【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物檢測領域。
技術介紹
1、蜜蜂在維持自然生態平衡和生態農業，供給人類高營養和保健功能蜂產品的過程中扮演重要角色。中華蜜蜂(apis?cerana?cerana)是我國獨特的蜜蜂資源，具有極強的耐寒性和抗螨性，因此中華蜜蜂(簡稱中蜂)對于農業生產以及花卉植物的冬季繁殖具有不可替代的作用。但近十年來，由于各種原因，世界各地的蜜蜂大量流失，嚴重威脅各國的養蜂業、生態平衡和農村農業生產。
2、研究表明，蜜蜂幼蟲感染的病毒主要是囊狀幼蟲病毒(sbv)。sbv感染中華蜜蜂a.cerana?cerana時被稱為中蜂囊狀幼蟲病毒(csbv)，csbv使中蜂幼蟲不完全蛹化且蛹內充滿病毒粒子。當損害嚴重時，大量幼蟲會因感染而死亡，同時成蟲為維護蜂群的生存環境而清理病死的幼蟲時也會被感染上csbv，最終導致種群的滅絕，對養蜂產業形成無法挽回的損失。
3、神經酰胺是鞘磷脂代謝途徑的中心成分。它是從頭合成途徑中的關鍵中間體，首先在內質網中產生，然后轉移到高爾基復合體。一旦轉移，它就會在許多不同的生物合成途徑中的一種中進一步代謝。
技術實現思路
1、為了檢測感染csbv前后中蜂幼蟲體內神經酰胺含量的變化，對感染csbv病毒的中蜂幼蟲體內神經酰胺含量進行檢測。研究發現，與正常組相比，感染csbv病毒的幼蟲體內神經酰胺含量顯著增加，但隨著感染程度的加深，感染組與正常組神經酰胺含量的差異不顯著。結果表明，中蜂幼蟲感染csbv病毒后神經酰胺的含量升高，目前市面上，主要為檢測昆
2、本申請公開了一種針對中蜂感染csbv情況的檢測試劑盒，使其對中蜂感染情況的檢測更加靈敏，特異性更強，大大縮短檢測時間和成本。可及時篩選出染病中蜂來指導后續治療并提高存活率，為飼養、研究提供有效幫助。
3、首先，對于神經酰胺通路中所涉及到的幾種蛋白酶進行檢測，篩選出中華蜜蜂中性鞘磷脂酶acnsmase作為關鍵酶，擴增acnsmase基因，進行t載體的構建并完成轉化，挑選目的基因片段并進行重組表達載體的構建，最后進行重組蛋白的誘導表達。大量誘導該重組蛋白，免疫小鼠，獲得多克隆抗體。
4、用從中蜂幼蟲中提取的總蛋白作為抗原包被微孔板，往包被抗原的微孔中加入制備出來的抗體，再與hrp標記的抗體結合，形成抗原－抗體－酶標抗體復合物，進行顯色反應。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(od值)。
5、本申請能夠靈敏、快速、高效的新型試劑盒，用于檢測中蜂病原微生物感染情況，輔助有關蜜蜂生產以及相關實驗研究，與現有昆蟲神經酰胺檢測試劑盒相比，該試劑盒的成本更低。
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1.一種中蜂囊狀幼蟲病毒的檢測試劑盒，其特征在于，通過檢測正常蜂群和疑似患病蜂群中的神經酰胺含量的差異性來預測蜂群是否感染CSBV，包括如下：檢測試劑盒的檢測抗體為多克隆抗體，所述的多克隆抗體的制備方法如下：
2.根據權利要求1所述的中蜂囊狀幼蟲病毒的檢測試劑盒，其特征在于，在步驟三中IPTG誘導目的蛋白表達的條件為：在室溫下培養至OD值0.6-0.8時加入終濃度為0.1mmol/L的IPTG，誘導8h。
3.根據權利要求1所述的中蜂囊狀幼蟲病毒的檢測試劑盒，其特征在于，所述的檢測試劑盒還包括：pH9.6的碳酸鹽緩沖液、5％的脫脂奶粉、TBST洗滌液、HRP-羊抗鼠、2mol/L的H2SO4。
4.一種中蜂囊狀幼蟲病毒的檢測方法，其特征在于，步驟如下：
5.根據權利要求4所述的中蜂囊狀幼蟲病毒的檢測方法，其特征在于，步驟二具體包括：
【技術特征摘要】
1.一種中蜂囊狀幼蟲病毒的檢測試劑盒，其特征在于，通過檢測正常蜂群和疑似患病蜂群中的神經酰胺含量的差異性來預測蜂群是否感染csbv，包括如下：檢測試劑盒的檢測抗體為多克隆抗體，所述的多克隆抗體的制備方法如下：
2.根據權利要求1所述的中蜂囊狀幼蟲病毒的檢測試劑盒，其特征在于，在步驟三中iptg誘導目的蛋白表達的條件為：在室溫下培養至od值0.6-0.8時加入終濃度為0.1mmol/...
【專利技術屬性】
技術研發人員：黨曉群，郭悅，張潔，張飛揚，謝欣瑞，姚麗莎，王藝璇，
申請(專利權)人：重慶師范大學，
類型：發明
國別省市：
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