一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒及其應用制造技術

本發明專利技術涉及一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒，它包括濃度為５０－１００毫克／毫升的纖維蛋白原、濃度為１００－１０００國際單位／毫升的凝血酶和濃度為２０－６０毫摩爾／升的氯化鈣。本發明專利技術也涉及所述試劑盒在制備在臨床腫瘤手術中阻斷組織外游離癌細胞的擴散的試劑中的應用。將所述的纖維蛋白原和凝血酶交替涂布，形成一層網絡狀致密的纖維蛋白膜，阻斷在腫瘤病人手術過程中由于機械創傷或切口所造成的游離腫瘤細胞的擴散，從而達到降低和減少腫瘤病人術后“病灶”復發和轉移的風險，提高病人的存活時間和幾率。

【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種用于形成在臨床腫瘤手術中可阻斷組織外游離癌細胞擴散的纖維蛋白膜的試劑盒；本專利技術也涉及所述試劑盒的應用。
技術介紹
腫瘤病人手術過程中由于機械創傷或切口所造成的游離腫瘤細胞的擴散，會增加腫瘤病人術后“病灶”復發和轉移的風險，降低病人的存活時間和幾率。纖維蛋白原和凝血酶等形成的復合物，可用于減少根治性乳房切除術和腫塊切除術后血清腫的形成；目前臨床上使用較多的纖維蛋白膠主要用于止血，上述產品都不能阻斷游離腫瘤細胞的擴散。因此，本專利技術提供的纖維蛋白膜試劑盒能將網狀致密的纖維蛋白膜用于阻斷游離癌細胞的擴散中。
技術實現思路
本專利技術的目的就是提供一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒；本專利技術的另一個目的是提供所述試劑盒的用途。本專利技術提供一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒，它包括濃度為50-100毫克/毫升的纖維蛋白原、濃度為100-1000國際單位/毫升的凝血酶和濃度為20-60毫摩爾/升的氯化鈣；所述的纖維蛋白原優選濃度為60-80毫克/毫升，更優選70毫克/毫升，所述的凝血酶優選濃度為300-800國際單位/毫升，更優選400-600國際單位/毫升，所述的氯化鈣優選濃度為30-50毫摩爾/升，更優選40毫摩爾/升；所述的凝血酶和氯化鈣組合成為凝血酶的氯化鈣溶液；所述的纖維蛋白原和凝血酶為人血液來源；所述的試劑盒還包括說明書。本專利技術還提供所述的試劑盒在制備纖維蛋白膜中的應用，及其在制備阻斷臨床腫瘤手術中游離腫瘤細胞擴散的試劑中的應用。本專利技術在臨床腫瘤手術中可以阻斷手術創傷和切割所引起的游離腫瘤細胞的擴散，提高腫瘤患者術后的生存率，有很好的生物相容性，并且使用方便。附圖說明圖1和圖2分別是用本專利技術試劑盒所形成的纖維蛋白膜在其不同位點處的電子掃描顯微鏡照片。圖3A1、圖3A2是對照組細胞侵染性實驗結果的顯微鏡照片圖3B1、圖3B2是實驗組去掉纖維蛋白膜后細胞侵染性實驗結果的顯微鏡照片圖3C1、圖3C2是從實驗組去掉的纖維蛋白膜的顯微鏡照片具體實施方式人體血液凝固過程已被研究即闡明，纖維蛋白原和凝血酶在其中的作用也為人們所熟知，而且也有許多利用該原理的產品在使用，但都用于防止術后血塊形成或用于止血。本專利技術人經過廣泛而深入的研究，發現通過凝血酶對纖維蛋白原的激活作用，使纖維蛋白原逐漸聚合后形成的一層網絡狀致密的纖維蛋白膜能阻斷腫瘤細胞穿透擴散，因而提供了一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒，其中的纖維蛋白原和凝血酶優選的為人血液來源。本專利技術試劑盒中的纖維蛋白原的濃度為50-100毫克/毫克，優選的為60-80毫克/毫升，最好是70毫克/毫升；凝血酶的濃度為100-1000國際單位/毫升，優選的為300-800國際單位/毫升，最好是400-600國際單位/毫升；氯化鈣的濃度為20-60毫摩爾/升，優選的為30-50毫摩爾/升，最好是40毫摩爾/升。本專利技術的試劑盒優選的還包括說明書。這樣使用本專利技術的試劑盒將試劑盒中的纖維蛋白原和凝血酶交替涂布2-4次，形成的纖維蛋白膜孔徑大于0微米小于10微米，更優選的是小于0.6微米，而人體腫瘤細胞一般直徑是大于10-100微米，因此，用本專利技術的試劑盒所形成的纖維蛋白膜能完全能阻斷所述人體腫瘤細胞的擴散。具體地說，纖維蛋白原和凝血酶交替涂布在腫瘤組織或“病灶”表面形成纖維蛋白膜，形成一層能阻斷腫瘤細胞穿透擴散的網絡狀致密的纖維蛋白膜，阻斷在腫瘤病人手術過程中由于機械創傷或切口所造成的游離腫瘤細胞的擴散，從而達到降低和減少腫瘤病人術后“病灶”復發和轉移的風險，提高病人的存活時間和幾率。本專利技術的優點在于(1)應用于臨床腫瘤手術中阻斷手術創傷和切割所引起的游離腫瘤細胞的擴散，提高腫瘤患者術后的生存率；(2)有很好的生物相容性；(3)使用方便。下面結合實施例說明本專利技術，但并不意味著以任何方式限制本專利技術。實施例1 纖維蛋白膜的形成(1)在0.8×0.8厘米的玻璃板上交替涂布3層70毫克/毫升的纖維蛋白原和凝血酶(由450國際單位/毫升凝血酶和40毫摩爾/升氯化鈣溶液組成)；(2)待涂膜凝固后，用2.5％的戊二醛固定液4℃固定2小時(固定后可貯存數周，對超微結構無明顯不良影響)；(3)用1％的鋨酸固定30分鐘后，脫水并臨界點干燥，裝樣上機觀測。結果見圖1、圖2所示的兩張電鏡照片，它們在纖維蛋白膜不同位點處拍攝得到，放大倍數為5,000倍的視野。可以看出，所形成的纖維蛋白膜沒有出現明顯的孔狀結構。由照片放大比例尺估計可知，蛋白膜所形成的孔徑大小是小于0.6μm的，而人體腫瘤細胞一般直徑大小為10-100μm，因此，形成的纖維蛋白膜是可以阻斷腫瘤細胞擴散。實施例2 纖維蛋白膜試劑盒用于阻斷組織外游離癌細胞擴散(1)用85毫克/毫升的纖維蛋白原和凝血酶(由700國際單位/毫升凝血酶和40毫摩爾/升氯化鈣溶液組成)交替涂布24孔板中的測試培養皿(inserts)的底部外表面3次，形成一層致密光滑的纖維蛋白膜；(2)用無血清培養基溶脹測試培養皿(inserts)底膜后，以0.5～1.0×106接種密度接入300微升的細胞懸浮液，其中包括胃癌細胞株MKN45和AGS，結腸癌細胞株Ls174T，以及乳腺癌細胞株MDA-MB-231，進行培養，培養48小時。(3)移去培養液，用棉簽輕輕擦拭沒有透過測試培養皿(inserts)底膜的細胞，染色20分鐘，晾干； (4)對照組不涂纖維蛋白原和凝血酶；(5)纖維拍照，記錄試驗結果。結果見圖3A1、圖3A2、圖3B1、圖3B2、圖3C1、圖3C2。從中清楚地看出，與對照組相比，交替涂布纖維蛋白原和凝血酶形成的纖維蛋白膜將腫瘤細胞完全阻斷，從而使得細胞全部阻留在測試培養皿(inserts)底膜上而沒有穿透纖維蛋白膜。因此，說明纖維蛋白膜是可以完全阻斷游離腫瘤細胞的侵襲擴散的。通過體外實驗來模擬由纖維蛋白原和凝血酶交替涂布在腫瘤組織或“病灶”表面形成纖維蛋白膜，阻斷在腫瘤病人手術過程中由于機械創傷或切口所造成的游離腫瘤細胞的擴散，從而達到降低和減少腫瘤病人術后“病灶”復發和轉移的風險，提高病人的存活時間和幾率。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒，其特征在于，包括濃度為５０－１００毫克／毫升的纖維蛋白原、濃度為１００－１０００國際單位／毫升的凝血酶和濃度為２０－６０毫摩爾／升的氯化鈣。

【技術特征摘要】
1.一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒，其特征在于，包括濃度為50-100毫克/毫升的纖維蛋白原、濃度為100-1000國際單位/毫升的凝血酶和濃度為20-60毫摩爾/升的氯化鈣。2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的纖維蛋白原濃度為60-80毫克/毫升，凝血酶濃度為300-800國際單位/毫升，氯化鈣濃度為30-50毫摩爾/升。3.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的纖維蛋白原濃度為70毫克/毫升，凝血酶濃度為400-600國際單位/...

【專利技術屬性】
技術研發人員：黃凱，張軍，何秋，許必雄，趙霞，李軍輝，
申請(專利權)人：上海萊士血制品有限公司，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]