【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫學領域，特別是涉及一種蜱傳腦炎病毒的熒光定量檢測試劑盒及應用。
技術介紹
1、蜱傳腦炎(tick-borne?encephalitis，tbe)又稱森林腦炎，是由蜱傳腦炎病毒(tick-borne?encephalitis?virus，tbev)引起的一種以中樞神經系統為主的自然疫源性傳染病，多由蜱蟲叮咬引起，據統計有約1％的患者是因食用了未經高溫滅菌的牛奶或來源于被感染動物的乳制品導致發病。蜱作為其傳播媒介，是一種寄居于多種脊椎動物體表的暫時性寄生蟲，大多分布在森林、草原或獸穴、鳥巢及家畜棚圈處。當蜱吸吮受到感染的灰鼠、野鼠和刺猬等嚙齒動物的血液后，病毒就會在蜱的體內繁殖，當人們被帶有病毒的蜱叮咬后，往往就被感染而患病，重者在數小時內即因昏迷、抽搐、延髓麻痹而死亡。tbev是黃病毒屬中一種毒力極強的嗜神經病毒，主要侵犯人的中樞神經系統，臨床上以突發高熱、腦膜刺激癥、頭痛嘔吐、感覺過敏、意識障礙及頸和肢體癱瘓為主要特征，常有后遺癥。在森林地區工作的勞動者為tbe發病的高危人群，沒有特效的抗病毒藥物，醫生只能根據患者對癥治療，因此，病毒感染的早期快速診斷對病人疾病的治療、康復、預后極其重要。
2、目前，用于蜱傳腦炎診斷的方法主要有病原學診斷、血液/腦脊液檢驗以及免疫學診斷等。病原學診斷以病毒分離為主，是最基礎和最可靠的檢測方法，但是培養要求高，易受外來病原微生物污染，且培養時間長。由于早期血象變化不明顯且難以與其他腦炎進行區分，因此血液/腦脊液檢驗不能用于診斷。免疫學診斷主要有補體結合試驗(cft)
3、相比上述方法，tbe的核酸診斷理論上是最佳的診斷方法，它既可有效地確診蜱傳腦炎患者又可對環境中的感染因素包括蜱蟲、疫奶中是否含有tbev做出判定，因此，亟需提供一種特異性高、靈敏性好的熒光定量檢測試劑盒。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種蜱傳腦炎病毒的熒光定量檢測試劑盒及應用，以解決上述現有技術存在的問題，本專利技術設計得到了用于蜱傳腦炎病毒檢測的引物組，并構建了高靈敏度、高特異性的檢測試劑盒。
2、為實現上述目的，本專利技術提供了如下方案：
3、本專利技術提供了一種用于蜱傳腦炎病毒檢測的引物組，包括核苷酸序列如seq?idno.1所示的上游引物tbev-f和核苷酸序列如seq?id?no.2所示的下游引物tbev-r。
4、本專利技術提供了所述的引物組在制備用于蜱傳腦炎病毒檢測的產品中的應用。
5、優選的是，所述產品包括熒光定量檢測試劑盒。
6、本專利技術還提供了一種蜱傳腦炎病毒的熒光定量檢測試劑盒，包括所述的引物組。
7、優選的是，還包括rna提取試劑、反轉錄酶和sybr?greenⅰ熒光定量pcr反應預混液。
8、更優選的是，所述rna提取試劑包括蛋白酶k和rna載體；所述反轉錄酶為primescript?rt?enzyme?mix。
9、本專利技術還提供了所述的引物組或所述的試劑盒在非疾病診斷和/或治療的目的的蜱傳腦炎病毒檢測中的應用。
10、本專利技術還提供了一種非疾病診斷和/或治療的目的的檢測蜱傳腦炎病毒的方法，包括使用所述的試劑盒進行熒光定量rt-pcr反應的步驟。
11、優選的是，具體包括以下步驟：
12、提取待測樣品的總rna；
13、以所述總rna為模版，進行sybr?greenⅰ熒光定量rt-pcr反應；
14、根據所述sybr?greenⅰ熒光定量rt-pcr反應的結果判斷樣品是否含有蜱傳腦炎病毒。
15、更優選的是，所述sybr?greenⅰ熒光定量rt-pcr反應的反應程序為：42℃反轉錄5min；95℃預變性5min；95℃變性5s，60℃退火30s，40個循環；擴增后進行95℃15s，60℃1min，95℃15s的熔解過程。
16、本專利技術公開了以下技術效果：
17、本專利技術提供了一種用于蜱傳腦炎病毒檢測的引物組和熒光定量檢測試劑盒。本專利技術提供的熒光定量檢測試劑盒使用sybr染料法結合特異性引物組，可以快速、高效地判斷待測樣品中是否含有蜱傳腦炎病毒，具備高特異性和高靈敏度，且重復性穩定，可以用于蜱傳腦炎病毒的檢測和防控，具有廣闊的應用前景。
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1.一種用于蜱傳腦炎病毒檢測的引物組，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的上游引物TBEV-F和核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的下游引物TBEV-R。
2.如權利要求1所述的引物組在制備用于蜱傳腦炎病毒檢測的產品中的應用。
3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述產品包括熒光定量檢測試劑盒。
4.一種蜱傳腦炎病毒的熒光定量檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組。
5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，還包括RNA提取試劑、反轉錄酶和SYBRGreenⅠ熒光定量PCR反應預混液。
6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述RNA提取試劑包括蛋白酶K和RNA載體；所述反轉錄酶為Prime?script?RT?enzyme?Mix。
7.如權利要求1所述的引物組或權利要求4-6任一項所述的試劑盒在非疾病診斷和/或治療的目的的蜱傳腦炎病毒檢測中的應用。
8.一種非疾病診斷和/或治療的目的的檢測蜱傳腦炎病毒的方法，其特征在于，包括使用權利要求4-6任一項所
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：
10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述SYBR?GreenⅠ熒光定量RT-PCR反應的反應程序為：42℃反轉錄5min；95℃預變性5min；95℃變性5s，60℃退火30s，40個循環；擴增后進行95℃15s，60℃1min，95℃15s的熔解過程。
...【技術特征摘要】
1.一種用于蜱傳腦炎病毒檢測的引物組，其特征在于，包括核苷酸序列如seq?id?no.1所示的上游引物tbev-f和核苷酸序列如seq?id?no.2所示的下游引物tbev-r。
2.如權利要求1所述的引物組在制備用于蜱傳腦炎病毒檢測的產品中的應用。
3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述產品包括熒光定量檢測試劑盒。
4.一種蜱傳腦炎病毒的熒光定量檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組。
5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，還包括rna提取試劑、反轉錄酶和sybrgreenⅰ熒光定量pcr反應預混液。
6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述rna提取試劑包括蛋白酶k和rna載體；所述反轉錄酶為p...
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