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    檢測副傷寒沙門氏菌并分型的組合物制造技術
    
                            
    技術編號：44319338 閱讀：6 留言：0更新日期：2025-02-18 20:30
    
                        
    
                        
    
                            
                            本發明專利技術屬于分子生物學檢測領域，具體地，涉及副傷寒沙門氏菌的檢測，更具體地，涉及甲、乙、丙型副傷寒沙門氏菌的檢測。本發明專利技術提供的組合物僅需檢測一個靶點即能夠特異性的檢出副傷寒沙門氏菌，操作簡單，并不會存在非特異性擴增，特別地，能夠準確區分副傷寒沙門氏菌與一些遺傳相近菌屬。并且靈敏度達到500拷貝/mL，檢測更為準確，能夠提供較為充分的快速檢測以及排除不同病原體感染的依據，縮短副傷寒沙門氏菌的檢測時間，加快實施應對措施。
    
                            
                            
    


    
                            

                            
    【技術實現步驟摘要】
    
                                
    本專利技術屬于分子生物學檢測領域，具體地，涉及副傷寒沙門氏菌的檢測，更具體地，涉及甲、乙、丙型副傷寒沙門氏菌的檢測。

    技術介紹
    1、腸道沙門氏菌血清型傷寒和副傷寒是人類限制性革蘭氏陰性細菌病原體，可引起嚴重的血液感染，統稱為腸熱。主要通過污染的水源和食物而爆發流行，不良的衛生條件和生活習慣是疾病發生的主要原因，但是隨著人員交際的增加，全球腸熱癥病發率逐漸成為大部分國家突出的衛生問題。副傷寒(paratyphoid?fever)包括甲型副傷寒、乙型副傷寒和丙型副傷寒，其病原副傷寒甲、副傷寒乙和副傷寒丙分別屬沙門菌a、b、c組，生化特性類似傷寒桿菌，而菌體抗原和鞭毛抗原的成分不同。雖然副傷寒與傷寒的發病機制、流行特征大體相似，但從近年副傷寒的廣泛流行來看，臨床表現以不典型性和多樣性多見，導致該病不易早期發現、及時控制，從而容易造成疫情的擴散與流行。因此，做到早發現、早報告、早隔離、早治療是控制疫情的關鍵。
    2、而副傷寒沙門菌鑒定主要根據生化試驗和血清型分型，需要5～7天才能出檢測結果。然而，目前公開的以pcr方法工具在常規監測血清型paratyphi方面的應用有限，一些方法采用多個靶標進行聯合判斷來區分，一些方法采用單靶標檢測但存在檢測靈敏度較低或特異性不足。另外，一些研究基于全基因組測序(wgs)的基因分型(如sistr2、seqsero2、genotyphi、paratype)，探索在沙門氏菌引起的腸道熱監測應用。然而，由于成本和專業儀器及生物信息資源的需求，wgs在日常分型中的常規使用很大局限且需更深的研究驗證。隨著分子生物技術的發展，不斷有嘗試用inva、prt、flic、tyv，鞭毛抗原hd、vi抗原基因、sty1633和spa4829為目標基因，用普通pcr和熒光pcr檢測副傷寒沙門菌的報道，但是上述靶基因并不是副傷寒沙門菌的特異基因，有的需要2～3種基因的擴增組合來鑒定，操作繁瑣復雜；有的存在非特異或覆蓋度較低的情況。例如，專利cn102102124a和許已發表文章(doi:10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2017.02.024)，其中檢測甲型副傷寒沙門菌的特異擴增引物探針除匹配目標物種外，與fdaargos_688(nz_cp046280.1)、enterica?serovarbispebjerg(nz_cp115551.1)等其它型別完全匹配。專利cn102634577a、cn102102124a均無法區分目標物與salmonella?enterica?subsp.enterica?serovar?bareilly。已公開乙型副傷寒沙門氏菌相關專利cn102102124a與許已發表文章選取的相鄰擴增區段，除目標物種外存在非特異性擴增typhimurium、johannesburg、minnesota等同分類水平下的多個型別的情況。許已發表文章選中用于檢測丙型副傷寒沙門氏菌的引物探針存在choleraesuis非特異擴增。馬的研究文章(1672-3619(2013)07-0820-04)對副傷寒沙門氏菌需采用多個靶標綜合鑒定，操作復雜。
    3、因此，本領域需要一種產品，其僅需檢測一個靶點，操作簡單，并且能夠特異性的檢出副傷寒沙門氏菌。

    技術實現思路
    1、有鑒于此，第一方面，本專利技術提供一種檢測副傷寒沙門氏菌并分型的組合物，包括下列任意核酸組合物中的至少一個：
    2、第一核酸組合物，包括：
    3、1)靶向如seq?id?no.1所示核苷酸序列的上游引物，靶向如seq?id?no.2所示核苷酸序列的下游引物，以及跨seq?id?no.1和seq?id?no.2連接區設置的探針；或者，
    4、2)靶向跨seq?id?no.1和seq?id?no.2連接區的上游引物或下游引物；
    5、第二核酸組合物，包括：
    6、1)靶向如seq?id?no.3所示核苷酸序列的上游引物，靶向如seq?id?no.4所示核苷酸序列的下游引物，以及跨seq?id?no.3和seq?id?no.4連接區設置的探針；或者，
    7、2)靶向跨seq?id?no.3和seq?id?no.4連接區的上游引物或下游引物；或者
    8、第三核酸組合物，包括：
    9、1)靶向如seq?id?no.5所示核苷酸序列的上游引物，靶向如seq?id?no.6所示核苷酸序列的下游引物，以及跨seq?id?no.5和seq?id?no.6連接區設置的探針；或者，
    10、2)靶向跨seq?id?no.5和seq?id?no.6連接區的上游引物或下游引物。
    11、進一步地，本專利技術所述組合物包括上述任意核酸組合物中的至少兩個。
    12、進一步地，本專利技術所述組合物包括：
    13、第一核酸組合物，包括：
    14、1)靶向如seq?id?no.1所示核苷酸序列的上游引物，靶向如seq?id?no.2所示核苷酸序列的下游引物，以及跨seq?id?no.1和seq?id?no.2連接區設置的探針；或者，
    15、2)靶向跨seq?id?no.1和seq?id?no.2連接區的上游引物或下游引物；
    16、第二核酸組合物，包括：
    17、1)靶向如seq?id?no.3所示核苷酸序列的上游引物，靶向如seq?id?no.4所示核苷酸序列的下游引物，以及跨seq?id?no.3和seq?id?no.4連接區設置的探針；或者，
    18、2)靶向跨seq?id?no.3和seq?id?no.4連接區的上游引物或下游引物；以及
    19、第三核酸組合物，包括：
    20、1)靶向如seq?id?no.5所示核苷酸序列的上游引物，靶向如seq?id?no.6所示核苷酸序列的下游引物，以及跨seq?id?no.5和seq?id?no.6連接區設置的探針；或者，
    21、2)靶向跨seq?id?no.5和seq?id?no.6連接區的上游引物或下游引物。
    22、跨seq?id?no.1和2，seq?id?no.3和4，或者seq?id?no.5和6連接區設置的探針是指該探針靶向的序列為同時包括seq?id?no.1和2所示序列的一部分的連續序列，同時包括seq?id?no.3和4所示序列的一部分的連續序列，或者同時包括seq?id?no.5和6所示序列的一部分的連續序列。
    23、靶向跨seq?id?no.1和2，seq?id?no.3和4，或者seq?id?no.5和6連接區的上游引物或下游引物是指該上游引物或下游引物靶向的序列同時包括seq?id?no.1和2所示序列的一部分的連續序列，同時包括seq?id?no.3和4所示序列的一部分的連續序列，或者同時包括seq?id?no.5和6所示序列的一部分的連續序列。
    24、更進一步地，所述第一核酸組合物中的上游引物包括如seq?id?no.7～9所示的核苷酸本文檔來自技高網...
                            
    
                            
    【技術保護點】
    
                                
    1.一種檢測副傷寒沙門氏菌并分型的組合物，包括下列任意核酸組合物中的至少一個：
    2.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述第一核酸組合物中的上游引物包括如SEQ?ID?NO.7～9所示的核苷酸序列中的至少一個；
    3.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述第二核酸組合物中的上游引物包括如SEQ?ID?NO.13～15所示的核苷酸序列的至少一個；
    4.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述第三核酸組合物中的上游引物包括如SEQ?ID?NO.19～21所示的核苷酸序列的至少一個；
    5.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括上述任意核酸組合物中的至少兩個或三個。
    6.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括：
    7.根據權利要求1～6中任一項所述的組合物在制備檢測副傷寒沙門氏菌并分型的試劑盒中的用途，其中，所述副傷寒沙門氏菌包括甲、乙、丙型副傷寒沙門氏菌中的一種或多種。
    8.一種檢測副傷寒沙門氏菌并分型的試劑盒，所述試劑盒包括如權利要求1～6中任一項所述的組合物。
    9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：核酸釋放試劑、核酸提取試劑、DNA聚合酶、UNG酶、dNTP、dUTP、UNG酶、PCR緩沖液，或Mg2+中的至少一種。
    10.一種組合物用于制備檢測副傷寒沙門氏菌并分型的試劑的用途，所述檢測包括以下步驟：
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    【技術特征摘要】
    
                                
    1.一種檢測副傷寒沙門氏菌并分型的組合物，包括下列任意核酸組合物中的至少一個：
    2.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述第一核酸組合物中的上游引物包括如seq?id?no.7～9所示的核苷酸序列中的至少一個；
    3.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述第二核酸組合物中的上游引物包括如seq?id?no.13～15所示的核苷酸序列的至少一個；
    4.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述第三核酸組合物中的上游引物包括如seq?id?no.19～21所示的核苷酸序列的至少一個；
    5.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括上述任意核酸組合物中的至少兩個或三個。
                            
    【專利技術屬性】
    
                                技術研發人員：陳明，王潔，高堂杰，何翔，吳康，戴立忠，
    
        申請(專利權)人：圣湘生物科技股份有限公司，
    
        類型：發明
    
        國別省市：
    
                            
    
                            
                        
    
                    
    
                    
                    
                     
                
    
                
                
    
                    
    
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