一種直接進行半定量分析的免疫膠體金屬檢測技術及其制備方法和用途技術

本發明專利技術公開了一種用于待測物含量的半定量固相反應檢測技術及其制備方法和用途，是一種將待測物樣品與已知濃度的待測物標準比對品在同一反應體系下進行反應的直接檢測待測物含量的半定量膠體金屬免疫層析檢測技術，由固相膜、支撐片、顯色劑、點樣器、標準比對品組成，可制成多種即用型的待測物含量檢測產品，可有效地用于臨床檢測、食品、藥品和實驗用品等的待測物含量檢測，具有良好的適用價值和市場前景。

【技術實現步驟摘要】
一種直接進行半定量分析的免疫膠體金屬檢測技術及其制備方法和用途一種免疫膠體金屬檢測技術，特別是一種可直接進行半定量分析的 膠體金屬免疫層析檢測技術及其制備方法和用途。膠體金屬標記技術是以膠體金屬作為示蹤標志物或顯色劑，應用于抗原抗體反應 的一種新型免疫標記技術。由于它不存在內源酶干擾及放射性同位素污染等問題，且利用 不同顆粒大小的膠體金屬還可以作雙重甚至多重標記，使定位更加精確。因此已成為繼熒 光素、酶、同位素及乳膠標記技術之后的一種新型標記技術。現已廣泛應用于電鏡、流式細 胞儀、免疫印跡、體外診斷試劑、食品藥品質量檢測試劑的制造等領域。膠體金是由氯金酸在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成 為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態。膠體金在弱堿環境下帶 負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以不 影響蛋白質的生物特性。膠體金除了與蛋白質結合以外，膠體金顆粒還可以與其他多種生 物大分子物質(如毒素、抗生素、激素、核酸、多肽等)結合。根據膠體金的一些物理性狀， 如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，因而使膠體 金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。免疫膠體金屬檢測技術大體上可分為以液相反應為主的檢測技術和以固相載體 反應為主的檢測技術，其中以液相反應為主的檢測技術，如流式細胞檢測技術和用于光鏡、 電鏡水平定位、定性或定量研究特定抗原物質的組織、細胞或亞細胞結構的分布特性的液 相免疫組化測定技術，以固相載體反應為主的檢測技術，如廣泛使用的膠體金屬免疫層析 法等。與其他檢測方法比較，具有以下一些優點1)快捷迅速不論是免疫層析法還是斑點 免疫滲濾法都具有快速的特點，一般在幾分鐘之內就可得出結果，這是目前其它快速檢測 方法所無法達到的?；渺`敏度高免疫膠體金屬檢測方法并不因為其快速而犧牲了它的檢 測靈敏度，最低檢出量可達到0. lng/ml以下，如心肌肌鈣蛋白T快速檢測試劑。3)安全簡 便，由于膠體金屬本身具有顏色，定性檢測不需任何儀器和設備，肉眼即可判斷結果。4)生 產成本低廉。然而，目前被廣泛使用的以固相載體反應為主的檢測技術如不配備相應的檢測儀 器，僅依靠肉眼判斷結果，還仍局限在定性水平，只能在某一檢測水平上判斷有還是無，如 用于早孕檢測的早早孕膠體金法檢測試紙的尿液人絨毛膜促性腺激素最低檢出量為25U/ L，而正常尿液人絨毛膜促性腺激素的濃度1U/L以下，用于急性心肌梗死早期診斷的血液 心肌肌鈣蛋白I膠體金檢測試劑的最低檢出量為1. 5ng/ml，而正常血液心肌肌鈣蛋白I濃 度低于0. 15ng/ml。因此，只有存在如此大的陰性和陽性差異的情況下，現有的依靠肉眼判 斷的檢測方法才能判定檢測為陽性或陰性，但無法確定其具有進一步的臨床診斷和治療價 值的動態變化結果。因此，開發一種使用方便，操作快捷的可依靠肉眼判斷進行半定量分析 的的膠體金屬快速檢測技術將對提高醫療衛生、畜牧業、農業等領域服務質量和質量控制水平具有重要的意義。 本專利技術的目的是提供一種免疫膠體金屬檢測技術，特別是一種不需要依賴儀器設 備可直接進行半定量分析的免疫膠體金屬層析檢測技術及其制備方法和用途。為實現上述目的，本專利技術采用了如下技術方案。本專利技術所述的一種免疫膠體金屬檢測技術，其特征在于所述的檢測技術是一種將 待測物樣品與已知濃度的待測物標準比對品在同一反應體系下進行反應的不需要依賴儀 器設備可直接檢測待測物含量的半定量免疫膠體金屬層析檢測技術。所述的檢測技術由固 相膜、支撐片、顯色劑、點樣器、標準比對品組成，其中固相膜具有明顯的蛋白質結合特性包 括硝酸纖維素膜、PVDF膜、尼龍膜、DEAE纖維素膜，顯色劑為膠體金屬溶液標記的能與待測 物特異性結合的抗體或抗原，點樣器為能將微量待測樣品轉移至固相膜的移液裝置，支撐 片用于固定固相膜和其它檢測材料，標準比對品為已知濃度的待測物及其具有相同免疫特 性的衍生物，包括以下步驟1)將一種或一種以上的不同濃度的標準比對品預先固定至固相膜上，固相膜貼附 于支撐片上；2)用膠體金屬溶液標記能與待測物特異性結合的抗體或抗原，制備顯色劑；3)檢測時用點樣器直接將待測樣品點樣轉移到固相膜上，干燥固定；4)用特異性顯色劑對標準比對品和待檢樣品中的待測物在同一反應體系下進行 特異性著色；5)將待檢樣品中待測物的顯色強度與標準比對品的顯色強度進行比較，找出與待 檢樣品中待測物的顯色強度相近的標準比對品的濃度區間，進而進行待測樣品中待測物含 量的半定量分析。常用的具有明顯的蛋白質結合特性的固相模有硝酸纖維素膜 (NitrocelluloseBlotting Membranes, NC)禾口 PVDF 膜(Polyvinylidene-Fluoride)、尼龍 膜、DEAE纖維素膜等。硝酸纖維素膜是最廣泛使用的蛋白質轉移結合介質，對蛋白有很強 的結合能力，而且適用于各種顯色方法，包括同位素，化學發光(Luminol類)、常規顯色、染 色和熒光顯色，背景低，信噪比高。聚偏二氟乙烯(PVDF)膜作為基質的轉印膜，與硝酸纖 維素膜相比，PVDF膜在蛋白質截留能力，機械強度和化學相容性上都更優越的性能，市售硝 酸纖維素膜的典型結合量是80-100 μ g/cm2,而PVDF膜結合量是100-200 μ g/cm2。尼龍膜 也有用于蛋白結合，比較于硝酸纖維素膜來說，它的優點是結合力強，結實又柔軟且不易卷 曲，機械強度大，便于操作，缺點是背景高。所述的支撐片用于固定固相膜和承載顯色劑及其它檢測材料的承載結構包括支 撐底片、塑料外殼中的一種或一種以上的組分。本專利技術技術含有清洗劑，能清除非特異性與固相膜相結合的顯色劑，提高結合在 固相膜上的待測物的顯色效果。所屬的點樣器包括微量移液器、微型滴管及其它微量液體移印裝置。所述的膠體金屬溶液包括常用的膠體金以及其它膠體金屬顯色劑，如膠體硒、膠 體銀、膠體銅、膠體鐵。所述的固相檢測技術包括膠體金屬免疫層析法、膠體金屬雙球夾心法、膠體金屬 微板法。所述的檢測技術為膠體金屬免疫層析法，由包括支撐片、固相膜、顯色劑墊、樣品 墊、點樣器、標準比對品、吸水墊、上樣緩沖液、移液管組成，其中在支撐底片上依次裝有樣 品墊、顯色劑墊、固相膜、吸水墊，包括以下步驟1)將一種或一種以上的不同濃度的標準比對品預先固定至固相膜上；2)用膠體金屬溶液標記能與待測物特異性結合的抗體或抗原，制備顯色劑；3)將標記后的顯色劑噴涂至顯色劑墊上，干燥；4)檢測時用點樣器直接將待測樣品點樣轉移到固相膜上，干燥固定；5)在樣品墊加上樣緩沖液，使其向前泳動帶動顯色劑流經固相膜進入吸水墊，此 時顯色劑特異性地與標準比對品和待檢樣品中的待測物在同一反應體系下進行特異性著 色反應；6)將待檢樣品中待測物的顯色強度與標準比對品的顯色強度進行比較，找出與待 檢樣品中待測物的顯色強度相近的標準比對品的濃度區間，進而進行待測樣品中待測物含 量的半定量分析。所述的檢測技術，其特征在于聯合使用多種膠體金屬顯色信號放大技術提高檢測 靈敏度，包括免疫金銀染色放大技術、生物素_親合素放大技術、生物素_鏈霉親合素放大 技術、第二抗體結本文檔來自技高網...

【技術保護點】
１．一種免疫膠體金屬檢測技術，其特征在于所述的檢測技術是一種將待測物樣品與已知濃度的待測物標準比對品在同一反應體系下進行反應的直接檢測待測物含量的半定量膠體金屬免疫層析檢測技術。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉鳳鳴，
申請(專利權)人：劉鳳鳴，
類型：發明
國別省市：11[中國|北京]