本發明專利技術的目的在于提供用于反應性高的抗磷脂抗體測定試劑的不溶性載體。另外，本發明專利技術還可提供抗磷脂抗體測定試劑及抗磷脂抗體的測定方法。本發明專利技術為抗磷脂抗體測定試劑所使用的不溶性載體，按照在２０ｍｍｏｌ／Ｌ的磷酸鈉水溶液（ｐＨ７．４）中固態成分濃度達到０．１％的方式進行混懸時的Ｚ－電位小于－４５ｍＶ。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及反應性高的抗磷脂抗體測定試劑所使用的不溶性載體。另外，本專利技術還提供抗磷脂抗體測定試劑及抗磷脂抗體的測定方法。
技術介紹
作為血液、尿等中所含微量物質的測定方法采用免疫學的測定方法。免疫學的測定方法基于抗原抗體反應的特異性的強大結合，即便從各種物質混存的試樣中也可特異地、靈敏度良好地對目標物質進行測定。但是，近年來對血液中的癌標記物、病毒等抗原，相對于細菌或病毒的抗體等極微量成分進行測定的需求有所提高，強烈需求免疫學測定方法的進一步的高靈敏度化。作為實現免疫學測定方法的高靈敏度化的嘗試，例如提出了在一定條件下對免疫學測定方法所使用的不溶性載體的ζ-電位進行測定，選擇處于_20mV以上且小于OmV的范圍的載體，高效且大量地將抗原或抗體物理吸附的方法(專利文獻1)；使用將免疫學測定方法所用膠乳粒子表面的磺酸基量控制為0. 005 0. 7 μ mol/m2范圍的載體的方法(專利文獻2)等。以往技術文獻專利文獻1日本特開平7-270423號公報專利文獻2日本國際公開第03/005031號小冊子
技術實現思路
專利技術預解決的技術問題本專利技術的目的在于提供反應性高的抗磷脂抗體測定試劑所用的不溶性載體。另外，本專利技術的目的在于提供抗磷脂抗體測定試劑及抗磷脂抗體的測定方法。用于解決技術問題的方法本專利技術人等發現，與通常的使蛋白質構成的抗原或抗體吸附在不溶性載體上的情況不同，在使磷脂吸附在ζ-電位為-20mV以上且小于OmV范圍的不溶性載體的方法中，具有無法足夠高靈敏度地測定抗磷脂抗體的問題。本專利技術人等進行深入研究，結果發現在使親水性部分少的磷脂吸附于不溶性載體時，與相同粒徑、Z-電位不同的不溶性載體相比較時，使用了 Z-電位低的不溶性載體的反應性更高，即可獲得高靈敏度的抗磷脂抗體測定試劑，進而完成本專利技術。具體地說，本專利技術為用于抗磷脂抗體測定試劑的不溶性載體，其在20mmol/L的磷酸鈉水溶液(PH7. 4)中按照固態成分濃度達到0. 進行混懸時的Z-電位小于_45mV。另外，本專利技術為使用上述不溶性載體的抗磷脂抗體測定試劑及使用上述不溶性載體的抗磷脂抗體的測定方法。對于使用Z-電位低的不溶性載體而獲得反應性高的抗磷脂抗體測定試劑的理由并不清楚。一般來說，Z-電位越接近0，則不溶性載體的排斥性越降低、變得越易凝集，因此可以說越是Z-電位接近0的不溶性載體，其反應性越高。但是，當電位完全消失、即達到0 時，由于發生了自身凝集，因而需要一定程度的電位。另外，即便是被不溶性載體吸附的抗原(或抗體)與發生反應的抗體(或抗原)之間的距離過近，由于難以發生抗原抗體反應， 因而認為保持一定程度的距離會引起穩定的反應。使蛋白質來源的抗原或抗體吸附在不溶性載體上時，由于蛋白質中的親水性氨基酸來源的電位會加于不溶性載體表面的電位，因此即便使用Z-電位接近0的不溶性載體， 在吸附了蛋白質來源的抗原或抗體后，會存在一定程度的電位。但是，當使磷脂吸附于不溶性載體時，由于磷脂本身的親水性部分很少，因而電位基本消失，使用Z-電位接近0的不溶性載體時，無法獲得穩定的反應。另外，由于Z-電位的絕對值增大，因而所載持的磷脂分子的方向可能變為適于與抗磷脂抗體反應的方向。以下詳細地說明本專利技術。本專利技術的用于抗磷脂抗體測定試劑的不溶性載體是在20mmol/L的磷酸鈉水溶液 (pH7. 4)中按照固態成分濃度達到0. 進行混懸時的Z-電位小于_45mV的不溶性載體。 由于上述Z-電位小于_45mV，使用本專利技術的用于抗磷脂抗體測定試劑的不溶性載體而成的抗磷脂抗體測定試劑具有很高的反應性。上述Z-電位的下限并無特別限定，實質上-IOOmV 左右為下限。上述Z-電位優選為_74mV以下。本專利技術的用于抗磷脂抗體測定試劑的不溶性載體并無特別限定，例如可舉出有機高分子粉末、微生物、血細胞、細胞膜片。其中，優選有機高分子粉末。上述有機高分子粉末可舉出天然高分子粉末、合成高分子粉末。上述天然高分子粉末并無特別限定，例如可舉出不溶性瓊脂糖、纖維素、不溶性葡聚糖等。上述合成高分子粉末并無特別限定，例如可舉出聚苯乙烯、苯乙烯-磺酸(鹽)共聚物、苯乙烯_(甲基)丙烯酸共聚物、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物、氯乙烯_(甲基) 丙烯酸酯共聚物、乙酸乙烯酯_(甲基)丙烯酸酯共聚物等。本專利技術的用于抗磷脂抗體測定試劑的不溶性載體可以是在表面導入有磺酸基或羧基等的不溶性載體。其中，合成高分子微粒優選為均勻分散于水介質中的膠乳粒子。上述膠乳粒子由具有苯基的聚合性單體和具有苯基及磺酸基的聚合性單體的共聚物構成。上述具有苯基的聚合性單體并無特別限定，例如可舉出苯乙烯、二乙烯基苯、乙基苯乙烯、α-甲基苯乙烯、ρ-甲基苯乙烯、ρ-氯苯乙烯、氯甲基苯乙烯等。這些具有苯基的聚合性單體可單獨使用，還可并用2種以上。其中優選苯乙烯。上述具有苯基及磺酸基的聚合性單體只要是能夠使聚合后的載體粒子表面含有磺酸基的單體則無特別限定，例如可舉出苯乙烯磺酸鹽、二乙烯基苯磺酸鹽、乙基苯乙烯磺酸鹽、α -甲基磺酸鹽等。另外，此時的鹽并無特別限定，例如可舉出鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽等。這些具有苯基及磺酸基的聚合性單體可單獨使用，還可并用2種以上。其中，優選苯乙烯磺酸鹽、更優選苯乙烯磺酸鈉。上述膠乳粒子通過將上述具有苯基的聚合性單體與上述具有苯基及磺酸基的聚合性單體共聚而獲得。作為使上述具有苯基的聚合性單體與上述具有苯基及磺酸基的聚合性單體共聚的方法，可以使用以往公知的方法，例如在作為溶劑裝有水的反應容器內添加上述具有苯基的聚合性單體、上述具有苯基和磺酸基的聚合性單體、聚合引發劑及根據需要的乳化劑， 在氮氣氣氛中進行攪拌的方法等。將上述具有苯基的聚合性單體與上述具有苯基和磺酸基的聚合性單體共聚時的聚合溫度并無特別限定，優選的下限為50°C、優選的上限為100°C。上述聚合溫度小于50°C 時，聚合反應有時不會充分地進行。上述聚合溫度超過100°C時，聚合速度變得過快，有時難以控制粒徑。上述聚合溫度的更優選的下限為60°C，更優選的上限為85°C。另外，聚合時間隨聚合性單體的組成、濃度及聚合引發劑等的條件而不同，通常為5 50小時。上述具有苯基和磺酸基的聚合性單體相對于上述具有苯基的聚合性單體的配合量有必要考慮通過共聚所獲得的粒子表面的磺酸基量及粒徑進行設定。并非使通常的蛋白質來源的抗原或抗體吸附在本專利技術的用于抗磷脂抗體測定試劑的不溶性載體上，而是使之吸附電荷少的磷脂。因而，當磺酸基量少時，則吸附了磷脂后的粒子之間的電荷排斥很弱、有發生自然凝集的危險，無法獲得穩定的試劑。因而，優選膠乳粒子表面的磺酸基量為 0. 1 μ mol/m2以上。因此，上述具有苯基和磺酸基的聚合性單體相對于具有苯基的聚合性單體的配合量優選為0. 02 0. 2重量％，使得共聚后的粒子表面的磺酸基量達到0. 1 0. 7 μ mol/m2。予以說明，上述膠乳粒子表面的磺酸基量可利用電導度滴定法(Journal of Colloid and Interface Sciences. 49 (3) 425，1974)求得，通過將該值除以由所得粒徑求得的粒子的總表面積，可求出每單位面積的磺酸基量。上述聚合弓I發劑并無特別限定，例如可舉出過硫酸鹽類等。上述過硫酸鹽類本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種不溶性載體，其為用于抗磷脂抗體測定試劑的不溶性載體，其特征在于，按照在ｐＨ７．４、２０ｍｍｏｌ／Ｌ的磷酸鈉水溶液中固態成分濃度為０．１％的方式進行混懸時的Ｚ－電位不到－４５ｍＶ。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：赤峰隆之，
申請(專利權)人：積水醫療株式會社，
類型：發明
國別省市：JP
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