【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及到植物組織培養(yǎng)，具體涉及一種能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法。
技術(shù)介紹
1、燕麥(avena?sativa)是全球重要的糧飼兼用作物，其產(chǎn)量在世界禾谷類作物中排名第四，僅次于小麥(triticum?aestivum)、水稻(oryza?sativa)和玉米(zea?mays)，是谷物中最好的全價(jià)營養(yǎng)食品。裸燕麥籽粒中蛋白質(zhì)的氨基酸組成全面均衡，含有人體必需的8種氨基酸。近年來，燕麥的營養(yǎng)價(jià)值、保健價(jià)值、飼用價(jià)值以及環(huán)境保護(hù)價(jià)值正迅速為人們所認(rèn)知。燕麥除了是優(yōu)質(zhì)的糧食作物外，還能作為飼養(yǎng)家畜的飼草，其莖稈柔軟、葉片肥厚，且含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，莖葉中蛋白質(zhì)、脂肪、可消化纖維等含量高于小麥、大麥和玉米等作物，粗纖維含量較少，因此燕麥的適口性好，是奶牛等家畜的優(yōu)質(zhì)青飼料或青貯料；燕麥具有耐寒、耐旱、耐適度鹽堿等優(yōu)點(diǎn)，成為高寒地區(qū)草地的主要栽培品種，其在解決我國高海拔、高緯度地區(qū)飼草料短缺中發(fā)揮著重要作用。同時(shí)燕麥還具有防風(fēng)、抗蝕、保水土的特性，可有效提高土壤養(yǎng)分，提高保肥能力，對生態(tài)恢復(fù)起到一定的積極作用，因此燕麥具有極高的生態(tài)價(jià)值。
2、燕麥新品種的培育是實(shí)現(xiàn)其高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)穩(wěn)產(chǎn)高效的主要技術(shù)手段，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，在農(nóng)作物品種改良中植物基因工程的應(yīng)用越來越開始受到人們的重視。分子標(biāo)記輔助選擇、轉(zhuǎn)基因和基因編輯等分子育種方法實(shí)現(xiàn)的首要問題是組織培養(yǎng)和穩(wěn)定的體外植株再生體系的建立。組織培養(yǎng)是外源基因成功導(dǎo)入的基礎(chǔ)，植株再生是遺傳轉(zhuǎn)化成敗的關(guān)鍵。燕麥組織培養(yǎng)國內(nèi)外都有過報(bào)道,國外開展工作始于20世紀(jì)60年代，而到了2
3、燕麥的遺傳轉(zhuǎn)化能力主要取決于其再生能力，再生能力又強(qiáng)烈依賴于基因型，基因型的不同導(dǎo)致燕麥再生能力參差不齊，這致使燕麥生物學(xué)問題機(jī)制研究嚴(yán)重滯后，影響了燕麥生物技術(shù)育種的發(fā)展。雖然之前亦有通過燕麥組織培養(yǎng)得到再生植株的報(bào)道，但由于不同品種的燕麥對于組培條件的需求差別很大，隨著燕麥新品種的不斷出現(xiàn)，相同培養(yǎng)條件通用性變差。
4、因此專利技術(shù)人通過探究燕麥成熟胚在不同培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)愈傷及植株再生效率，找出較為適合燕麥再生的培養(yǎng)條件，建立高效穩(wěn)定的組織培養(yǎng)再生體系。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)的目的是提供一種能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，該方法能夠有效提高燕麥胚進(jìn)行脫分化、再分化形成新植株的能力，提高愈傷組織分化率。
2、為達(dá)到上述目的，本專利技術(shù)采用的技術(shù)方案如下：
3、本專利技術(shù)的目的之一是提供一種能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，包括如下步驟：
4、步驟1、燕麥種子消毒；
5、步驟2、取胚；
6、步驟3、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)：將取下的成熟胚接種于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在常溫下黑暗培養(yǎng)；
7、所述愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：2,4-d?3mg/l，naa?1mg/l，iaa?1mg/l，蔗糖25g/l，ms粉4.43mg/l，植物凝膠3.5mg/l，水解酪蛋白500mg/l；
8、步驟4、愈傷組織繼代培養(yǎng)：將步驟3長出的愈傷組織轉(zhuǎn)移至繼代培養(yǎng)基上，在常溫、黑暗環(huán)境下繼代培養(yǎng)；
9、步驟5、愈傷組織分化培養(yǎng)：將經(jīng)過繼代培養(yǎng)的愈傷組織接種至分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在常溫下光照培養(yǎng)；
10、步驟6、愈傷組織生根培養(yǎng)：將分化出葉片的愈傷組織移至生根培養(yǎng)基中，在常溫下光照培養(yǎng)；
11、步驟7、煉苗處理：將生根培養(yǎng)基中長勢良好的燕麥再生苗進(jìn)行煉苗處理，獲得燕麥再生植株。
12、進(jìn)一步的，步驟1中所述燕麥種子消毒的具體步驟如下：
13、挑選大小相近，籽粒飽滿的燕麥成熟種子，使用自來水沖洗3-5min；
14、在超凈工作臺中使用75％無水乙醇消毒3min；
15、無菌水沖洗3次；
16、10％次氯酸鈉消毒5min；
17、無菌水沖洗5次，獲得消毒后的燕麥種子。
18、進(jìn)一步的，步驟2中取胚的具體步驟如下：
19、將消毒后的燕麥種子使用無菌水浸泡放置于4℃冰箱24h；
20、種子發(fā)育成熟后，用無菌鑷子將燕麥種子取出平鋪于無菌濾紙上，晾15～20min，使其水分被濾紙吸干；
21、用鑷子剝下燕麥種子的成熟胚。
22、進(jìn)一步的，所述繼代培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：2,4-d?3mg/l，蔗糖25g/l，ms粉4.43g/l，植物凝膠3.5g/l。
23、進(jìn)一步的，所述分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：ms粉4.43g/l，6-ba1.5mg/l，naa?0.5mg/l，iaa?0.5mg/l，植物凝膠3.5g/l。
24、進(jìn)一步的，所述生根培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：ms粉0.221g/l，naa?0.5mg/l，0.1％生根粉溶液，植物凝膠3.5g/l。
25、進(jìn)一步的，步驟3中愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)的時(shí)長為15天。
26、進(jìn)一步的，步驟4中愈傷組織繼代培養(yǎng)包括至少兩次繼代，每隔15天繼代一次。
27、進(jìn)一步的，步驟5與步驟6中光照培養(yǎng)的時(shí)長均為16小時(shí)。
28、本專利技術(shù)的目的之二是提供一種用于燕麥組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基由愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基組成；
29、所述愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：2,4-d?3mg/l，naa?1mg/l，iaa?1mg/l，蔗糖25g/l，ms粉4.43g/l，植物凝膠3.5g/l，水解酪蛋白500mg/l；
30、所述繼代培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：2,4-d?3mg/l，蔗糖25g/l，ms粉4.43g/l，植物凝膠3.5g/l；
31、所述分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：ms粉4.43g/l，6-ba?1.5mg/l，naa0.5mg/l，iaa0.5mg/l，植物凝膠3.5g/l；
32、所述生根培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：ms粉0.221g/l，naa0.5mg/l，0.1％生根粉溶液，植物凝膠3.5g/l。
33、本專利技術(shù)的顯著效果是：本專利技術(shù)通過優(yōu)化愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中各激素的配比，可有效提高燕麥胚進(jìn)行脫分本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于：步驟1中所述燕麥種子消毒的具體步驟如下：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于：步驟2中取胚的具體步驟如下：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于：所述繼代培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：2,4-D?3mg/L，蔗糖25g/L，MS粉4.43g/L，植物凝膠3.5g/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于：所述分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：MS粉4.43g/L，6-BA?1.5mg/L，NAA0.5mg/L，IAA0.5mg/L，植物凝膠3.5g/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于：所述生根培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：MS粉0.221g/L，NAA0.5mg/L，0.1％生根粉溶液，植物凝膠3.5g/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠提高燕麥組
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于：步驟4中愈傷組織繼代培養(yǎng)包括至少兩次繼代，每隔15天繼代一次。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于：步驟5與步驟6中光照培養(yǎng)的時(shí)長均為16小時(shí)。
10.一種用于燕麥組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基由愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基組成；
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于：步驟1中所述燕麥種子消毒的具體步驟如下：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于：步驟2中取胚的具體步驟如下：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于：所述繼代培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：2,4-d?3mg/l，蔗糖25g/l，ms粉4.43g/l，植物凝膠3.5g/l。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠提高燕麥組織培養(yǎng)效率的方法，其特征在于：所述分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含的物質(zhì)及濃度如下：ms粉4.43g/l，6-ba?1.5mg/l，naa0.5mg/l，iaa0.5mg/l，植物凝膠3.5g/l...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張金林，呂昭龍，未麗，李媛紅，
申請(專利權(quán))人：蘭州大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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