【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種靈芝與樺褐孔菌共發(fā)酵液萃取物的制備方法及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、“糖化”是在不受酶的控制下，蛋白質(zhì)或脂質(zhì)分子上附加糖類分子的過程。研究發(fā)現(xiàn)，糖化終產(chǎn)物在皮膚的不斷累積使皮膚彈性下降，導(dǎo)致皮膚衰老，而皮膚衰老是身體各項因素綜合的結(jié)果。晚期糖基化終末產(chǎn)物（advanced?glycation?end?products，ages）作為衰老的關(guān)鍵生物標(biāo)志物之一，其在低代謝活性組織蛋白中的積累與年齡增長密切相關(guān)，這種積累會導(dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能受損。有效抑制體內(nèi)糖基化水平，不僅可以改善多種疾病狀態(tài)，還具有延緩生物衰老的潛力。近年來，隨著“抗糖”產(chǎn)品越來越受到市場青睞，ages的研究與開發(fā)已成為熱點，目前研究和應(yīng)用普遍使用的ages抑制劑氨基胍（ag）存在副作用大及適用人群受限等嚴(yán)重問題，亟待開發(fā)安全有效的天然ages抑制劑。
2、樺褐孔菌（ inonotus?obliquus），又稱樺樹茸，屬于多孔菌科纖孔菌屬真菌，已證明具有降糖、降脂、抗腫瘤、抗病毒和抗氧化等多種功效。最新研究表明通過真菌共培養(yǎng)發(fā)酵技術(shù)，可有效提升其多糖、三萜、甾體、多酚和黃酮類等活性成分的含量及其生物利用度。申請人通過開展樺褐孔菌、亮菌、靈芝、桑黃、蟬花蟲草等食藥用真菌兩兩相互共培養(yǎng)發(fā)酵液活性篩選試驗，發(fā)現(xiàn)靈芝與樺褐孔菌共發(fā)酵液萃取物的抗糖基化衰老活性優(yōu)異，目前尚無此萃取物在抗糖化作用的相關(guān)報道。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利
2、本專利技術(shù)靈芝與樺褐孔菌共發(fā)酵液萃取物的制備方法，包括如下步驟：
3、步驟1：樺褐孔菌菌絲體培養(yǎng)
4、1-1菌種活化：樺褐孔菌母種接種于pda固體培養(yǎng)基，28℃靜置培養(yǎng)7-10天。
5、1-2液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)：從活化后的樺褐孔菌固體培養(yǎng)基上切取8-10塊0.5?×?0.5cm2菌塊，接入100?ml樺褐孔菌液態(tài)培養(yǎng)基中，28℃、120?r/min培養(yǎng)6-8天。
6、樺褐孔菌液態(tài)培養(yǎng)基構(gòu)成：馬鈴薯煮液1.0?l，葡萄糖20?g/l，磷酸二氫鉀3?g/l，無水硫酸鎂1.5?g/l，維生素b1?0.03?g/l。馬鈴薯煮液具體制備過程如下：200?g去皮馬鈴薯塊，沸水煮30?min，收集濾液定容至1.0?l。
7、步驟2：靈芝菌絲體培養(yǎng)
8、2-1菌種活化：靈芝母種接種于pda固體培養(yǎng)基，28℃靜置培養(yǎng)7-10天。
9、2-2液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)：從活化后的靈芝固體培養(yǎng)基上切取8-10塊0.5?×?0.5?cm2菌塊，接入100?ml靈芝菌絲體液態(tài)培養(yǎng)基中，28℃、120?r/min培養(yǎng)6-8天。
10、靈芝菌絲體液態(tài)培養(yǎng)基構(gòu)成：葡萄糖30?g/l，酵母粉3?g/l，磷酸二氫鉀1.5?g/l，無水硫酸鎂0.75?g/l，維生素b1?0.03?g/l。
11、步驟3：共發(fā)酵培養(yǎng)
12、將步驟2獲得菌液加到步驟1菌液中，接種量為2-5%（w/w），28-30℃、120?r/min培養(yǎng)14天，收集發(fā)酵液，6000?rpm離心5-10?min，收集上清液，冷凍干燥制得共發(fā)酵液粉末。
13、步驟4：將步驟3制得的共發(fā)酵液粉末按1:10-20（g/?ml）料液比加入95?%乙醇，85℃回流提取60-120?min，過濾收集濾液。
14、步驟5：將步驟4所得濾液濃縮至原體積的1/9-1/10，6000?rpm離心，收集上清液，冷凍干燥，按1:15-20（g/?ml）料液比加入純水超聲溶解后，分級萃取，依次加入2-3倍體積的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇，各萃取時間為10-20?min，乙酸乙酯萃取相濃縮干燥制得乙酸乙酯萃取物（ige-e）。
15、本專利技術(shù)靈芝與樺褐孔菌共培養(yǎng)發(fā)酵液萃取物在抗糖基化制劑制備中的應(yīng)用。
16、所述抗糖基化制劑具有優(yōu)異的抗糖基化衰老功效，能夠有效抑制蛋白質(zhì)糖基化，顯著降低晚期糖基化終末產(chǎn)物（ages）誘導(dǎo)的衰老hff細(xì)胞sa-β-gal染色陽性細(xì)胞率。
17、本專利技術(shù)的有益效果體現(xiàn)在：
18、1、提供了一種靈芝與樺褐孔菌共培養(yǎng)發(fā)酵液萃取物的制備方法，具有操作簡便、成本低廉、高效能等特點。
19、2、本專利技術(shù)靈芝與樺褐孔菌共發(fā)酵液萃取物用于制備抗糖基化制劑，所述制劑抗糖基化衰老功效突出，能夠顯著抑制蛋白質(zhì)糖基化，延緩ages誘導(dǎo)的hff細(xì)胞衰老。
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1.一種靈芝與樺褐孔菌共發(fā)酵液萃取物的制備方法，其特征在于包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：
8.權(quán)利要求1-7中任一項制備方法制得的靈芝與樺褐孔菌共發(fā)酵液萃取物在抗糖基化制劑制備中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于：
【技術(shù)特征摘要】
1.一種靈芝與樺褐孔菌共發(fā)酵液萃取物的制備方法，其特征在于包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳彥，吳江婷，宣開莉，陳浩，劉美春，陸永明，張文娜，潘文娟，
申請(專利權(quán))人：安徽大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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