【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及農(nóng)藥檢測，尤其涉及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法。
技術(shù)介紹
1、在甘蔗種植生長的過程中，為了提高產(chǎn)量及防治病蟲害，不可避免的使用到除草劑、殺蟲劑、植物生長調(diào)節(jié)劑等各類農(nóng)藥。由于蔗糖主要來源于甘蔗，其在生產(chǎn)過程中，甘蔗中殘留的農(nóng)殘可能在蔗糖中殘留，目前，關(guān)于蔗糖的農(nóng)藥殘留測定的文獻較少見，為更好的考察和控制蔗糖的質(zhì)量，急需建立蔗糖中農(nóng)藥殘留的檢測方法。
2、因此我們對此做出改進，提出液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、(一)本專利技術(shù)要解決的技術(shù)問題是：通過建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，所建立的方法前處理簡單、靈敏、準確，可作為蔗糖質(zhì)量控制的有效手段。
2、(二)技術(shù)方案
3、為了實現(xiàn)上述專利技術(shù)目的，本專利技術(shù)提供了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，包括以下步驟：
4、s1、確定分析條件，設(shè)置好分析的環(huán)境條件；
5、s2、溶液的制備，包括混合標準儲備液、內(nèi)標溶液、供試品溶液、混合標準溶液、基質(zhì)匹配混合標準溶液的制備；
6、s3、樣品的測定，取上述供試品溶液、基質(zhì)匹配混合標準溶液各5μl，注入lc-ms/ms儀，測定，采用基質(zhì)匹配內(nèi)標標準曲線法計算含量；
7、s4、方法學驗證，包括專屬性考察、儀器精密度、靈敏度、線性及基質(zhì)效應考察、回收率、溶液穩(wěn)定性的驗證；
8、s5、
9、優(yōu)選的，所述步驟s1中，環(huán)境條件的設(shè)置包括：色譜柱2.1mm×150mm，3.0μm；流動相a為0.05％甲酸溶液，含10mmo/l甲酸銨，流動相b0.05％甲酸甲醇溶液，含10mmo/l甲酸銨，梯度洗脫，0～1min，70％a→60％a；1～10min，60％a→20％a；10～11min，20％a→5％a；11～13min，5％a；13～13.5min，5％a→0％a；13.5～15min，0％a；15～15.2min，0％a→70％a；15.2～18min，70％a；流速為0.35ml/min；柱溫為40℃；進樣量為5μl；電噴霧離子源，正負離子同時檢測模式，硝磺草酮、甲磺草胺、氟苯蟲酰胺為負離子模式，其余物質(zhì)為正離子模式；監(jiān)測模式為每一物質(zhì)采集保留時間前后一分鐘的多反應監(jiān)測；霧化氣流量為3l/min；加熱氣流量為10l/min；接口溫度為300℃；脫溶劑溫度為526℃；dl管溫度為250℃；加熱塊溫度為400℃；干燥氣流量為10l/min。
10、優(yōu)選的，所述步驟s2中，所述混合標準儲備液的制備方法為：精密量取各物質(zhì)標準溶液各0.1ml置于同一10ml量瓶，加入丙酮0.2ml，混勻，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得1μg/ml，所述內(nèi)標溶液的制備方法為：精密量取氘代莠去津、氘代倍硫磷的混合內(nèi)標溶液0.5ml置于5ml量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得5μg/ml。
11、優(yōu)選的，所述步驟s2中，所述供試品溶液的制備方法為：取各批蔗糖樣品，經(jīng)粉碎機粉碎研磨成粉末，取約2g，精密稱定，置于50ml離心管中，分別精密加入內(nèi)標溶液20μl、1％乙酸乙腈溶液10ml，渦旋5分鐘，靜置，取上清液經(jīng)0.22μm濾膜濾過，棄去初濾液約3-3.5ml，精密量取續(xù)濾液5ml置于15ml離心管中，氮氣吹至近干，用0.1％的50:50乙酸乙腈-水混合溶液定容至1ml，渦旋3分鐘使溶解，以6000rpm離心5分鐘，取上清液，所述混合標準溶液的制備方法為：精密量取標準儲備液20μl、50μl、0.1、0.25、0.5、0.75、1.0ml分別置于10ml量瓶中，精密加入內(nèi)標儲備液0.1ml，用0.1％乙酸乙腈-水(50:50)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為標準曲線溶液1～7，濃度分別為2、5、10、25、50、75、100ng/ml，內(nèi)標濃度為50ng/ml。
12、優(yōu)選的，所述步驟s2中，所述基質(zhì)匹配混合標準溶液的制備方法為：取空白基質(zhì)樣品按照供試品溶液項下操作至氮氣吹至近干，精密加入混合標準溶液各標準曲線溶液各1ml，渦旋3分鐘使溶解，以6000rpm離心5分鐘，取上清液，作為基質(zhì)匹配標準曲線溶液1～7，濃度分別為2、5、10、25、50、75、100ng/ml，內(nèi)標濃度為50ng/ml。
13、優(yōu)選的，所述步驟s4中，所述專屬性考察的驗證方式為：取0.1％乙酸乙腈-水(50:50)混合溶液、基質(zhì)空白溶液測定；所述儀器精密度的驗證方式為取基質(zhì)匹配混合標準溶液連續(xù)測定6次。
14、優(yōu)選的，所述步驟s4中，所述靈敏度的驗證方式為：取基質(zhì)匹配混合標準溶液，用0.1％乙酸乙腈-水(50:50)混合溶液逐級稀釋，測定，以信噪比不低于3:1時的濃度作為儀器檢測限，根據(jù)供試品溶液制備方法換算為μg/kg，所述線性及基質(zhì)效應考察的驗證方式為：取混合標準溶液和基質(zhì)匹配混合標準溶液注入儀器，以各成分的質(zhì)量濃度x為橫坐標、各成分峰面積y為縱坐標，繪制標準曲線，并將參數(shù)[(混合標準溶液標準曲線外標法的斜率與基質(zhì)匹配混合標準溶液曲線外標法斜率的比值)-1*100％]作為基質(zhì)效應的考察。
15、優(yōu)選的，所述步驟s4中，所述回收率的驗證方式為：取不含各待測物質(zhì)的空白蔗糖粉末約2g共18份分別置于50ml離心管中，分別以每一體積各加6份精密加入標準儲備液20、50、100μl、以及精密加入內(nèi)標溶液20μl，再分別精密加入1％乙酸乙腈10ml，渦旋5分鐘，靜置10分鐘以上，取上清液經(jīng)0.22μm濾膜濾過，棄去初濾液約3-3.5ml，精取續(xù)濾液5ml置于15ml離心管中，氮氣吹至近干，用0.1％乙酸乙腈-水(50:50)混合溶液定容至1ml，渦旋3分鐘使溶解，以6000rpm離心5分鐘，取上清液。所述溶液穩(wěn)定性的驗證方式為：取回收率項下10μg/kg濃度中的一份供試品溶液，分別于0、3、4、6、8、10、12小時測定，計算回收率及精密度。
16、(三)有益效果
17、本專利技術(shù)所提供的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其有益效果是：
18、通過建立蔗糖中農(nóng)藥殘留的測定方法，該方法使用酸性乙腈提取，無需凈化，前處理方便快捷；使用正負離子同時檢測的分時間段多反應檢測模式，高效、靈敏；使用基質(zhì)匹配標準曲線內(nèi)標法定量，準確度與精密度均能滿足農(nóng)藥多殘留檢測要求，可用于蔗糖的質(zhì)量控制，可有助于發(fā)展高端蔗糖產(chǎn)業(yè)、提升蔗糖的附加值。
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1.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其特征在于，所述步驟S1中，環(huán)境條件的設(shè)置包括：色譜柱2.1mm×150mm，3.0μm；流動相A為0.05％甲酸溶液，含10mmo/L甲酸銨，流動相B0.05％甲酸甲醇溶液，含10mmo/L甲酸銨，梯度洗脫，0～1min，70％A→60％A；1～10min，60％A→20％A；10～11min，20％A→5％A；11～13min，5％A；13～13.5min，5％A→0％A；13.5～15min，0％A；15～15.2min，0％A→70％A；15.2～18min，70％A；流速為0.35ml/min；柱溫為40℃；進樣量為5μl；電噴霧離子源，正負離子同時檢測模式，硝磺草酮、甲磺草胺、氟苯蟲酰胺為負離子模式，其余物質(zhì)為正離子模式；監(jiān)測模式為每一物質(zhì)采集保留時間前后一分鐘的多反應監(jiān)測；霧化氣流量為3L/min；加熱氣流量為10L/min；接口溫度為300℃；脫溶劑溫度為526℃；DL管溫度為250℃；加熱塊溫
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其特征在于，所述步驟S2中，所述混合標準儲備液的制備方法為：精密量取各物質(zhì)標準溶液各0.1ml置于同一10ml量瓶，加入丙酮0.2ml，混勻，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得1μg/ml，所述內(nèi)標溶液的制備方法為：精密量取氘代莠去津、氘代倍硫磷的混合內(nèi)標溶液0.5ml置于5ml量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得5μg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其特征在于，所述步驟S2中，所述供試品溶液的制備方法為：取各批蔗糖樣品，經(jīng)粉碎機粉碎研磨成粉末，取約2g，精密稱定，置于50ml離心管中，分別精密加入內(nèi)標溶液20μl、1％乙酸乙腈溶液10ml，渦旋5分鐘，靜置，取上清液經(jīng)0.22μm濾膜濾過，棄去初濾液約3-3.5ml，精密量取續(xù)濾液5ml置于15ml離心管中，氮氣吹至近干，用0.1％乙酸乙腈-水(50:50)混合溶液定容至1ml，渦旋3分鐘使溶解，以6000rpm離心5分鐘，取上清液。所述混合標準溶液的制備方法為：精密量取標準儲備液20μl、50μl、0.1、0.25、0.5、0.75、1.0ml分別置于10ml量瓶中，精密加入內(nèi)標溶液0.1ml，用0.1％乙酸乙腈-水(50:50)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為標準曲線溶液1～7，濃度分別為2、5、10、25、50、75、100ng/ml，內(nèi)標濃度為50ng/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其特征在于，所述步驟S2中，所述基質(zhì)匹配混合標準溶液的制備方法為：取空白基質(zhì)樣品按照供試品溶液項下操作至氮氣吹至近干，精密加入混合標準溶液各標準曲線溶液各1ml，渦旋3分鐘使溶解，以6000rpm離心5分鐘，取上清液，作為基質(zhì)匹配標準曲線溶液1～7，濃度分別為2、5、10、25、50、75、100ng/ml，內(nèi)標濃度為50ng/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其特征在于，所述步驟S4中，所述專屬性考察的驗證方式為：取0.1％乙酸乙腈-水(50:50)混合溶液、基質(zhì)空白溶液測定；所述儀器精密度的驗證方式為取基質(zhì)匹配混合標準溶液連續(xù)測定6次。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其特征在于，所述步驟S4中，所述靈敏度的驗證方式為：取基質(zhì)匹配混合標準溶液，用0.1％乙酸乙腈-水(50:50)混合溶液逐級稀釋，測定，以信噪比不低于3:1時的濃度作為儀器檢測限，根據(jù)供試品溶液制備方法換算為μg/kg。所述線性及基質(zhì)效應考察的驗證方式為：取混合標準溶液和基質(zhì)匹配混合標準溶液注入儀器，以各成分的質(zhì)量濃度X為橫坐標、各成分峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線，并將參數(shù)[(混合標準溶液標準曲線外標法的斜率與基質(zhì)匹配混合標準溶液曲線外標法斜率的比值)-1*100％]作為基質(zhì)效應的考察。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其特征在于，所述步驟S4中，所述回收率的驗證方式為：取不含各待測物質(zhì)的空白蔗糖粉末約2g共18份分別置于50ml離心管中，分別以每一體積各加6份精密加入標準儲備液20、50、100μl、以及精密加入內(nèi)標溶液20μl，再分別精密加入1％乙酸乙腈10ml，渦旋5分鐘，靜置10分鐘以上，取上清液經(jīng)0.22μ...
【技術(shù)特征摘要】
1.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其特征在于，所述步驟s1中，環(huán)境條件的設(shè)置包括：色譜柱2.1mm×150mm，3.0μm；流動相a為0.05％甲酸溶液，含10mmo/l甲酸銨，流動相b0.05％甲酸甲醇溶液，含10mmo/l甲酸銨，梯度洗脫，0～1min，70％a→60％a；1～10min，60％a→20％a；10～11min，20％a→5％a；11～13min，5％a；13～13.5min，5％a→0％a；13.5～15min，0％a；15～15.2min，0％a→70％a；15.2～18min，70％a；流速為0.35ml/min；柱溫為40℃；進樣量為5μl；電噴霧離子源，正負離子同時檢測模式，硝磺草酮、甲磺草胺、氟苯蟲酰胺為負離子模式，其余物質(zhì)為正離子模式；監(jiān)測模式為每一物質(zhì)采集保留時間前后一分鐘的多反應監(jiān)測；霧化氣流量為3l/min；加熱氣流量為10l/min；接口溫度為300℃；脫溶劑溫度為526℃；dl管溫度為250℃；加熱塊溫度為400℃；干燥氣流量為10l/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其特征在于，所述步驟s2中，所述混合標準儲備液的制備方法為：精密量取各物質(zhì)標準溶液各0.1ml置于同一10ml量瓶，加入丙酮0.2ml，混勻，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得1μg/ml，所述內(nèi)標溶液的制備方法為：精密量取氘代莠去津、氘代倍硫磷的混合內(nèi)標溶液0.5ml置于5ml量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得5μg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測蔗糖中47種農(nóng)藥殘留量的方法，其特征在于，所述步驟s2中，所述供試品溶液的制備方法為：取各批蔗糖樣品，經(jīng)粉碎機粉碎研磨成粉末，取約2g，精密稱定，置于50ml離心管中，分別精密加入內(nèi)標溶液20μl、1％乙酸乙腈溶液10ml，渦旋5分鐘，靜置，取上清液經(jīng)0.22μm濾膜濾過，棄去初濾液約3-3.5ml，精密量取續(xù)濾液5ml置于15ml離心管中，氮氣吹至近干，用0.1％乙酸乙腈-水(50:50)混合溶液定容至1ml，渦旋3分鐘使溶解，以6000rpm離心5分鐘，取上清液。所述混合標準溶液的制備方法為：精密量取標準儲備液20μl、50μl、0.1、0.25、0.5、0.75、1.0ml分別置于10ml量瓶中，精密加入內(nèi)標溶液0.1ml，用0.1％乙酸乙腈-水(...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：盧日剛，趙莊，譚菊英，朱健萍，許有誠，鄧鳴，何虹，蔣潔，楊欣智，徐光輝，王健，謝凌波，劉莊蔚，吳明珍，
申請(專利權(quán))人：廣西壯族自治區(qū)藥品檢驗研究院廣西壯族自治區(qū)藥品包裝材料容器產(chǎn)品檢測中心，
類型：發(fā)明
國別省市：
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