從中藥青龍衣中提取具有抗腫瘤活性組分的方法技術

本發明專利技術公開了一種從中藥青龍衣中提取具有抗腫瘤活性組分的方法。本發明專利技術采用大孔吸附樹脂技術，從中藥青龍衣中分離出活性組分，該組分同時具有抑制S180和H22小鼠移植性腫瘤生長及抑制人肺癌A549細胞株增殖的活性。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種中藥的活性組分提取方法，特別涉及一種。
技術介紹
中藥青龍衣為胡桃科植物胡桃楸(Jugland mandshurica Maxim.)和胡桃(Juglans regia L.)的未成熟外果皮。始載于《開寶本草》，稱之為胡桃青龍。古籍《方脈正宗》、《救急方》和《本草綱目》中均有記載，主要用于治療胃、腹痛、水痢、痛腫瘡毒及皮膚冼瘡等。現代醫藥工作者在繼承前人臨證經驗的基礎上，不斷深入研究，發現了青龍衣的新藥效，拓寬了其藥用范圍。在抗腫瘤作用方面，中藥青龍衣的粗提取物對食道癌、胃癌和肺癌等癌癥的有效率達30%以上，無其它抗癌藥的毒副作用，并能減輕病人由于癌癥所引起 的疼痛，是一種頗具前景的抗腫瘤新藥。青龍衣還能治療胃炎、胃潰瘍、皮膚病和糖尿病等疾病，并具有顯著的療效。目前，對中藥青龍衣抗腫瘤活性物質的研究報道較多，主要是單體化合物及主要含有某單體化合物的提取物。專利200710144961. X中公開了一種具有抗腫瘤活性的新化合物青龍衣素A及其提取物和制備的方法。該方法采用大孔吸附樹脂和凝膠色譜相結合的技術，分離得到青龍衣素A及其含量大于70%的提取物。但僅對青龍衣素A進行了抗腫瘤活性評價。專利200710144962. 4和200710017664. 9中公開了從青龍衣中分離和制備具有抗腫瘤活性的新化合物。然而，中藥具有整體性和作用多靶點的特點，僅對青龍衣中某單體化合物進行活性評價不能全面反映中藥青龍衣的抗腫瘤活性。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種。針對上述不足，結合大孔樹脂在天然產物分離純化方面的獨特優勢，本專利技術采用大孔吸附樹脂技術，從中藥青龍衣中分離制備活性組分，該組分同時具有抑制S18tl和H22小鼠移植性腫瘤生長及抑制人肺癌A549細胞株增殖的活性。一種，其特征在于該方法以中藥青龍衣為原料，依次有提取步驟、萃取步驟以及大孔吸附樹脂分離步驟三個步驟提取步驟中藥青龍衣用體積濃度50% 100%乙醇溶液進行加熱回流提取數次，過濾后將提取液合并、濃縮、減壓干燥，得浸膏I;萃取步驟將浸膏I加水分散后，用乙酸乙酯萃取數次，得乙酸乙酯萃取液，將萃取液合并、經濃縮、減壓干燥，得浸膏II ；大孔吸附樹脂分離步驟將浸膏II用體積濃度O 45%的乙醇溶液溶解，取浸膏II溶液的上清液，利用大孔吸附樹脂柱進行吸附，用體積濃度O 100%乙醇洗脫數次，收集洗脫液，經濃縮、減壓干燥得浸膏III，為中藥青龍衣的抗腫瘤活性組分。在提取步驟中，體積濃度50% 100%乙醇的加入量為干燥中藥青龍衣質量的3 10倍，加熱回流提取I 5次，每次I 4小時，溫度為60 90°C，過濾后，將提取液合并、濃縮、減壓干燥，得浸膏I。在萃取步驟中，將浸膏I用I : 10 I : 50倍體積的水進行分散，浸膏I溶液與萃取用乙酸乙酯體積比為I : I I : 5，萃取在20 35°C下進行2 6次，將乙酸乙酯萃取液合并、濃縮、減壓干燥，得浸膏II。在大孔吸附樹脂分離步驟中，采用體積濃度O 45%的乙醇溶液溶解浸膏II，力口入量為浸膏II質量的10 50倍，取浸膏II溶液的上清液，采用大孔吸附樹脂進行吸附，其中大孔吸附樹脂與浸膏II的質量比為I : 5 I : 20，樹脂柱徑高比為I : 8 I : 15，流速為5 15mL/min，用體積濃度O 100%乙醇洗脫數次，濃度由低到高變換2 5個梯度，每個梯度的洗脫液體積為5 15個BV，流速為5 15mL/min，收集洗脫液，經濃縮、減壓干燥得浸膏III。 本專利技術所用的大孔吸附樹脂為DlOl型、AB-8型、HPD 450型、DM-130型、YWD OlF型、YWD 01G3 型、ADS-17 型、D 312 型、DM 301 型、HPD 750 型、LSA-40 型、LSA-21 型、LSA-10型中的任意一種。本專利技術所用的大孔吸附樹脂效果最好的為DlOl型。在所有的步驟中，對浸膏的濃縮、減壓干燥的溫度控制在30 70°C，減壓真空度為-O. 04 -O. 08MPa。本專利技術中藥青龍衣的活性組分具有抑制小鼠S18tl和H22移植性腫瘤生長活性及抑制人肺癌A549細胞株增殖活性。在小鼠S18tl腫瘤模型中，中藥青龍衣活性組分(300mg/kg)可顯著抑制S18tl移植性腫瘤的生長，抑瘤率為49. 58% (p < O. 01);中藥青龍衣活性組分(200mg/kg)可顯著抑制H22小鼠移植性腫瘤的生長，抑瘤率為43. 17% (P <0.01)。結果表明，在該劑量下，中藥青龍衣的活性組分具有顯著的抑制小鼠S18tl和H22移植性腫瘤生長的活性。在抑制人肺癌A549細胞株增殖活性評價試驗中，中藥青龍衣活性組分(100μ g/mL)對人肺癌A549細胞株增殖抑制率為88. 7%，經計算IC5tl值為86. 18 μ g/mL。結果表明，中藥青龍衣活性組分具有一定的抑制人肺癌A549細胞株增殖的作用。附圖說明圖I為實施例3青龍衣活性組分抑制人肺癌A549細胞增殖的抑制率。具體實施例方式以下通過具體實施例進一步說明本專利技術，但實施例僅用于說明，并不能限制本專利技術的范圍。實施例I :中藥青龍衣活性組分的制備材料來源中藥青龍衣為胡桃科植物胡桃(Juglans regia L.)的未成熟的干燥外果皮，8月采集于甘肅省天水市郊區。提取和制備將干燥青龍衣I公斤，5L 70%乙醇80°C加熱回流提取3次，每次2小時，過濾，合并3次提取液，濃縮(真空-O. 07MPa、溫度為50°C)，減壓干燥(真空-O. 07MPa、溫度為50°C )，得浸膏I。用20倍量水將浸膏I分散后，用浸膏I溶液2倍量乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，濃縮、減壓干燥(真空_0.07MPa、溫度為50°C)，得浸膏II。浸膏II用10倍量20%乙醇溶解，取上清液，采用D 101型大孔吸附樹脂進行吸附(樹脂與原料質量比為I : 8，樹脂柱徑高比為I : 10)，流速為10mL/min，依次用30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇洗脫，每個梯度的洗脫液體積為10個BV，流速為5mL/min，收集50%乙醇洗脫部位，濃縮、減壓干燥(真空度-O. 07MPa、溫度為50°C )，得中藥青龍衣活性組分。實施例2 抑制小鼠S18tl和H22移植性腫瘤生長活性的試驗試驗動物昆明種小鼠,雄性，體重18_22g。藥物與試劑注射用生理鹽水(空白對照)，環磷酰胺(陽性對照)，青龍衣活性組分。瘤株小鼠實體瘤S18tl和小鼠肝癌H22。 試驗方法對小鼠瘤重和免疫器官指數的影響將雄性小鼠隨機分組，分別為青龍衣活性組、環磷酰胺組、生理鹽水組。將腫瘤細胞懸液(約IX IO6 2X IO6CelVmL)O. 2mL接種于小鼠右前腋皮下，接種24h后，各組灌胃(i.g.)給藥，連續10d。末次給藥后處死小鼠，稱體重、瘤重、胸腺和脾臟質量，計算抑瘤率、胸腺指數和脾臟指數。結果見表I和表2:表I中藥青龍衣活性組分對小鼠S18tl移植性腫瘤生長抑制情況劑量抑瘤率組別動物數胸腺指數脾臟指數 (mg/kg)(%)青龍衣活性 3001249.58 2.1074±0.9018 8.3878±5.6812 組分 環磷酰胺201275.87 1.612±0本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種從中藥青龍衣中提取具有抗腫瘤活性組分的方法，其特征在于該方法以中藥青龍衣為原料，依次有提取步驟、萃取步驟以及大孔吸附樹脂分離步驟三個步驟：提取步驟：中藥青龍衣用體積濃度50％～100％乙醇溶液進行加熱回流提取數次，過濾后將提取液合并、濃縮、減壓干燥，得浸膏I；萃取步驟：將浸膏I加水分散后，用乙酸乙酯萃取數次，得乙酸乙酯萃取液，將萃取液合并、經濃縮、減壓干燥，得浸膏II；大孔吸附樹脂分離步驟：將浸膏II用體積濃度0～45％的乙醇溶液溶解，取浸膏II溶液的上清液，利用大孔吸附樹脂柱進行吸附，用體積濃度0～100％乙醇洗脫數次，收集洗脫液，經濃縮、減壓干燥得浸膏III，為中藥青龍衣的抗腫瘤活性組分。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：邸多隆，孫小明，柳軍璽，
申請(專利權)人：中國科學院蘭州化學物理研究所，
類型：發明
國別省市：