一種膠原蛋白組織工程皮膚的制備方法技術(shù)

一種膠原蛋白組織工程皮膚的制備方法，它包括以下步驟：a、膠原蛋白的提取，b、膠原蛋白與殼聚糖的復配，c、膠原蛋白與PLGA得復合，將PLGA立體支架放入模具中，注入膠原溶液使其沒過支架，于-20℃凍結(jié)，該PLGA立體支架由PLGA溶液經(jīng)靜電紡根據(jù)模具的規(guī)格制成，將經(jīng)凍結(jié)的模具進行真空冷凍干燥，得到由膠原-殼聚糖和PLGA組成的復合支架。它制備出來的人工皮膚，可以用于各種創(chuàng)面修復，生物相容性好，可替代自體植皮，用途廣泛，前景廣闊。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及醫(yī)用材料
，更具體地說涉及。
技術(shù)介紹
膠原蛋白是動物體內(nèi)含量最豐富的蛋白質(zhì)，它屬于不溶性纖維型蛋白質(zhì)，也是細胞外基質(zhì)中的一類，膠原蛋白可以從動物中提取不同組織中不同類型的膠原蛋白，其功能和作用也不同。提取膠原蛋白能夠溶解的一般是前膠原。膠原蛋白是人體皮膚中的主要成分，皮膚中膠原蛋白占了 72 %，真皮中80 %是膠原蛋白，膠原蛋白在皮膚中構(gòu)成了一張細密的彈力網(wǎng)，鎖住水分，如支架般支撐著皮膚，承托著乳房，它使細胞胞漿豐滿、水分充盈， 皮膚充滿彈性、潤澤、細膩、光滑”。膠原蛋白可使血液凝固，具有凝血功能，用作傷口止血敷料，主要是基于膠原蛋白能夠與傷口緊密結(jié)合，滲入新生組織當中，并作為細胞生長時之支架。I型膠原蛋白屬于序列保守性的蛋白質(zhì)，在哺乳動物不同種屬之間氨基酸種類，數(shù)目和排列順序上基本相同，因此抗原性很低；再通過生化方法切去兩端非螺旋性的多肽，進一步降低其抗原性，使通過生化提取膠原蛋白并應用成為可能。聚乳酸-輕基乙酸共聚物(poly (lactic-co-glycolic acid), PLGA)由兩種單體——乳酸和羥基乙酸隨機聚合而成，是一種可降解的功能高分子有機化合物，具有良好的生物相容性、無毒、良好的成囊和成膜的性能，被廣泛應用于制藥、醫(yī)用工程材料和現(xiàn)代化工業(yè)領域。在美國PLGA通過FDA認證，被正式作為藥用輔料收錄進美國藥典。PLGA可以通過靜電紡絲的方法制成一定強度的紗線，經(jīng)編織成網(wǎng)做成支架纖維，具有生物可降解性、可被人體吸收。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的就是針對現(xiàn)有技術(shù)之不足，而提供帶傳感器的輪轂軸承，它制備出來的人工皮膚，可以用于各種創(chuàng)面修復，生物相容性好，可替代自體植皮，用途廣泛，前景廣闊。本專利技術(shù)的技術(shù)解決措施如下，它包括以下步驟a、膠原蛋白的提取，取新鮮牛跟腱，去除筋膜，切成Icm 2cm長的小段，倒入氫氧化鈉溶液中充分攪拌進行病毒滅活，反應結(jié)束用4°C的純化水充分洗滌至中性；將經(jīng)預處理的牛跟腱放入組織搗碎機中充分搗碎,經(jīng)搗碎的牛跟腱放入反應釜中,加入4°C、pH=2的醋酸溶液，按重量計經(jīng)搗碎的牛跟腱醋酸溶液=1:60 80，再添加胃蛋白酶，胃蛋白酶的添加量為按重量計醋酸溶液的3% 10%,反應24h 48h ；反應結(jié)束將膠原溶液稀釋至料液比1:150，稀釋后的膠原溶液真空抽濾，收集濾液，不濾物進行2次提取，濾液中加入過氧化氫溶液滅酶，將經(jīng)過滅酶處理的膠原溶液經(jīng)4000r/min離心，取上清液，將澄清的膠原溶液至于鹽析操作臺上，用飽和氯化鈉溶液鹽析，直至氯化鈉的終濃度約為5%，經(jīng)鹽析的膠原溶液經(jīng)高速離心甩干去除多余水分；將經(jīng)甩干的膠原放入截留分子量為8000-14000Da的透析袋中，于4°C條件下進行透析脫鹽直至透析液中無氯離子檢出，將透析得到的膠原配制成5mg/ml的溶液；b、膠原蛋白與殼聚糖的復配，按O. 5%的比例將殼聚糖倒入蒸餾水中充分混勻，再按O. 5%的濃度加入醋酸充分攪拌搖勻，使殼聚糖溶解，按膠原蛋白殼聚糖=9:1的比例配制膠原-殼聚糖溶液，按O. 1%的比例加入戊二醛溶液進行交聯(lián)，配制好的溶液于負壓條件下除氣泡；C、膠原蛋白與PLGA得復合，將PLGA立體支架放入模具中，注入膠原溶液使其沒過支架，于-20°C凍結(jié)，該PLGA立體支架由PLGA溶液經(jīng)靜電紡根據(jù)模具的規(guī)格制成，將經(jīng)凍結(jié)的模具進行真空冷凍干燥，得到由膠原-殼聚糖和PLGA組成的復合支架。 本專利技術(shù)的有益效果在于采用PLGA靜電紡絲然后制備出纖維支架，再復合膠原蛋白，制備人工皮膚，可以用于各種創(chuàng)面修復，生物相容性好，可替代自體植皮，用途廣泛，前景廣闊。具體實施例方式實施例，它包括以下步驟a、膠原蛋白的提取，取新鮮牛跟腱，去除筋膜，切成Icm 2cm長的小段，倒入氫氧化鈉溶液中充分攪拌進行病毒滅活，反應結(jié)束用4°C的純化水充分洗滌至中性；將經(jīng)預處理的牛跟腱放入組織搗碎機中充分搗碎,經(jīng)搗碎的牛跟腱放入反應釜中,加入4°C、pH=2的醋酸溶液，按重量計經(jīng)搗碎的牛跟腱醋酸溶液=1:60 80，再添加胃蛋白酶，胃蛋白酶的添加量為按重量計醋酸溶液的3% 10%,反應24h 48h ；反應結(jié)束將膠原溶液稀釋至料液比1:150，稀釋后的膠原溶液真空抽濾，收集濾液，不濾物進行2次提取，濾液中加入過氧化氫溶液滅酶，將經(jīng)過滅酶處理的膠原溶液經(jīng)4000r/min離心，取上清液，將澄清的膠原溶液至于鹽析操作臺上，用飽和氯化鈉溶液鹽析，直至氯化鈉的終濃度約為5%，經(jīng)鹽析的膠原溶液經(jīng)高速離心甩干去除多余水分；將經(jīng)甩干的膠原放入截留分子量為8000-14000Da的透析袋中，于4°C條件下進行透析脫鹽直至透析液中無氯離子檢出，將透析得到的膠原配制成5mg/ml的溶液；b、膠原蛋白與殼聚糖的復配，按O. 5%的比例將殼聚糖倒入蒸餾水中充分混勻，再按O. 5%的濃度加入醋酸充分攪拌搖勻，使殼聚糖溶解，按膠原蛋白殼聚糖=9:1的比例配制膠原-殼聚糖溶液，按O. 1%的比例加入戊二醛溶液進行交聯(lián)，配制好的溶液于負壓條件下除氣泡；C、膠原蛋白與PLGA得復合，將PLGA立體支架放入模具中，注入膠原溶液使其沒過支架，于-20°C凍結(jié)，該PLGA立體支架由PLGA溶液經(jīng)靜電紡根據(jù)模具的規(guī)格制成，將經(jīng)凍結(jié)的模具進行真空冷凍干燥，得到由膠原-殼聚糖和PLGA組成的復合支架。本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種膠原蛋白組織工程皮膚的制備方法，其特征在于：它包括以下步驟：a、膠原蛋白的提取，取新鮮牛跟腱，去除筋膜，切成1cm～2cm長的小段，倒入氫氧化鈉溶液中充分攪拌進行病毒滅活，反應結(jié)束用4℃的純化水充分洗滌至中性；將經(jīng)預處理的牛跟腱放入組織搗碎機中充分搗碎，經(jīng)搗碎的牛跟腱放入反應釜中，加入4℃、pH=2的醋酸溶液，按重量計經(jīng)搗碎的牛跟腱∶醋酸溶液=1:60～80，再添加胃蛋白酶，胃蛋白酶的添加量為按重量計醋酸溶液的3%～10%，反應24h～48h；反應結(jié)束將膠原溶液稀釋至料液比1:150，稀釋后的膠原溶液真空抽濾，收集濾液，不濾物進行2次提取，濾液中加入過氧化氫溶液滅酶，將經(jīng)過滅酶處理的膠原溶液經(jīng)4000r/min離心，取上清液，將澄清的膠原溶液至于鹽析操作臺上，用飽和氯化鈉溶液鹽析，直至氯化鈉的終濃度約為5%，經(jīng)鹽析的膠原溶液經(jīng)高速離心甩干去除多余水分；將經(jīng)甩干的膠原放入截留分子量為8000？14000Da的透析袋中，于4℃條件下進行透析脫鹽直至透析液中無氯離子檢出，將透析得到的膠原配制成5mg/ml的溶液；b、膠原蛋白與殼聚糖的復配，按0.5%的比例將殼聚糖倒入蒸餾水中充分混勻，再按0.5%的濃度加入醋酸充分攪拌搖勻，使殼聚糖溶解，按膠原蛋白：殼聚糖=9:1的比例配制膠原？殼聚糖溶液，按0.1% 的比例加入戊二醛溶液進行交聯(lián)，配制好的溶液于負壓條件下除氣泡；c、膠原蛋白與PLGA得復合，將PLGA立體支架放入模具中，注入膠原溶液使其沒過支架，于？20℃凍結(jié)，該PLGA立體支架由PLGA溶液經(jīng)靜電紡根據(jù)模具的規(guī)格制成，將經(jīng)凍結(jié)的模具進行真空冷凍干燥，得到由膠原？殼聚糖和PLGA組成的復合支架。...

【技術(shù)特征摘要】
1.一種膠原蛋白組織工程皮膚的制備方法，其特征在于它包括以下步驟 a、膠原蛋白的提取，取新鮮牛跟腱，去除筋膜，切成Icm 2cm長的小段，倒入氫氧化鈉溶液中充分攪拌進行病毒滅活，反應結(jié)束用4°C的純化水充分洗滌至中性；將經(jīng)預處理的牛跟腱放入組織搗碎機中充分搗碎,經(jīng)搗碎的牛跟腱放入反應釜中,加入4°C、pH=2的醋酸溶液，按重量計經(jīng)搗碎的牛跟腱醋酸溶液=1:60 80，再添加胃蛋白酶，胃蛋白酶的添加量為按重量計醋酸溶液的3% 10%，反應24h 48h ； 反應結(jié)束將膠原溶液稀釋至料液比1:150，稀釋后的膠原溶液真空抽濾，收集濾液，不濾物進行2次提取，濾液中加入過氧化氫溶液滅酶，將經(jīng)過滅酶處理的膠原溶液經(jīng)4000r/min離心，取上清液，將澄清的膠原溶液至于鹽析操作臺上，用飽和氯化鈉溶液鹽析，直至氯化鈉的終...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張新強，韓春茂，胡修元，張銳，
申請(專利權(quán))人：紹興好士德醫(yī)用品有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：