本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種適同時用于毒死蜱和甲基對硫磷殘留分析的酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，它包括盒體、設(shè)在盒體內(nèi)的酶標(biāo)板／試管及設(shè)在盒體內(nèi)的試劑。在酶標(biāo)板的每孔內(nèi)，由包被液包被能與抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體特異性合反應(yīng)的通用包被抗原，并用明膠進(jìn)行封閉，盒內(nèi)試劑包含洗滌液、底物稀釋液、毒死蜱和甲基對硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液、抗毒死蜱和甲基對硫磷抗體、酶標(biāo)抗毒死蜱和甲基對硫磷抗體、底物、顯色物質(zhì)和反應(yīng)終止液。本發(fā)明專利技術(shù)能用于水、土壤、蔬菜等食品中及中毒樣品中毒死蜱和甲基對硫磷殘留的同時快速檢測，樣品的前處理過程簡單，能同時檢測批量的樣品，樣品檢測成本低于傳統(tǒng)的檢測方法。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種同時適用于針對殘留毒死蜱和甲基對硫磷進(jìn)行分析的酶聯(lián) 免疫吸附測定試劑盒，該試劑盒主要適用于快速測定批量的水樣、土壤等環(huán)境 樣品和中毒樣品及蔬菜等食品樣品中的毒死蜱和甲基對硫磷殘留。屬于殘留農(nóng) 藥檢測領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
農(nóng)藥及其代謝物傳統(tǒng)的殘留分析方法主要是依靠氣相色譜(GC)、高效液相 色譜(HPLC)、質(zhì)譜(MS)等物理化學(xué)分析手段，但由于農(nóng)藥使用規(guī)模不斷擴(kuò)大， 農(nóng)藥殘留造成環(huán)境影響和人類健康的慢性和長期效應(yīng)日益受到人們關(guān)注和擔(dān) 憂，對農(nóng)藥殘留的限制也越來越嚴(yán)格，對分析測定對象、種類、數(shù)量、范圍、 指標(biāo)等諸方面都提出了新的要求和更高的標(biāo)準(zhǔn)，但傳統(tǒng)的理化分析方法通常繁 瑣復(fù)雜，工作量大，儀器昂貴，并要有熟練的技術(shù)人員及較長的分析周期。因 此人們迫切希望有一種簡單、快速、靈敏及廉價的檢測技術(shù)能在野外和實(shí)驗(yàn)室 內(nèi)進(jìn)行大批量的檢測應(yīng)用。免疫分析法正具備這些優(yōu)點(diǎn)，所以盡管將免疫分析 用于農(nóng)藥殘留分析的時間很短，仍然很快用于環(huán)境樣品和食品樣品中農(nóng)藥殘留 的分析。毒死蜱(Chlorpyrifos)，自1965年由美國Dow公司開發(fā)推廣后即作為 一種廣 譜性高效殺蟲劑，在世界范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用于糧食、棉花等經(jīng)濟(jì)作物的多種害蟲 防治，并且對地下害蟲、家畜害蟲以及衛(wèi)生害蟲也有很好的防治效果。但是由 于毒死蜱對人畜的毒性相當(dāng)高，近年來，因毒死蜱中毒的報(bào)道，仍然屢見不鮮。 尤其是在作物和蔬菜上的大量使用，對人體健康造成極大的危害，這已引起人 們的關(guān)注。甲基對硫磷(Parathion-methyl)由1944年德國希拉臺爾(G.Schrader) 化學(xué)家首先合成，1949年拜爾公司首先建廠生產(chǎn)，嗣后世界各地大量有多家公 司相繼投產(chǎn)，上世紀(jì)60年代之后我國產(chǎn)、用量都很大。甲基對硫磷作為一種廣 譜性高效殺蟲劑，在世界范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用于糧食、棉花等經(jīng)濟(jì)作物的害蟲防治。 但是由于甲基對硫磷對人畜劇毒，因甲基對硫磷中毒的報(bào)道，屢見不鮮，目前 我國雖然已經(jīng)禁止生產(chǎn)和使用甲基對硫磷。開發(fā)一種簡單快速同時適用于毒死 蜱和甲基對硫磷農(nóng)藥殘留現(xiàn)場監(jiān)控的痕量分析方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。檢測毒死蜱和甲基對硫磷殘留量常規(guī)方法為高效液相色譜法等。然而該方 法的靈敏度受樣品的凈化、濃縮等步驟的影響很大，且該方法需要昂貴的儀器, 且過程繁瑣，不適合大批量樣品的檢測與分析。免疫分析為毒死蜱和甲基對硫 磷的殘留檢測提供了一個新的分析檢測途徑。要將免疫分析方法運(yùn)用到實(shí)際中，則需要將其制備成試劑盒。現(xiàn)有技術(shù)公開了多種試劑盒，其中包括了檢測甲基 對硫磷、毒死蜱等殘留物的試劑盒及其制備方法。而現(xiàn)有技術(shù)中沒有關(guān)于方便 同時檢測毒死蜱和甲基對硫磷的技術(shù)。本專利技術(shù)正是針對這一空白，經(jīng)過專利技術(shù)人長時間的實(shí)驗(yàn)和測試，得到了一種 適用于同時針對毒死蜱和甲基對硫磷殘留分析的酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
要解決的問題本專利技術(shù)的目的是提供一種同時檢測毒死蜱和甲基對硫磷殘留的酶聯(lián)免疫吸 附測定試劑盒。本專利技術(shù)的另一目的是提供一種具有高特異性、高靈敏度，操作方法簡單快 速，并能用于大批量樣品同時快速檢測殘留毒死蜱和甲基對硫磷的試劑盒。技術(shù)方案本專利技術(shù)涉及一種同時用于毒死蜱和甲基對硫磷殘留分析的酶聯(lián)免疫吸附測 定試劑盒，它基于免疫反應(yīng)和酶促反應(yīng)，包括盒體、設(shè)在盒體內(nèi)的酶標(biāo)板和/或 試管和設(shè)在盒體內(nèi)的試劑，其特征在于，在酶標(biāo)板的每個孔內(nèi)含有抗毒死蜱和 甲基對硫磷通用包被抗原，盒內(nèi)試劑包含抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體、毒 死蜱和甲基對硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液、酶標(biāo)記抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體。盒內(nèi)試劑還包含洗滌液、底物稀釋液、底物溶液和反應(yīng)終止液。在具體的實(shí)施方案中，本專利技術(shù)試劑盒包括盒體、設(shè)在盒體內(nèi)的96孔/40孔 酶標(biāo)板/試管和設(shè)在盒體內(nèi)的試劑。在所述酶標(biāo)板的每個孔內(nèi)，吸附著由包被液 包被能與抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體特異性結(jié)合反應(yīng)的通用包被抗原，并 用5%明膠進(jìn)行封閉，盒內(nèi)試劑包含洗滌液(稀釋液)、底物稀釋液、抗毒死蜱和 甲基對硫磷共同抗體(間接ELISA)、毒死蜱和甲基對硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液、酶標(biāo)毒死蜱 和甲基對硫磷共同抗體例如辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔共同抗體(適用于間接竟 爭ELISA法)或辣根過氧化物酶標(biāo)記抗毒死蜱和甲基對硫磷兔共同抗體(適用于 直接竟?fàn)嶦LISA法)、底物溶液和反應(yīng)終止液。其中固相通用包被抗原的制備及盒體內(nèi)試劑組成如下將通用包被抗原用pH9.6， 0.05mol/L的碳酸鹽緩沖溶液(含1 2g碳酸鈉和 2 ~ 4g碳酸氫鈉，雙蒸水1L,即包被液)稀釋成0.5 ~ 4ug/mL,點(diǎn)于％孔MO孔 酶標(biāo)板上，100ug/孔，并用5%明膠封閉；其中通用包被抗原為例如N-(oc-萘乙 酰基)-6-氨基己酸與卵清蛋白的復(fù)合物；洗滌液(稀釋液)一瓶，40-80mL/瓶，組成比例為磷酸二氫鉀0.1-0.3g、磷酸 氬二鈉2-4g、氯化鉀0.1-0.3g、吐溫-200.5-3mL、雙蒸水500ml-1000ml，為正常使用的15-30倍濃縮液；底物稀釋液一瓶，30-50mL/瓶，配制如下檸檬酸3-6g,磷酸氫二鈉l-3g， 雙蒸水，為正常使用的5-10倍濃縮液；酶底物為30%過氧化氫，10-15mL/瓶和鄰苯二胺固體粉末4-6支，10-20mg/支；抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體(IgG)4瓶，100ml/瓶，工作濃度為1: 500-1000(間接ELISA法)；所述的抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體(IgG)為通過 毒死蜱和甲基對硫磷和牛血清白蛋白合成的偶聯(lián)物作為免疫源注射家兔后產(chǎn)生 的能與毒死蜱和甲基對硫磷分子、毒死蜱和甲基對硫磷包被原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(IgG);辣根過氧化物酶標(biāo)記抗毒死蜱和甲基對硫磷兔共同抗體(直接ELISA法)或 者辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔共同抗體(間接ELISA法)一瓶，200-400uL/瓶，為 正常使用時800-1500倍濃縮液；上述辣根過氧化物酶標(biāo)抗毒死蜱和甲基對硫磷 共同抗體為毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體(IgG)與辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合形 成的復(fù)合物；反應(yīng)終止液一瓶，30-50ml/瓶，為2mol/L硫酸；毒死蜱和甲基對硫磷不同濃度系列(O.l、 0.5、 2、 10、 50、 100mg/L)標(biāo)準(zhǔn)液 6瓶，l-4mL/瓶，甲醇定容，使用時用PBST稀釋IO倍。本專利技術(shù)的同時適用于毒死蜱和甲基對硫磷殘留分析的酶聯(lián)免疫吸附測定試 劑盒，能夠同時檢測水樣、土壤、中毒樣品、蔬菜等食品中毒死蜱和甲基對硫 磷的殘留。試劑盒測定原理首先將農(nóng)藥分子與大分子載體(如蛋白質(zhì))偶聯(lián)制得的 復(fù)合物作為通用包被抗原吸附于固相載體上，然后加入待測農(nóng)藥和抗毒死蜱和 甲基對硫磷共同抗體(間接ELISA法)或酶標(biāo)抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體(直 接ELISA法)。通用包被抗原、待測農(nóng)藥與抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體(或 酶標(biāo)抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體)進(jìn)行竟?fàn)幏磻?yīng)，待測農(nóng)藥含量多，則被結(jié) 合在通用包被抗原上的共同抗體少，最終酶促反應(yīng)顯色淺，反之結(jié)合在通用包 被抗原的共同抗體(或酶標(biāo)共同抗體)多，最終酶促反應(yīng)顯色深。上述通用包被抗 原、待測農(nóng)藥、抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體或酶標(biāo)抗毒死蜱和甲基對硫磷 共同抗體竟?fàn)幗Y(jié)合反應(yīng)后，再加入底物溶液出現(xiàn)顯色反應(yīng)加以測定(間接ELISA本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種同時使用于毒死蜱和甲基對硫磷殘留分析的酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，它包括盒體、設(shè)在盒體內(nèi)的酶標(biāo)板和／或試管和設(shè)在盒體內(nèi)的試劑，其特征在于，在酶標(biāo)板的每孔內(nèi)含有抗毒死蜱和甲基對硫磷通用包被抗原，盒內(nèi)試劑包含抗毒死蜱和甲基對硫磷抗體、毒死蜱和甲基對硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液、酶標(biāo)記抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體。
【技術(shù)特征摘要】
1. 一種同時使用于毒死蜱和甲基對硫磷殘留分析的酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，它包括盒體、設(shè)在盒體內(nèi)的酶標(biāo)板和/或試管和設(shè)在盒體內(nèi)的試劑，其特征在于，在酶標(biāo)板的每孔內(nèi)含有抗毒死蜱和甲基對硫磷通用包被抗原，盒內(nèi)試劑包含抗毒死蜱和甲基對硫磷抗體、毒死蜱和甲基對硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液、酶標(biāo)記抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗體。2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的試劑盒，其中，所述抗毒死蜱和甲基對硫磷共同抗 體為通過毒死蜱和甲基對硫磷和牛血清白蛋白合成的偶聯(lián)物作為免疫源...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：孫家隆，
申請(專利權(quán))人：孫家隆，
類型：發(fā)明
國別省市：95[中國|青島]
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