雜。磁性納米顆粒技術通過借助小型儀器對試紙條上免疫磁珠微量信號的檢測從而對樣品實行定量檢測，大大提高了檢測的靈敏度，使得這一技術得到快速發展。
技術實現思路
本技術的目的是提供一種NGAL納米磁珠免疫快速定量檢測試劑盒，將超順磁性納米顆粒作為標記物，具有簡便快速、定量準確的優點。本技術通過以下技術方案實現一種NGAL納米磁珠免疫快速定量檢測試劑盒，包括底襯、吸水墊，底襯上從左到右依次粘貼樣品墊、免疫納米磁珠結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，免疫納米磁珠結合墊上包被有NGAL單克隆抗體相偶聯的納米磁珠，硝酸纖維素膜上包被有NGAL抗體作為檢測線和兔抗鼠IgG抗體作為質控線。所述納米磁珠為直徑50_200nm的超順納米磁珠。所述硝酸纖維素膜上包被的NGAL抗體為NGAL單克隆抗體或多克隆抗體。 所述免疫納米磁珠結合墊材質為玻璃纖維素膜或聚酯膜。本技術所述一種NGAL納米磁珠免疫快速定量檢測試劑盒的檢測原理如下利用納米磁珠標記NGAL抗體，在硝酸纖維素膜上包被NGAL相應的配對的抗體，檢測時當樣品中含有NGAL時，標記納米磁珠的NGAL抗體和樣品中NGAL結合形成復合物，然后層析在硝酸纖維素膜上于檢測線上NGAL配對抗體結合，聚集在檢測線上，數分鐘后，再通過MICT磁信號檢測儀測定檢測線上捕獲磁珠的含量，從而得知樣品中NGAL的含量。與現有技術相比，本技術具有以下有益技術效果本技術通過超順納米磁珠與抗體結合測定樣品中NGAL含量，所用超順磁性納米磁珠不受其他有色雜質干擾，通過高靈敏度磁性檢測儀測量結合在免疫磁性復合物上的微粒所產生的局部磁場效應，進而得出所測分析物的定量結果，并高于同類目測法。附圖說明圖I NGAL納米磁珠免疫快速定量檢測試劑盒結構示意圖。其中，I、底襯；2、樣品墊；3、免疫納米磁珠結合墊；4、硝酸纖維素膜；5、吸水墊；6、檢測線；7、質控線。 具體實施方式以下結合附圖對本技術做進一步詳細描述如圖I所示，一種NGAL納米磁珠免疫快速定量檢測試劑盒，包括底襯I、吸水墊5，底襯I上從左到右依次粘貼樣品墊2、免疫納米磁珠結合墊3、硝酸纖維素膜4和吸水墊5，免疫納米磁珠結合墊3上包被有NGAL單克隆抗體相偶聯的納米磁珠，硝酸纖維素膜4上包被有NGAL抗體作為檢測線6和兔抗鼠IgG抗體作為質控線7。所述納米磁珠為直徑50_200nm的超順納米磁珠。所述硝酸纖維素膜4上包被的NGAL抗體為NGAL單克隆抗體或多克隆抗體。所述免疫納米磁珠結合墊3材質為玻璃纖維素膜或聚酯膜。實施例I本技術NGAL納米磁珠免疫快速定量檢測試劑盒制備方法，包括如下步驟I)抗NGAL免疫磁珠的制備取適量50nm的超順納米磁珠(購自上海奧潤微納新材料科技有限公司)懸浮于含有20 μ g/ml NGAL單克隆抗體3B1的20mmol/L pH7. 5的PBS緩沖液，37°C下孵化致敏1-1. 5h，再于4°C下包被過夜。加O. lmol/L的甘氨酸溶液終止反應，再用O. 5%小牛血清封閉磁珠。包被好的磁珠經過多次洗滌后，加入10%硫酸銨于4°C保存。所述NGAL單克隆抗體3B1是由雜交瘤細胞株3B1產生的，所述雜交瘤細胞株3B1保藏單位為中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，其保藏編號為CCTCC NO :C201249，保藏日期為2012年5月9號。2)包被免疫納米磁珠結合墊3的制備將步驟I)制備好的免疫磁珠以Bio-Dot儀器噴涂到免疫納米磁珠結合墊3上，噴量I. 0ul/cm，25°C干燥4 8小時，密封干燥保存，所述免疫納米磁珠結合墊3材質是玻璃纖維素膜。3)檢測線6的制備將NGAL單克隆抗體4C2使用20mmol/L的PBS (pH7. 2)稀釋到4mg/ml的濃度，O. 8ul/cm在硝酸纖維素膜4上劃線，在硝酸纖維素膜4上劃線，在干燥箱內20°C鼓風干燥12h。所述NGAL單克隆抗體4C2是由雜交瘤細胞株4C2產生的，所述雜交瘤細胞株3B1保藏單位為中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，其保藏編號為CCTCC NO :C201250，保藏日期為2012年5月9號。4)質控線7的制備將兔抗鼠IgG抗體按4mg/ml的濃度，O. 8ul/cm在硝酸纖維素膜4上劃控制線，該線與檢測線6平行，然后在干燥箱內20°C鼓風干燥12h，密封干燥保存。5)樣品墊2的制備將樣品墊2用PBS緩沖液浸泡2 4小時，取出后25°C干燥8小時。6)試紙條組裝在底襯I上順次相互搭接地粘貼樣品墊2、免疫納米磁珠結合墊3、硝酸纖維素膜4和吸水墊5得到試紙板，按照要求切割成適當寬度的試紙條。 實施例2本技術NGAL納米磁珠免疫快速定量檢測試劑盒另一種制備方法，包括如下步驟I)抗NGAL免疫磁珠的制備取適量ISOnm的超順納米磁珠(購自上海奧潤微納新材料科技有限公司)懸浮于含有20 μ g/ml單克隆抗體3B1的20mmol/L ρΗ7· 5的PBS緩沖液，37°C下孵化致敏1-1. 5h，再于4°C下包被過夜。加O. lmol/L的甘氨酸溶液終止反應，再用O. 5%小牛血清封閉磁珠。包被好的磁珠經過多次洗滌后，加入10%硫酸銨于4°C保存。2)包被免疫納米磁珠結合墊3的制備將步驟I)制備好的免疫磁珠以Bio-Dot儀器噴涂到免疫納米磁珠結合墊3上，噴量I. 0ul/cm，25°C干燥4 8小時，密封干燥保存，所述免疫納米磁珠結合墊3材質是聚酯膜。3)檢測線6的制備將NGAL多克隆抗體使用20mmol/L的PBS (pH7. 2)稀釋到4mg/ml的濃度，O. 8ul/cm在硝酸纖維素膜4上劃線，在硝酸纖維素膜4上劃線，在干燥箱內20°C鼓風干燥12h。所述多克隆抗體是采用本領域熟練技術人員熟知的常規方法免疫鼠獲得抗血清制備而得。4)質控線7的制備將兔抗鼠IgG抗體按4mg/ml本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種NGAL納米磁珠免疫快速定量檢測試劑盒，包括底襯、吸水墊，其特征在于底襯上從左到右依次粘貼樣品墊、免疫納米磁珠結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述免疫納米磁珠結合墊上包被有NGAL單克隆抗體相偶聯的納米磁珠，所述硝酸纖維素膜上包被有NGAL抗體作為檢測線和兔抗鼠IgG抗體作為質控線。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：蘇恩本，顏彬，黃力，王勇，李靖，沈小娟，
申請(專利權)人：南京基蛋生物科技有限公司，
類型：實用新型
國別省市：