熱加工處理中保持纖維蛋白原活性的方法及物質技術

本發明專利技術公開了一種使纖維蛋白原在Ｓ／Ｄ法、干熱病毒滅活兩步病毒滅活處理后仍能保持蛋白活性的方法和物質。

Method and substance for maintaining fibrinogen activity in hot processing

The invention discloses a method and a substance for keeping fibrin activity after two steps virus inactivation of S / D method and dry heat virus inactivation process.

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及蛋白質的活性保持，尤其涉及使纖維蛋白原在干熱滅活病毒處理 中保持蛋白活性的物質和方法。
技術介紹
人纖維蛋白原即凝血因子I，是血漿蛋白的主要成分之一，分子量約34萬。 纖維蛋白原在凝血酶的作用下可形成纖維蛋白，纖維蛋白進而與血小板等一起 形成穩固的纖維蛋白血栓。在臨床上，可單獨通過靜脈注射補充纖維蛋白原， 纖維蛋白原也可與凝血酶一起用于急救止血、創口粘合。隨著科技的發展，血液制品的潛在風險性更加被重視。《中國藥典》2005 版三部頒布執行，已經明確提出"人纖維蛋白原的生產過程中應采用經批準的 方法去除和滅活脂包膜病毒和非脂包膜病毒"。目前用于血液制品中大規模生產的病毒滅活方法主要有巴氏法、有機溶劑 /去污劑(S/D)法、干熱滅活法等。巴氏消毒法是法國微生物學家巴斯德為葡萄酒消毒時專利技術，并以他的名字 來命名的一種消毒方法。指在規定時間內以不太高的溫度處理液體食品的一種 加熱滅菌方法。它可消滅絕大部分細菌、酵母和霉菌。此法主要分為低溫法 (60 65°0滅菌15 30分鐘和高溫法(70 80。C)消毒5 15分鐘。S/D法即有機溶劑/去污劑法能破壞脂包膜病毒的外膜結構，因而可有效地 滅活艾滋病病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)等脂包膜。 可選擇有機溶劑磷酸三丁脂(TNBP)和非離子化的去污劑，如Triton X-100 或吐溫-80結合滅活脂包膜病毒。調節溶液溫度為24-26°C，至少保溫4小時。 由于S/D法滅活病毒時的條件比較溫和，對凝血因子產品中活性蛋白的結構和 生物活性幾乎沒有破壞作用，因此已用于凝血因子凍干制品的大規模生產中。 然而S/D法不能滅活非脂包膜，僅用S/D法處理的凝血因子制品仍有傳播甲肝、 B19等非脂包膜病毒的可能。干熱處理能有效地滅活脂包膜和非脂包膜病毒，因此在90年代就已用于IX、 VIII因子等血液制品地生產。干熱滅活病毒工藝，加熱條件主要有三種600C， 144小時;800C， 72小時和100。C， 30分鐘;從產品的熱處理工藝控制和 操作的方便性看，選擇100。C， 30分鐘的加熱條件是最多被采用的。人纖維蛋白原是一種本身不耐熱的蛋白，加熱處理很容易改變其結構，試 驗表明經過干熱滅活病毒處理后，纖維蛋白原的溶解時間延長，甚至超過30 分鐘的可接受極限；產品外觀變黃、萎縮，溶解后有絮狀物、不澄清、發黃、 穩定性下降；說明纖維蛋白原已經變性。因此，本領域迫切需要提供一種新的物質和方法，它可以使纖維蛋白原產 品在經過S/D法和干熱病毒滅活處理后，不但病毒滅活效果佳，而且其中的纖 維蛋白原的蛋白活性也能有效保持。
技術實現思路
本專利技術旨在提供一種使纖維蛋白原在經過熱處理后仍能保持蛋白活性的 物質。本專利技術的另一個目的是提供一種方法，它能使纖維蛋白原在經過熱處理后 仍能保持蛋白活性。本專利技術的再一個目的是提供一種在經過了 S/D法和干熱病毒滅活處理后， 仍能保持蛋白活性的纖維蛋白原產品及其制備方法。在本專利技術的第一方面，提供了一種氨基酸的用途，所述的氨基酸被用作或用于制備纖維蛋白原熱加工處理過程中的蛋白活性保護劑。在另一優選例中，所述的蛋白活性保護劑含有1-100%氨基酸。 在另一優選例中，所述的氨基酸是甘氨酸、精氨酸、或其組合；精氨酸優選精氨酸鹽酸鹽。在另一優選例中，所述的蛋白活性保護劑是熱穩定劑和/或蛋白復溶促進劑。 在另一優選例中，本專利技術提供了一種甘氨酸的用途，它被用作或用于制備纖 維蛋白原熱加工處理過程中的熱穩定劑。在另一優選例中，所述的熱穩定劑含有卜100%甘氨酸。在另一優選例中，所述的熱穩定劑還含有1-99%精氨酸；精氨酸優選精氨酸鹽酸鹽。在另一優選例中，所述的熱穩定劑由甘氨酸和精氨酸組成；精氨酸優選精氨4酸鹽酸鹽。在另一優選例中，本專利技術提供了一種精氨酸的用途，它被用作或用于制備纖 維蛋白原熱加工處理過程中的蛋白復溶促進劑。在另一優選例中，所述的蛋白復溶促進劑含有1-100%精氨酸；精氨酸優選精 氨酸鹽酸鹽。在另一優選例中，所述的蛋白復溶促進劑還含有1_99%甘氨酸。 在另一優選例中，所述的蛋白復溶促進劑由甘氨酸和精氨酸組成；精氨酸優 選精氨酸鹽酸鹽。在本專利技術的第二方面，提供了一種制備纖維蛋白原的方法，所述的方法包括 步驟(a) 將纖維蛋白或纖維蛋白原與蛋白活性保護劑混合，形成混有蛋白活性保護 劑的纖維蛋白原，其中所述蛋白活性保護劑含有氨基酸；(b) 干熱滅活病毒處理所述的混有蛋白活性保護劑的纖維蛋白原，形成經干熱 滅活病毒處理的纖維蛋白原。在另一優選例中，所述的氨基酸是甘氨酸、精氨酸、或其組合；精氨酸優選 精氨酸鹽酸鹽。在另一優選例中，所述的蛋白活性保護劑是熱穩定劑和/或蛋白復溶促進劑。 在另一優選例中，本專利技術提供了一種制備纖維蛋白原的方法，所述的方法包 括步驟(a) 將纖維蛋白或纖維蛋白原與熱穩定劑混合，形成混有熱穩定劑的纖維蛋白 原，其中所述熱穩定劑含有甘氨酸；(b) 干熱滅活病毒處理所述的混有熱穩定劑的纖維蛋白原，形成經干熱滅活病 毒處理的纖維蛋白原。在另一優選例中，所述步驟(a)前還包括步驟(a'):用有機溶劑/去污 劑(S/D)法對纖維蛋白原進行病毒滅活處理。在另一優選例中，所述步驟(b)前還包括步驟(b'):將混有熱穩定劑的 纖維蛋白原進行冷凍干燥。在另一優選例中，本專利技術提供了一種制備纖維蛋白原的方法，所述的方法包 括步驟(a)將纖維蛋白原與蛋白復溶促進劑混合，形成混有蛋白復溶促進劑的纖維蛋白原，其中所述蛋白復溶促進劑含有精氨酸；精氨酸優選精氨酸鹽酸鹽。(b)干熱滅活病毒處理所述的混有蛋白復溶促進劑的纖維蛋白原，形成經干熱滅活病毒處理的纖維蛋白原。在另一優選例中，所述步驟(a)前還包括步驟(a'):用有機溶劑/去污劑(S/D)法對纖維蛋白原進行病毒滅活處理。在另一優選例中，所述步驟(b)前還包括步驟(b'):將混有熱穩定劑的纖維蛋白或纖維蛋白原進行冷凍干燥。在本專利技術的第三方面，提供了一種組合物，它含有1-200重量份甘氨酸和1-200重量份精氨酸，所述甘氨酸和精氨酸的重量是組合物總重量的1—99%;精氨酸優選精氨酸鹽酸鹽。在另一優選例中，它還含有0. 4-400重量份枸櫞酸離子和0-200重量份蔗糖。 在另一優選例中，它還含有1-300重量份枸櫞酸離子和0-150重量份蔗糖。 在另一優選例中，它還含有2-220重量份枸橡酸離子和0-100重量份蔗糖。 在另一優選例中，甘氨酸的濃度為0.5 — 10 (w/v) %，精氨酸的濃度為0.5 —10 (w/v) %;精氨酸優選精氨酸鹽酸鹽。在另一優選例中，所述的組合物由1-200重量份甘氨酸和1-200重量份精氨酸組成；精氨酸優選精氨酸鹽酸鹽。在本專利技術的第四方面，提供了一種上述組合物的用途，它被用作或用于制備 纖維蛋白或纖維蛋白原熱加工處理過程中的蛋白活性保護劑；所述的組合物含有 1-200重量份甘氨酸和1-200重量份精氨酸，所述甘氨酸和精氨酸的重量是組合物 總重量的1一99%;精氨酸優選精氨酸鹽酸鹽。在本專利技術的第五方面，提供了一種纖維蛋白原組合物，它含有卜io重量份纖維蛋白原，1-200重量份甘氨酸，和1-200重量份精氨酸；所述組合物為灰白色或淡黃色疏松體，復本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種氨基酸的用途，其特征在于，它被用作或用于制備纖維蛋白原熱加工處理過程中的蛋白活性保護劑。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：黃凱，何秋，沈積慧，胡維兵，施煒，
申請(專利權)人：上海萊士血液制品股份有限公司，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]