本發明專利技術提供了改造的蛋白酶變體。具體而言，該蛋白酶變體包含選定表面位置處的可組合突變，所述突變影響酶的電荷和／或疏水性以增強得到的變體酶在選擇性應用中的至少一種需要的特性。也提供了包含蛋白酶變體的組合物，以及使用該組合物的方法。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術提供改造的蛋白酶變體。具體而言，該蛋白酶變體包含在選定的表面位置處的可組合突變，所述突變影響酶的電荷和/或疏水性以增強得到的變體酶在選擇性應用中的至少一種需要的特性。也提供了包含蛋白酶變體的組合物，以及使用該組合物的方法。
技術介紹
絲氨酸蛋白酶是羰基水解酶的亞類，所述羰基水解酶包含多種具有廣泛的特異性和生物學功能的酶類。在枯草桿菌蛋白酶上已經進行了許多研究，主要是由于它們在清潔和喂飼應用中的有用性。其他研究集中于可能減少這些酶在多種應用中的功能性的不利環境條件上(例如，暴露于氧化劑、螫合劑、極端的溫度和/或PH)。然而，本領域仍需要能抵抗這些不利條件并保留本領域目前已知的那些酶系統的活性或者具有改善的活性的酶系統的需求。專利技術概述本專利技術提供改造的蛋白酶變體。具體而言，該蛋白酶變體包含在選定的表面位置處的可組合突變，所述突變影響酶的電荷和/或疏水性以增強得到的變體酶在選擇性應用中的至少一種需要的特性。也提供了包含蛋白酶變體的組合物，以及使用該組合物的方法。在一個實施方案中，該蛋白酶變體是具有蛋白水解活性的芽孢桿菌屬(Bacillus) 枯草桿菌蛋白酶的分離的枯草桿菌蛋白酶變體的成熟形式，并包含選自對、45、101、109、 118、213和217位置的兩個或多個位置的替換，其中所述位置通過對應于如SEQ ID N0:1所述的解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)枯草桿菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列而進行編號。在另一個實施方案中，該蛋白酶變體是具有蛋白水解活性的芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶的分離的枯草桿菌蛋白酶變體的成熟形式，并包含選自24、45、101、109、118、213和 217位置的兩個或多個位置的替換，其中所述位置通過對應于如SEQ ID NO 1所述的解淀粉芽孢桿菌枯草桿菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列而進行編號，并且其具有大于或等于0. 5的相對蛋白質表達水平性能指數(TCA PI)和/或去污活性性能指數(BMI PI)。在另一個實施方案中，該蛋白酶變體是具有蛋白水解活性的芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶GG36的分離的枯草桿菌蛋白酶變體的成熟形式，并包含選自SMQ、S24E, S24L, S24R、R45Q, R45E、R45L、S101Q, S101E、S101L、S101R、Q109E, Q109L, Q109R, G118Q, G118E、 G118L、G118R、T213Q、T213L、T213R、T213E、L217Q 和 L217E 的兩個或多個位置的兩個或多個替換，其中所述位置通過對應于如SEQ ID NO :1所述的解淀粉芽孢桿菌枯草桿菌蛋白酶 BPN'的氨基酸序列而進行編號。在另一個實施方案中，該蛋白酶變體是具有蛋白水解活性的芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶GG36的分離的枯草桿菌蛋白酶變體的成熟形式，并包含選自SMQ、S24E, S24L, S24R、R45Q, R45E、R45L、S101Q, S101E、S101L、S101R、Q109E, Q109L, Q109R, G118Q, G118E、 G118L、G118R、T213Q、T213L、T213R、T213E、L217Q 和 L217E 的兩個或多個位置的兩個或多個替換，其中所述位置通過對應于如SEQ ID NO :1所述的解淀粉芽孢桿菌枯草桿菌蛋白酶 BPN'的氨基酸序列而進行編號，并且其具有大于或等于0. 5的相對蛋白質表達水平性能指數(TCA PI)和/或去污活性性能指數(BMI PI)。在另一個實施方案中，該蛋白酶變體是具有蛋白水解活性的芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶FNA的分離的枯草桿菌蛋白酶變體的成熟形式，并包含選自S24Q、SME、S24L、SMR、 A45Q、A45E、A45L、A45R、S101Q、S101E、S101L、S101R、N109Q、N109E、N109L、N109R、K213Q、 K213E、K213L、K213R、L217Q和L217E的兩個或多個位置的兩個或多個替換，其中所述位置通過對應于如SEQ ID NO :1所述的解淀粉芽孢桿菌枯草桿菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列而進行編號。在另一個實施方案中，該蛋白酶變體是具有蛋白水解活性的芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶FNA的分離的枯草桿菌蛋白酶變體的成熟形式，并包含選自S24Q、SME、S24L、SMR、 A45Q、A45E、A45L、A45R、S101Q、S101E、S101L、S101R、N109Q、N109E、N109L、N109R、K213Q、 K213E、K213L、K213R、L217Q和L217E的兩個或多個位置的兩個或多個替換，其中所述位置通過對應于如SEQ ID NO :1所述的解淀粉芽孢桿菌枯草桿菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列而進行編號，并且其具有大于或等于0. 5的相對蛋白質表達水平性能指數(TCA PI)和/或去污活性性能指數(BMI PI)。在另一個實施方案中，該蛋白酶變體是具有蛋白水解活性的芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶GG36的分離的枯草桿菌蛋白酶變體的成熟形式， 并包含選自 S24Q-R45Q-S10IQ-Gl18Q-T213Q, R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, SlOlQ-Gl 18Q-T213Q, Gl18Q-T213Q, S24E-R45Q-S 101Q-G118Q-T213Q， S24E-R45E-S101Q-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101E-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101E -Q109E-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213Q, S24E-R45E-S101E-Q10 9E-G118E-T213E, S24L-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101Q-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S10IL-Gl18Q-T213Q, S24L-R45L-S101L-Ql09L-G118Q-T213Q， S2 4L-R45L-S101-Q109L-G118L-T213Q, S24L-R45L-S101L-Q109L-G118L-T213L, S24R-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S24R-S101Q-G118Q-T213Q, S24R-S101R-G118Q-T213Q, S2 4R-S101R-Q109R-G118Q-T213Q, S24R-S101R-Q109R-G118R-T213Q, S24R-S101R-Q109R-G118R-T213R, S24E-S101R-Q109R-G118R-T213R, S24E-R45E-S101R-Q10 9R-G118R-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109R-G118R-T213R，S24E-R45E-S101E-Q109E-G118R-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213R, S24E-R45E-S 101E-Q109E-G118E-T213E， S 24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q-L21本文檔來自技高網...
【技術保護點】
Ｏ：１所述的解淀粉芽孢桿菌（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）枯草桿菌蛋白酶ＢＰＮ’的氨基酸序列而進行編號。１．芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶的分離的枯草桿菌蛋白酶變體，其中所述枯草桿菌蛋白酶變體是具有蛋白水解活性的成熟形式，并包含在選自２４、４５、１０１、１０９、１１８、２１３和２１７的兩個或多個位置處的替換，其中所述位置通過對應于如ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：L·G·卡斯康佩雷拉，
申請(專利權)人：丹尼斯科美國公司，
類型：發明
國別省市：US
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