蜆殼花椒果皮多糖的制備方法及用途技術(shù)

蜆殼花椒果皮多糖的制備方法及用途，其方法的步驟為：(1)將干燥的蜆殼花椒果皮用粉碎機(jī)粉碎成40～60目的粉末；(2)置于提取器內(nèi)，以有機(jī)溶劑脫脂，重復(fù)此步驟兩次，過(guò)濾，得到脫脂后的濾渣；(3)按蒸餾水體積mL與濾渣重量g之比為10～20∶1，向?yàn)V渣中加入蒸餾水，在100℃提取2～3h，重復(fù)此步驟三次，合并三次提取液；(4)用Sevag法，或者酶解法除蛋白，離心，得上清液；(5)50℃～80℃減壓濃縮上清液，使溶液體積mL為第(1)步的蜆殼花椒粉末重量g的4～6倍，得到濃縮液；(6)向濃縮液中加乙醇至醇濃度為80％，靜置過(guò)夜，離心得到沉淀，干燥沉淀得到蜆殼花椒果皮多糖；其用途為在制備緩解和治療癌癥藥物中的用途。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及醫(yī)藥

技術(shù)介紹
腫瘤是目前危害人類健康的主要疾病之一。國(guó)內(nèi)外對(duì)抗腫瘤藥物的研究發(fā)現(xiàn)，化學(xué)抗癌藥物在作用于靶細(xì)胞的同時(shí)危機(jī)正常細(xì)胞，臨床上應(yīng)用的治療腫瘤化學(xué)藥物大多都會(huì)導(dǎo)致突變遺傳毒性，但中草藥的突變遺傳毒性不太明顯。中草藥抗癌活性成分主要包括皂甙、多糖、生物堿及其他成分，其中多糖抗腫瘤作用機(jī)制主要包括以細(xì)胞毒為主的直接抗腫瘤機(jī)制和免疫作用為主的間接抗腫瘤機(jī)制，已成為當(dāng)今抗腫瘤新藥發(fā)展的主要方向之O蜆殼花椒(Zanthoxylum Dissitum Hemsl.),又名單面針、山枇杷、大葉花椒、麻瘋刺、九牛藤、公麒麟、蛘殼花椒等，屬蕓香科花椒屬攀援藤本植物，根、莖及葉均可人藥，臨床上有祛風(fēng)活絡(luò)、散瘀止痛、解毒消腫之功效，民間用于治療腰腿疼痛、關(guān)節(jié)疼痛、跌打損傷等癥。蜆殼花椒也是許多中成藥組方中的主要成分，如婦科千金片，婦科外用洗液等，具有很高的藥用價(jià)值。近年來(lái)，對(duì)蜆殼花椒的研究主要為基礎(chǔ)研究，如化學(xué)成分分析、組織培養(yǎng)技術(shù)及生物學(xué)特性方面，據(jù)報(bào)道，蜆殼花椒中性親脂性成分對(duì)金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和大腸桿菌均有抑制作用，而對(duì)蜆殼花椒多糖的提取方法及抗腫瘤活性等方面研究，至今未見文獻(xiàn)報(bào)道和專利公開。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種具有抗腫瘤作用的中草藥有效部位-蜆殼花椒果皮多糖的制備方法。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的在于提供一種蜆殼花椒果皮多糖作為在制備緩解和治療癌癥藥物中的應(yīng)用。本專利技術(shù)是蜆殼花椒果皮多糖的制備方法及用途，其方法的步驟為(I)將干燥的蜆殼花椒果皮用粉碎機(jī)粉碎成40 60目的粉末；(2)置于提取器內(nèi)，以有機(jī)溶劑脫脂，重復(fù)此步驟兩次，過(guò)濾，得到脫脂后的濾渣；(3)按蒸餾水體積mL與濾渣重量g之比為10 20 1，向?yàn)V渣中加入蒸餾水，在100°c提取2 3h，重復(fù)此步驟三次，合并三次提取液；(4)用Sevag法，或者酶解法除蛋白，離心，得上清液；(5) 50°C 80°C減壓濃縮上清液，使溶液體積mL為第(I)步的蜆殼花椒粉末重量g的4 6倍，得到濃縮液；(6)向濃縮液中加乙醇至醇濃度為80%，靜置過(guò)夜，離心得到沉淀，干燥沉淀得到艦殼花椒果皮多糖。其用途是蜆殼花椒果皮多糖在制備緩解和治療癌癥藥物中的用途。本專利技術(shù)的方法簡(jiǎn)單，適于工業(yè)化生產(chǎn)，通過(guò)制備方法制得的蜆殼花椒果皮多糖以苯酚硫酸法測(cè)得總多糖含量> 76%，經(jīng)過(guò)體外抗腫瘤試驗(yàn)，證明蜆殼花椒多糖具有良好的抗腫瘤作用，可在制備緩解和治療癌癥藥物中應(yīng)用。蜆殼花椒果皮多糖對(duì)人宮頸癌細(xì)胞Hela及人肝癌細(xì)胞SMMC-7721有明顯的抑制生長(zhǎng)的作用。具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :蜆殼花椒果皮多糖的提取 (I)粉碎將干燥的蜆殼花椒果皮用粉碎機(jī)粉碎成40 60目的粉末；(2)脫脂將粉末置于提取器內(nèi)，以石油醚脫脂兩次，每次lh，過(guò)濾，得到濾渣，再用95%乙醇脫脂兩次，每次2h，過(guò)濾，揮發(fā)除去濾渣中的有機(jī)溶劑；(3)提取按蒸餾水體積mL與濾渣重量g之比為10 20 1，向?yàn)V渣中加入蒸餾水，在100°C提取2 3h，重復(fù)此步驟三次，合并三次提取液；(4)除蛋白用酶解法除蛋白，離心，得上清液；(5)濃縮50°C 80°C減壓濃縮上清液，得到濃縮液； (6)醇析向濃縮液中加95 %乙醇至醇濃度為80 %，靜置過(guò)夜，離心得到沉淀，干燥沉淀得到蜆殼花椒果皮多糖。以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，苯酚硫酸法檢測(cè)蜆殼花椒果皮多糖的含量為72. 9987% ο實(shí)施例2 :蜆殼花椒果皮多糖的提取(I)粉碎將干燥的蜆殼花椒果皮用粉碎機(jī)粉碎成40 60目的粉末；(2)脫脂將粉末置于提取器內(nèi)，以石油醚脫脂兩次，每次lh，過(guò)濾，得到濾渣，再用95%乙醇脫脂兩次，每次2h，過(guò)濾，揮發(fā)除去濾渣中的有機(jī)溶劑；(3)提取按蒸餾水體積mL與濾渣重量g之比為10 20 1，向?yàn)V渣中加入蒸餾水，在100°C提取2 3h，重復(fù)此步驟三次，合并三次提取液；(4)除蛋白用Sevag法除蛋白，離心，得上清液；(5)濃縮50°C 80°C減壓濃縮上清液，得到濃縮液；(6)醇析向濃縮液中加95%乙醇至醇濃度為80%，靜置過(guò)夜，離心得到沉淀，干燥沉淀得到蜆殼花椒果皮多糖。以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，苯酚硫酸法檢測(cè)蜆殼花椒果皮多糖的含量為76. 1895%。實(shí)施例3 :苯酚硫酸法測(cè)多糖含量(I)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取105°C干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品O. lOOOg，加蒸餾水溶解，定容于250mL容量瓶中，配成O. 4mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密吸取標(biāo)準(zhǔn)液I、2、3、4、5mL分別置于IOmL容量瓶中，以蒸餾水定容搖勻，得系列對(duì)照品溶液。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取上述系列對(duì)照品溶液I. OmL，分別置于IOmL比色管中，將比色管置于冰水中，分別向比色管加入ImL苯酚試劑，再加入濃硫酸4mL，待各管加完后同時(shí)搖勻，置于沸水加熱lOmin，冷卻定容并在490nm測(cè)定吸光度，另精密吸取蒸餾水I. OmL，同法操作，作為空白對(duì)照，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程。(3)樣品溶液多糖含量測(cè)定精密移取樣品溶液ImL于IOmL比色管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法測(cè)定吸光度，并根據(jù)回歸方程計(jì)算多糖含量。實(shí)施例4 :蜆殼花椒果皮多糖對(duì)人宮頸癌細(xì)胞Hela生長(zhǎng)的影響(I)腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)含有體積分?jǐn)?shù)為10%的小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基于37°C、5% C02條件的二氧化碳培養(yǎng)箱中對(duì)Hela細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。(2)實(shí)驗(yàn)分組及處理Hela細(xì)胞的培養(yǎng)0. 25%胰酶消化對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，用培養(yǎng)液稀釋調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至I X IoVmL細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)過(guò)夜。 (3)四甲基偶氮噻唑藍(lán)(MTT)法測(cè)定待細(xì)胞貼壁后加藥品進(jìn)行培養(yǎng)，每孔加100 μ L細(xì)胞懸液，100 μ L樣品，樣品濃度設(shè) lmg/mL、0. 5mg/mL、0. 25mg/mL、0. 125mg/mL、0. 0625mg/mL 等 5 個(gè)濃度梯度，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，空白對(duì)照組為有細(xì)胞無(wú)藥物的細(xì)胞懸液，陽(yáng)性對(duì)照組加50 μ L絲裂霉素和100 μ L的細(xì)胞懸液。每組均設(shè)5個(gè)重復(fù)，將培養(yǎng)板置于37°C、5% CO2及飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，然后每孔加濃度為5mg/mL的MTT溶液(溶于PH = 7. 4的PBS) 20 μ L，在同樣條件下繼續(xù)培養(yǎng)4h，然后吸去上清液加100 μ LDMSO溶解，搖床上搖lOmin，使充分溶解，用ELISA Reader于490nm處測(cè)定各孔光密度值(OD值)，并以下面公式計(jì)算樣品對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率。細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=(陰性對(duì)照組孔OD值-樣品孔OD值)/陰性對(duì)照組孔OD均值 X 100%并根據(jù)量效關(guān)系和直線回歸法計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC5(I。(4)MTT法測(cè)定蜆殼花椒果皮多糖對(duì)Hela細(xì)胞生長(zhǎng)的影響結(jié)果見表I。表I蜆殼花椒果皮多糖對(duì)Hela細(xì)胞生長(zhǎng)的影響樣品名稱濃度(mg/mL)抑制率(％)T""~ IC5o(mg/mL) Abs0.06258.07Λ ----0.4609_0.125__10.44__025__26.27__05__51.44___178.48_結(jié)果顯示，不同濃度的蜆殼花椒多糖溶液對(duì)Hela細(xì)胞均有抑制作用，且抑制作用與濃度呈明顯的劑量依本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：楊林，邵文斌，于愛紅，姚廣玉，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：蘭州理工大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：