【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于金花茶組織培養(yǎng)育苗，尤其涉及金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法。
技術(shù)介紹
1、金花茶(camellia?nitidissima?chi)系山茶科(theaceae)山茶屬(camellia)金花茶組植物，常綠灌木至小喬木，其花為金黃色，耀眼奪目，被稱為花卉中“超級明星”、“茶族皇后”及植物界的“大熊貓”，根據(jù)《世界自然保護(hù)聯(lián)盟瀕危物種紅色名錄》(iucn)，金花茶被列為極危物種(cr)，為國家一級保護(hù)植物，是世界珍貴且稀有的觀賞植物和種質(zhì)資源。金花茶集觀賞價(jià)值、營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值為一體，金花茶不僅花朵色澤鮮艷，具有極高的觀賞價(jià)值，其花、葉、果均可入藥及保健飲料，具有降低膽固醇，降血壓，抑制腫瘤，抑菌，抗衰老等功效，具有重要的藥用營養(yǎng)價(jià)值，市場開發(fā)利用前景廣闊，受到了廣泛關(guān)注。
2、隨著金花茶價(jià)值不斷被開發(fā)利用，金花茶人工種植面積在逐年擴(kuò)大，對金花茶苗木的需求量迅速增加，傳統(tǒng)的育苗方法已無法滿足市場需求，金花茶的繁育技術(shù)包括種子繁育、扦插繁育、嫁接繁育、組培快繁和雜交育種等。但由于存在種子繁育結(jié)實(shí)率、發(fā)芽率和出苗率低；扦插和嫁接容易攜帶母株自身病毒，成活率和生根率低，且受采穗母樹穗條產(chǎn)量影響，擴(kuò)繁較為緩慢；雜交繁育成活率低等技術(shù)難題，金花茶依然面臨著種苗供需問題。組培快繁具有一致性好，條件可控等優(yōu)點(diǎn)，是種苗規(guī)模化生產(chǎn)的有效途徑，是緩解金花茶種苗供給不足問題的關(guān)鍵。近年來，組培快繁在金花茶上的應(yīng)用越來越多。但目前金花茶組織培養(yǎng)仍然存在各種問題，包括外植體滅菌不徹底，污染率高，初代誘導(dǎo)成功率低，組培
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)要解決的技術(shù)問題是提供一種外植體來源豐富、易獲取且誘導(dǎo)率高的金花茶外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法。為解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)的技術(shù)方案是：利用營養(yǎng)液促進(jìn)瀕危植物金花茶的種子苗多次抽稍的莖段作為外植體來源，經(jīng)過滅菌處理后獲得外植體，然后為其配制專屬的初代誘導(dǎo)出芽培養(yǎng)基和初始芽馴化培養(yǎng)基，通過控制光照培養(yǎng)，從而提高其誘導(dǎo)率，形成一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法。
2、本專利技術(shù)是這樣實(shí)現(xiàn)的：
3、一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，主要操作步驟如下：
4、(1)外植體獲取：選取瀕危植物金花茶當(dāng)年采集成熟健康種子沙藏萌發(fā)后，裝于基質(zhì)杯中，進(jìn)行常規(guī)育苗管理，待種子苗高≥6cm，剪取上部莖段作為外植體，保留下部莖段≥3.5cm，剪掉上部莖段之后噴施營養(yǎng)液，繼續(xù)進(jìn)行常規(guī)育苗管理，待萌芽再次長至高≥6cm，可再次剪取上部莖段循環(huán)操作；
5、(2)外植體滅菌：將剪取的上部莖段，剪除葉片后修剪為1.5～3cm長短的莖段，用清潔劑刷洗干凈，然后放入75％酒精溶液中浸泡0.5～1min，無菌水清洗3～5次，在超凈工作臺上，選擇帶有藍(lán)光功能的超聲波清洗杯加入滅菌劑，將外植體放入其中超聲清洗5～10min，重復(fù)一次，無菌水?dāng)嚢枨逑?次，滅菌濾紙吸干水分，莖段兩端分別剪掉0.2～0.5cm；
6、(3)培養(yǎng)基配制：初代誘導(dǎo)培養(yǎng)選用兩種培養(yǎng)基，初代誘導(dǎo)出芽培養(yǎng)基配方為：改良ms+2-ip?1.0～2.0mg/l+naa?1.6～1.8mg/l+iba?0.5～1.5mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂4.5g/l；初始芽馴化培養(yǎng)基配方為：改良wpm+2-ip?0.5～1.0mg/l+naa?0.5～0.8mg/l+ga30.1～0.2mg/l+蔗糖30g/l+瓊脂4.5g/l；按照配方配好培養(yǎng)基后，持續(xù)煮沸5min，調(diào)節(jié)ph值至5.8～6.0，分裝到培養(yǎng)容器中；
7、(4)初代誘導(dǎo)培養(yǎng)：將滅菌后的外植體垂直插入初代誘導(dǎo)出芽培養(yǎng)基中，待初始芽長至≥2cm時(shí)，剪下初始芽，插入初始芽馴化培養(yǎng)基中，將原外植體再次插回初代誘導(dǎo)出芽培養(yǎng)基中，培養(yǎng)室溫度控制在25±3℃左右，弱光培養(yǎng)7～10d后，改為正常光培養(yǎng)。
8、優(yōu)選地，步驟(1)所述基質(zhì)杯規(guī)格為直徑11cm×高15cm，基質(zhì)為紅心土:細(xì)沙:泥炭土體積比為8:1:1。
9、優(yōu)選地，步驟(1)所述常規(guī)育苗管理為將幼苗置于帶遮陰網(wǎng)、可通風(fēng)的室外育苗大棚內(nèi)，根據(jù)氣候，氣溫太低時(shí)在幼苗上方搭建小拱棚覆蓋塑料薄膜保溫，每2～3天噴淋水1～2次水，每月施n:p:k＝15:10:20的復(fù)合肥1次。
10、優(yōu)選地，步驟(1)所述營養(yǎng)液為0.5～1.0mg/ml?naa+0.3～0.6mg/ml?ggr+50～80mg/lkh2po3+500～800mg/l?nh4no3。
11、優(yōu)選地，步驟(2)所述滅菌劑由0.05％茶樹精油+0.1％hgcl2溶液+0.01％吐溫-20組成。
12、優(yōu)選地，步驟(3)所述的改良wpm和改良ms培養(yǎng)基組成為：
13、
14、優(yōu)選地，步驟(3)所述培養(yǎng)容器為高度11cm，直徑7.6cm，口徑5.3cm的350ml玻璃瓶，每瓶加入50～80ml培養(yǎng)基，121℃高壓滅菌20min。
15、優(yōu)選地，步驟(4)所述弱光培養(yǎng)是在自然光照不開燈條件下用2層報(bào)紙覆蓋在培養(yǎng)容器上方，正常光培養(yǎng)是保持光照強(qiáng)度為2000～3000lx，每天光照12～14h的光培養(yǎng)。
16、優(yōu)選地，步驟(4)所述剪下初始芽的操作方式為保留芽基部0.2～0.5cm留存于外植體上。
17、本專利技術(shù)與現(xiàn)有技術(shù)相比的有益效果是：
18、(1)本專利技術(shù)在外植體獲取和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)均利用金花茶莖段可多次抽稍的原理。外植體獲取時(shí)選用的是將種子沙藏萌發(fā)后培育的幼苗，剪取上部莖段后保留部分芽基部，優(yōu)化了剪除莖段后保留莖段的高度，并為其配制特定的營養(yǎng)液，促進(jìn)莖段多次抽稍，循環(huán)往復(fù)，利用周期可長達(dá)1年時(shí)間，可獲得豐富的外植體材料，顯著提高了種子利用率，且獲得的外植體材料活力強(qiáng)，幼太化程度高，容易誘導(dǎo)出芽；初代誘導(dǎo)出芽后剪除初始芽后保留部分芽體在外植體上，將原外植體再次插入篩選配制的特定的初代誘導(dǎo)出芽培養(yǎng)基中，可再次萌發(fā)出芽，顯著提高了誘導(dǎo)率，誘導(dǎo)率可達(dá)96.5％，可在短期內(nèi)獲得大量培養(yǎng)材料，為進(jìn)一步組培繁育應(yīng)用研究奠定材料基礎(chǔ)。
19、(2)現(xiàn)有技術(shù)中多利用成熟莖段和種子作為外植體來源，直接利用成熟莖段作為外植體材料，由于木質(zhì)化程度較高，誘導(dǎo)率顯著本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：包括外植體獲取、外植體滅菌、培養(yǎng)基配制和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)，主要操作步驟如下：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟(1)所述基質(zhì)杯規(guī)格為直徑11cm×高15cm，基質(zhì)為紅心土:細(xì)沙:泥炭土體積比為8:1:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟(1)所述常規(guī)育苗管理為將幼苗置于帶遮陰網(wǎng)、可通風(fēng)的室外育苗大棚內(nèi)，根據(jù)氣候，氣溫太低時(shí)在幼苗上方搭建小拱棚覆蓋塑料薄膜保溫，每2～3天噴淋水1～2次水，每月施N:P:K＝15:10:20的復(fù)合肥1次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟(1)所述營養(yǎng)液為0.5～1.0mg/mL?NAA+0.3～0.6mg/mL?GGR+50～80mg/L?KH2PO3+500～800mg/L?NH4NO3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟(3)所述的改良WPM和改良MS培養(yǎng)基組成為：
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟(3)所述培養(yǎng)容器為高度11cm，直徑7.6cm，口徑5.3cm的350mL玻璃瓶，每瓶加入50～80mL培養(yǎng)基，121℃高壓滅菌20min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟(4)所述弱光培養(yǎng)是在自然光照不開燈條件下用2層報(bào)紙覆蓋在培養(yǎng)容器上方，正常光培養(yǎng)是保持光照強(qiáng)度為2000～3000LX，每天光照12～14h的光培養(yǎng)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟(4)所述剪下初始芽的操作方式為保留芽基部0.2～0.5cm留存于外植體上。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：包括外植體獲取、外植體滅菌、培養(yǎng)基配制和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)，主要操作步驟如下：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟(1)所述基質(zhì)杯規(guī)格為直徑11cm×高15cm，基質(zhì)為紅心土:細(xì)沙:泥炭土體積比為8:1:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟(1)所述常規(guī)育苗管理為將幼苗置于帶遮陰網(wǎng)、可通風(fēng)的室外育苗大棚內(nèi)，根據(jù)氣候，氣溫太低時(shí)在幼苗上方搭建小拱棚覆蓋塑料薄膜保溫，每2～3天噴淋水1～2次水，每月施n:p:k＝15:10:20的復(fù)合肥1次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率外植體制備和初代誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟(1)所述營養(yǎng)液為0.5～1.0mg/ml?naa+0.3～0.6mg/ml?ggr+50～80mg/l?kh2po3+500～800mg/l?nh4no3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀕危植物金花茶高誘導(dǎo)率...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：肖玉菲，韋曉娟，劉海龍，鐘連香，覃玉鳳，黃翠麗，魏秋蘭，林東，覃子海，楊德任，楊卓穎，張燁，張曉寧，
申請(專利權(quán))人：廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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