【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本申請屬于分子生物學(xué)及作物育種，具體涉及小麥條銹病抗性位點及其開發(fā)的kasp標(biāo)記。
技術(shù)介紹
1、小麥條銹病是由條形柄銹菌小麥轉(zhuǎn)化型(puccinia?striiformiswest.f.sp.tritici，簡稱pst)引起的氣傳性真菌病害，主要侵染小麥葉片，同時也可侵染小麥葉鞘、穗部、莖稈、穎殼及麥芒等幾乎所有地上營養(yǎng)器官。控制小麥條銹病一直是一項艱巨的任務(wù)。化學(xué)防治可以減輕條銹病損失，但成本高昂，長期使用可對環(huán)境造成污染。因此，培育抗小麥條銹病品種被認(rèn)為是最位經(jīng)濟(jì)、安全、有效的策略。
2、近年來，已有89個已報道的條銹病抗性基因分布在除1a染色體外的其他20條染色體上。此外，鑒定到超過300個條銹病成株抗性的數(shù)量性狀位點(qtl)，b基因組抗性位點最多。由于小麥條銹病菌的迅速變異，抗性基因易于失去抗性，且部分基因可能與不良性狀連鎖。因此，可用于小麥條銹病抗性改良的有效基因數(shù)量相對有限。因此，尋找新的抗條銹病基因(qtl)并開發(fā)與之關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)記對育種具有重要意義。目前，kasp(kompetitiveallele?specific?pcr)標(biāo)記技術(shù)已廣泛應(yīng)用于小麥、水稻、玉米等多種作物的snp位點檢測，省去了電泳步驟，實現(xiàn)了高通量的基因分型。利用小麥snp芯片產(chǎn)生的基因型數(shù)據(jù)，結(jié)合qtl定位和全基因組關(guān)聯(lián)研究(gwas)，可將相關(guān)snp轉(zhuǎn)化為kasp標(biāo)記，并直接用于分子標(biāo)記輔助育種，以提高育種效率。
3、蘭天25是甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院小麥研究所育成，苗期對條銹病混合菌免疫，成株期對條中29、條中31、水
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本申請要解決的技術(shù)問題是：如何鑒定或輔助鑒定小麥的條紋病抗性。
2、為解決上述技術(shù)問題，本申請?zhí)峁?yīng)用，所述應(yīng)用可為檢測ax-111915032位點的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)在下述a1)-a6)中的應(yīng)用：
3、a1)鑒定或輔助鑒定小麥條銹病抗性；
4、a2)制備鑒定或輔助鑒定小麥條銹病抗性的產(chǎn)品；
5、a3)篩選或輔助篩選條銹病抗性小麥品種；
6、a4)制備篩選或輔助篩選條銹病抗性小麥品種的產(chǎn)品；
7、a5)小麥育種和/或輔助育種；
8、a6)制備小麥育種和/或輔助育種的產(chǎn)品；
9、所述ax-111915032位點是小麥基因組中的一個snp位點，為seq?id?no.4的第37位核苷酸，其核苷酸種類為g或a。
10、本申請中，所述小麥育種的考察指標(biāo)可包括小麥的條銹病抗性。
11、本申請中，所述育種的目的包括培育小麥條銹病抗性高(小麥條銹病抗性高于親本)的小麥。
12、所述ax-111915032位點的基因型可為gg基因型、aa基因型或ag基因型。
13、所述gg基因型表示小麥基因組中所述ax-111915032位點的核苷酸種類為g的純合型；所述aa基因型表示小麥基因組中所述ax-111915032位點的核苷酸種類為a的純合型；所述ag基因型表示小麥基因組中所述ax-111915032位點的核苷酸種類為g和a的雜合型。
14、進(jìn)一步地，所述的應(yīng)用中，所述檢測ax-111915032位點的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)為：擴(kuò)增包括所述ax-111915032位點在內(nèi)的小麥基因組dna片段的引物組合物。
15、進(jìn)一步地，所述的應(yīng)用中，所述引物組合物可由核苷酸序列是seq?id?no.1的第22-44位的單鏈dna、核苷酸序列是seq?id?no.2的第22-45位的單鏈dna和核苷酸序列是seqid?no.3的單鏈dna組成。
16、進(jìn)一步地，所述的應(yīng)用中，所述引物組合物可由seq?id?no.1所示的單鏈dna、seqid?no.2所示的單鏈dna和seq?id?no.3所示的單鏈dna組成。
17、本申請還提供上述的引物組合物。
18、本申請中，所述引物組合物中的pcr引物可被標(biāo)記物標(biāo)記也可不被標(biāo)記物標(biāo)記。所述標(biāo)記物指可用于提供可檢測的效果且可以連接至核酸的任何原子或分子。標(biāo)記物包括但不限于染料；放射性標(biāo)記，諸如32p；結(jié)合部分，諸如生物素(biotin)；半抗原，諸如地高辛(dig)；發(fā)光、發(fā)磷光或發(fā)熒光部分；和單獨的熒光染料或與可以通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(fret)抑制或移動發(fā)射光譜的部分組合的熒光染料。標(biāo)記可以提供可通過熒光、放射性、比色、重量測定、x射線衍射或吸收、磁性、酶活性等檢測的信號。標(biāo)記可以是帶電荷的部分(正電荷或負(fù)電荷)或可選地，可以是電荷中性的。標(biāo)記可以包括核酸或蛋白序列或由其組合，只要包含標(biāo)記的序列是可檢測的。在一些實施方案中，核酸在沒有標(biāo)記的情況下直接檢測(例如，直接讀取序列)。
19、進(jìn)一步地，所述引物組合物可用于鑒定或輔助鑒定小麥條銹病抗性。
20、本申請還提供含有上述組合物的試劑或試劑盒。
21、本申請還提供dna分子，所述dna分子為核苷酸序列是seq?id?no.4所示的dna分子。
22、本申請還提供鑒定或輔助鑒定小麥條銹病抗性的方法，所述方法包括使用檢測ax-111915032位點的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)檢測ax-111915032位點的基因型，根據(jù)待測小麥ax-111915032位點的基因型鑒定或輔助鑒定小麥條銹病抗性；
23、所述ax-111915032位點是小麥基因組中的一個snp位點，是seq?id?no.4的第37位核苷酸，其核苷酸種類為g或a。
24、進(jìn)一步地，所述的方法中，所述檢測待測小麥的上述ax-111915032位點的基因型的方法包括以待鑒定小麥基因組dna為模板，利用上述的引物組合物進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到pcr產(chǎn)物；根據(jù)pcr產(chǎn)物的測序結(jié)果或熒光信號確定所述ax-111915032位點的基因型。
25、進(jìn)一步地，所述方法具體包括下述操作步驟：
26、s1)提取待測小麥的基因組dna；
27、s2)以s1)提取的基因組dna為模板，以上述引物組合物為擴(kuò)增引物，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，獲得pcr擴(kuò)增產(chǎn)物；
28、s3)根據(jù)pcr擴(kuò)增產(chǎn)物的ax-109906455位點的基因型判斷或輔助判斷待測小麥的條銹病抗性；
29、進(jìn)一步地，上述的方法中，s3)步驟中可根據(jù)所述pcr產(chǎn)物的測序結(jié)果或熒光顯色判斷ax-109906455位點的基因型。
30、進(jìn)一步地，所本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
1.應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為檢測AX-111915032位點的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)在下述A1)-A6)中的應(yīng)用：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測AX-111915032位點的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)為擴(kuò)增包括所述AX-111915032位點在內(nèi)的小麥基因組DNA片段的引物組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述引物組合物由核苷酸序列是SEQ?IDNo.1的第22-45位的單鏈DNA、核苷酸序列是SEQ?ID?No.2的第22-45位的單鏈DNA和核苷酸序列是SEQ?ID?No.3的單鏈DNA組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述引物組合物由SEQ?IDNo.1所示的單鏈DNA、SEQ?ID?No.2所示的單鏈DNA和SEQ?ID?No.3所示的單鏈DNA組成。
5.權(quán)利要求2-4中任一項所述的引物組合物。
6.含有權(quán)利要求5所述組合物的試劑。
7.DNA分子，所述DNA分子為核苷酸序列是SEQ?ID?No.4所示的DNA分子。
8.鑒定或輔助
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述檢測待測小麥的權(quán)利要求1中所述AX-111915032位點的基因型的方法包括以待鑒定小麥基因組DNA為模板，利用權(quán)利要求4中所述的引物組合物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR產(chǎn)物；根據(jù)PCR產(chǎn)物的測序結(jié)果或熒光信號確定所述AX-111915032位點的基因型。
10.小麥育種的方法，其特征在于，所述方法包括選擇權(quán)利要求1中所述AX-111915032位點的基因型為GG的小麥作為親本進(jìn)行育種，所述GG基因型表示小麥基因組中所述AX-111915032位點的核苷酸種類為G的純合型。
...【技術(shù)特征摘要】
1.應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為檢測ax-111915032位點的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)在下述a1)-a6)中的應(yīng)用：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測ax-111915032位點的多態(tài)性或基因型的物質(zhì)為擴(kuò)增包括所述ax-111915032位點在內(nèi)的小麥基因組dna片段的引物組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述引物組合物由核苷酸序列是seq?idno.1的第22-45位的單鏈dna、核苷酸序列是seq?id?no.2的第22-45位的單鏈dna和核苷酸序列是seq?id?no.3的單鏈dna組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述引物組合物由seq?idno.1所示的單鏈dna、seq?id?no.2所示的單鏈dna和seq?id?no.3所示的單鏈dna組成。
5.權(quán)利要求2-4中任一項所述的引物組合物。
6.含有權(quán)利要求5所述組合物的試劑。
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：楊芳萍，展宗斌，郭瑩，張雪婷，魯清林，化青春，
申請(專利權(quán))人：甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院小麥研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
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