【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物蛋白檢測，特別是涉及一種在雙抗夾心法中，用于與捕獲抗體偶聯后磁珠的封閉劑及其制備方法和用途。
技術介紹
1、現今，使用特異性抗體對檢測某一特定蛋白質的檢測技術已廣泛應用于蛋白表達水平的研究，其中最常用的是基于雙抗夾心法的elisa技術以及基于elisa雙抗夾心原理衍生出的各種蛋白檢測技術。在雙抗夾心法中，磁珠可以作為雙抗夾心結構中捕獲抗體的載體，具體地，雙抗夾心法的具體原理是：將磁珠偶聯上針對特定檢測物的捕獲抗體，在檢測靶分子時，將磁珠與微量待檢樣本混合，在懸液中將靶分子與磁珠表面偶聯的捕獲抗體進行特異性地結合，同時，熒光標記的檢測抗體也會與靶分子結合，最終形成帶有熒光標記的雙抗夾心結構。用流式細胞儀等進行分析時，儀器通過激光識別磁珠上報告分子的熒光強度，進而得知靶分子的表達水平。
2、封閉是指使用溶液再包被被抗體偶聯的磁珠的過程。在捕獲抗體偶聯磁珠時，所用的抗體濃度較低，因此磁珠表面尚有未被占據的空隙，封閉過程可以讓與檢測無關的蛋白質充填磁珠上的這些空隙，從而避免其他干擾物質的吸附。不合適的封閉劑會造成檢測過程中出現假陽性的情況，由其是針對于人炎癥相關的生物標志物進行含量檢測時，不合適的封閉劑會導致背景模糊，信號值弱甚至喪失，實驗的重復性差，對實驗結果造成嚴重的影響。
3、因此封閉劑對于以磁珠為載體的雙抗夾心法檢測靶分子的靈敏度至關重要，在針對于人炎癥相關的生物標志物進行含量檢測時，如何優化封閉劑的組分，以提高其信號值或靈敏度從而提供更加準確可信的實驗結果，是本專利技術想要解決的問題。
技術實現思路
1、鑒于以上所述現有技術的缺點，本專利技術的目的在于提供一種用于與捕獲抗體偶聯后磁珠的封閉劑及其制備方法和用途。以解決現有技術中，基于雙抗夾心法，在對人炎癥相關的生物標志物進行分析檢測時，用于與捕獲抗體偶聯后磁珠的封閉劑檢測效果差，背景模糊，信號值弱，靈敏度低的問題。
2、為實現上述目的及其他相關目的，本專利技術是通過以下技術方案獲得的。
3、本專利技術第一方面提供一種用于與捕獲抗體偶聯后磁珠的封閉劑，包括如下原料組分：以封閉劑的總質量為基準計，穩定劑的含量為2～5wt％，表面活性劑的含量為0.01～0.1wt％，防腐劑的含量為0.01～0.2wt％，余量為緩沖液。
4、如穩定劑的含量可以為2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、2.05wt％；表面活性劑的含量可以為0.01～0.05wt％，0.05～0.1wt％；防腐劑的含量可以為0.01～0.1wt％，0.1～0.2wt％。
5、優選地，所述緩沖液包括磷酸鹽緩沖液(pbs)、tris-鹽酸緩沖液、2-(n-嗎啉)乙磺酸緩沖液(mes緩沖液)、3-嗎啉丙磺酸緩沖液(mops緩沖液)、磷酸鹽緩沖液和4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液(hepes緩沖液)中的一種或多種。上述緩沖液能夠在體系中維持一定的ph環境，還可以調節滲透壓，具有和好的鹽平衡能力，從而可以避免蛋白變性或降解。
6、更優選地，所述緩沖液包括磷酸鹽緩沖液(pbs)和tris-鹽酸緩沖液中的一種或兩種。
7、優選地，所述緩沖液的摩爾濃度為0.8～1.5m。如可以為0.8～1.0m，1.0～1.5m。
8、優選地，所述緩沖液的ph值為7.0～8.0。如可以為7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0。
9、在基于雙抗夾心法對于人炎癥相關的生物標志物進行分析檢測時，緩沖液在上述實驗中起著緩沖作用，用以維持調節實驗過程中蛋白質的活性，維持滲透壓，防止蛋白降解、聚集、沉淀等。緩沖液的濃度和ph值均不是隨意設定的，對于摩爾濃度來說，如果緩沖液的濃度過高，如超過2.5m時，會出現鹽析，導致抗原抗體沉淀；如果緩沖液的濃度過低，則會削弱抗原抗體的結合能力。對于緩沖液的ph值來說，如果緩沖液的ph值較大，會影響抗原抗體的物理和化學性質，影響實驗結果的準確性；如果緩沖液的ph值較小，則會引起抗原非特異性的自凝，造成假陽性反應。
10、優選地，所述穩定劑包括牛血清白蛋白(bsa)、prionex和酪蛋白中的一種或多種。
11、更優選地，所述穩定劑為牛血清白蛋白(bsa)和prionex中的一種或兩種。
12、穩定劑可以與捕獲抗體偶聯后的磁珠復合物表面上的空白位點結合，從而起到保持抗體蛋白活性、穩定與抗體偶聯后的磁珠復合物構象的作用，同時還能夠降低抗體偶聯磁珠后的非特異性吸附能力，以減緩信號衰減，提高試驗檢測的靈敏度。
13、優選地，所述表面活性劑包括吐溫20(tween-20)、曲拉通x100和3-[3-(膽酰氨丙基)二甲氨基]丙磺酸內鹽(chaps)中的一種或多種。表面活性劑是具有疏水基團和親水基團的化合物，在封閉劑中加入表面活性劑對吸附的非特異性蛋白具有洗脫作用，從而減少蛋白檢測實驗中非特異性信號。
14、優選地，所述防腐劑包括proclin300、疊氮化鈉、硫柳汞鈉和對羥基苯乙酮中的一種或多種。防腐劑可以在長時間內抑制細菌、真菌及酵母生長。更優選為proclin300，proclin300防腐劑對大多數的酶或抗體交聯反應的功能無影響。此外，proclin300不影響pe活性，不會干擾pe標記二抗的檢測，不影響下游的檢測指標。
15、本專利技術第二方面提供一種上述用于與捕獲抗體偶聯后磁珠的封閉劑的制備方法，將如上所述的緩沖液、穩定劑、表面活性劑和防腐劑按比例混合得到所述封閉劑。
16、本專利技術第三方面提供一種如上所述的用于與捕獲抗體偶聯后的磁珠的封閉劑，在基于雙抗夾心法的蛋白檢測中，用于封閉所述與捕獲抗體偶聯后的磁珠的用途。
17、優選地，所述蛋白檢測包括對人炎癥相關的生物標志物的分析檢測。
18、優選地，所述人炎癥相關的生物標志物包括白細胞介素-8、白細胞介素-6、c反應蛋白、降鈣素原、腫瘤壞死因子-α和超敏c反應蛋白中的一種或多種。更優選為白細胞介素-8。
19、本專利技術第四方面提供一種蛋白檢測方法，所述蛋白檢測方法基于雙抗夾心原理，使用如上所述的用于與捕獲抗體偶聯后磁珠的封閉劑。
20、優選地，所述蛋白檢測方法包括采用流式細胞術。
21、優選地，所述磁珠的表面覆有親水性聚合物涂層。
22、優選地，所述蛋白檢測方法適用于人炎癥相關的生物標志物進行分析檢測。
23、優選地，所述磁珠選自羧基磁珠。羧基磁珠的表面覆有親水性聚合物涂層，羧基官能團可用于蛋白的偶聯，適合用于對人炎癥相關的生物標志物進行分析檢測。羧基磁珠具有超順磁性，在實驗中易于磁性分離和再混勻，與本申請提供的封閉劑相適配。
24、優選地，所述磁珠的粒徑范圍是0.1～0.8μm。如可以為0.1～0.3μm，0.3～0.8μm。
25、優選地，所述人炎癥相關的生物標志物包括白細胞介素-8、白細胞介素-6、c反應蛋白、降鈣素原、腫本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于與捕獲抗體偶聯后磁珠的封閉劑，其特征在于，包括如下原料組分：以封閉劑的總質量為基準計，穩定劑的含量為2～5wt％，表面活性劑的含量為0.01～0.1wt％，防腐劑的含量為0.01～0.2wt％，余量為緩沖液。
2.根據權利要求1中所述的封閉劑，其特征在于，所述緩沖液包括磷酸鹽緩沖液、Tris-鹽酸緩沖液、2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖液、3-嗎啉丙磺酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液和4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中的一種或多種；
3.根據權利要求1中所述的封閉劑，其特征在于，所述穩定劑包括牛血清白蛋白、Prionex和酪蛋白中的一種或多種；
4.一種如權利要求1～3任一項所述的用于與捕獲抗體偶聯后磁珠的封閉劑的制備方法，其特征在于，將所述緩沖液、穩定劑、表面活性劑和防腐劑按比例混合得到所述封閉劑。
5.一種如權利要求1～3任一項所述的用于與捕獲抗體偶聯后磁珠的封閉劑，在基于雙抗夾心法的蛋白檢測中，用于封閉所述與捕獲抗體偶聯后磁珠的用途。
6.根據權利要求5中所述的用途，其特征在于，所述蛋白檢測包括對人炎癥相關的生物標志物的分析
7.根據權利要求6中所述的用途，其特征在于，所述人炎癥相關的生物標志物包括白細胞介素-8、白細胞介素-6、C反應蛋白、降鈣素原、腫瘤壞死因子-α和超敏C反應蛋白中的一種或多種。
8.一種蛋白檢測方法，其特征在于，所述蛋白檢測方法基于雙抗夾心原理，使用如權利要求1～3任一項所述的用于與捕獲抗體偶聯后磁珠的封閉劑。
9.根據權利要求8中所述的蛋白檢測方法，其特征在于，所述蛋白檢測方法包括采用流式細胞術；
10.根據權利要求9中所述的蛋白檢測方法，其特征在于，所述磁珠選自羧基磁珠；
...【技術特征摘要】
1.一種用于與捕獲抗體偶聯后磁珠的封閉劑，其特征在于，包括如下原料組分：以封閉劑的總質量為基準計，穩定劑的含量為2～5wt％，表面活性劑的含量為0.01～0.1wt％，防腐劑的含量為0.01～0.2wt％，余量為緩沖液。
2.根據權利要求1中所述的封閉劑，其特征在于，所述緩沖液包括磷酸鹽緩沖液、tris-鹽酸緩沖液、2-(n-嗎啉)乙磺酸緩沖液、3-嗎啉丙磺酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液和4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中的一種或多種；
3.根據權利要求1中所述的封閉劑，其特征在于，所述穩定劑包括牛血清白蛋白、prionex和酪蛋白中的一種或多種；
4.一種如權利要求1～3任一項所述的用于與捕獲抗體偶聯后磁珠的封閉劑的制備方法，其特征在于，將所述緩沖液、穩定劑、表面活性劑和防腐劑按比例混合得到所述封閉劑。
5.一種如權利要...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李倩，歐瑩，徐祎春，李曼婧，韓峻松，袁箐，
申請(專利權)人：上海生物芯片有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。