【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于動物分子生物學，涉及一種用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物、試劑盒及鑒別方法。
技術介紹
1、拉薩裂腹魚(schizothorax?waltoni)隸屬于鯉形目(cypriniformes)，鯉科(cyprinidae)，裂腹魚亞科(schizothoracinae)，裂腹魚屬(schizothorax)，僅分布于西藏自治區雅魯藏布江中上游干、支流及附屬水體，為我國的特有種。裂腹魚屬鯉形目鯉科。因魚的臀鰭兩側具有排列成行的大鱗片，鱗片之間似腹部裂口，故名裂腹魚。西藏裂腹魚屬有15個種，占中國已知該屬39個種的38.5％，主要分布于金沙江、瀾滄江、怒江、伊洛瓦底江和雅魯藏布江下游海拔相對較低的河段，只有拉薩裂腹魚、巨須裂腹魚、異赤裂腹魚、橫口裂腹魚和西藏裂腹魚分布在海拔3000～4500米的雅魯藏布江中游、印度河上游和班公錯等水體，是該屬魚類分布海拔最高的種類。從棲息環境分析，除西藏裂腹魚可同時分布于江、湖兩種水體外，其他均在外流河水環境生活。
2、增殖放流就是用人工方式向海洋、江河、湖泊等公共水域放流水生生物苗種或親體的活動。通過增殖放流可以補充和恢復生物資源的群體，因為水生生物資源下降，有的資源甚至很少或者沒有，通過增殖放流，人工的來補充這些生物資源到水里去，這樣就增加了資源，改善了生物的種群結構，同時也能夠維護生物的多樣性。有些瀕危的物種，就是現在水里面很少的、受到保護的這些品種，通過增殖放流的方式可以增加它的數量，起到了對這些瀕危物種的保護作用。
3、拉薩裂腹魚的數量急劇減少是不可爭
技術實現思路
1、為了解決
技術介紹
中存在的上述技術問題，本專利技術提供了一種可以準確評估拉薩裂腹魚放流效果的用于鑒定拉薩裂腹魚的引物及應用試劑盒。
2、為了實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：
3、一種用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物，其特征在于：所述用于鑒定拉薩裂腹魚的引物包括10對引物，10對引物的序列及退火溫度分別是：
4、
5、優選地，本專利技術所提供的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物中，引物lslfy1與引物lslfy2配合使用，兩對引物在同一離心管中同時進行pcr擴增；引物lslfy3與引物lslfy4配合使用，兩對引物在同一離心管中同時進行pcr擴增；引物lslfy5與引物lslfy6配合使用，兩對引物在同一離心管中同時進行pcr擴增；引物lslfy7與引物lslfy8配合使用，兩對引物在同一離心管中同時進行pcr擴增；引物lslfy9與引物lslfy10配合使用，兩對引物在同一離心管中同時進行pcr擴增。
6、優選地，本專利技術所提供的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物在鑒定拉薩裂腹魚時的應用。
7、優選地，本專利技術所提供的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物在進行拉薩裂腹魚親子鑒定時的應用。
8、優選地，本專利技術所提供的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物在對拉薩裂腹魚放流效果評估時的應用。
9、一種基于如前所述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物制備得到的檢測試劑盒。
10、一種用于鑒定拉薩裂腹魚的檢測試劑盒，其特征在于：所述用于鑒定拉薩裂腹魚的檢測試劑盒包括10×pcrbuffer、2.5mmol/l?dntp、2mmol/l?mgcl2、0.5u/μl?taq酶、超純水和如前所記載的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物。
11、一種用于對拉薩裂腹魚增殖放流效果進行評估的方法，其特征在于：所述用于對拉薩裂腹魚增殖放流效果進行評估的方法包括以下步驟：
12、1)保存拉薩裂腹魚人工繁殖親本的dna親本；
13、2)將拉薩裂腹魚人工繁殖子代放流；
14、3)捕撈拉薩裂腹魚的野外群體；
15、4)提取捕撈到野外群體的拉薩裂腹魚的dna捕撈；
16、5)分別利用前述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物或前述的用于鑒定拉薩裂腹魚的檢測試劑盒對步驟1)所得到的dna親本以及步驟4)所得到的dna捕撈進行pcr擴增，并將pcr產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳；
17、6)根據步驟5)的結果分析拉薩裂腹魚親本和野外捕撈到的拉薩裂腹魚的親子關系，得到捕撈到的拉薩裂腹魚中拉薩裂腹魚親本的數量，根據數量評估放流效果。
18、優選地，本專利技術所采用的步驟5)的pcr擴增的反應體系是：25μl：10×pcrbuffer3μl，2.5mmol/ldntp2μl，2mmol/l?mgcl23μl，上下游引物各1μl，0.5u/μl?taq酶0.5μl，dna模板2μl，超純水10.5μl；
19、所述pcr擴增的程序是：94℃預變性3min；94℃變性30s，58℃退火溫度復性30s，72℃延伸29s，35個循環；72℃延伸10min；4℃保存。
20、優選地，本專利技術所采用的步驟6)中親子關系的鑒定方式是：根據電泳結果判斷利用用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物或的用于鑒定拉薩裂腹魚的檢測試劑盒所擴增的等位基因是否全部來自拉薩裂腹魚親本中，若是，則野外捕撈的拉薩裂腹魚個體與步驟2)中的拉薩裂腹魚具有親子關系；如否，則不具有親子關系。
21、本專利技術具有以下的優點：
22、本專利技術能夠百分百準確鑒定野外拉薩裂腹魚是否為被放流拉薩裂腹魚個體。本專利技術進行放流效果評估操作簡單，只需要保存親本個體的dna樣本即可。本專利技術不需要對放流個體進行取樣或者掛牌，避免了被放流個體在野外環境下的游泳困難的難題。
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1.一種用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物，其特征在于：所述用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物包括10對引物，10對引物的序列及退火溫度分別是：
2.根據權利要求1所述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物，其特征在于：所述用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物中，引物LSLFY1與引物LSLFY2配合使用；引物LSLFY3與引物LSLFY4配合使用；引物LSLFY5與引物LSLFY6配合使用；引物LSLFY7與引物LSLFY8配合使用；引物LSLFY9與引物LSLFY10配合使用。
3.基于如權利要求1或2所述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物在鑒定拉薩裂腹魚時的應用。
4.基于如權利要求1或2所述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物在進行拉薩裂腹魚親子鑒定時的應用。
5.基于如權利要求1或2所述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物在對拉薩裂腹魚放流效果評估時的應用。
6.一種基于如權利要求1或2所述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物制備得到的檢測試劑盒。
7.一種用于鑒定拉薩裂腹魚的檢測試劑
8.一種用于對拉薩裂腹魚增殖放流效果進行評估的方法，其特征在于：所述用于對拉薩裂腹魚增殖放流效果進行評估的方法包括以下步驟：
9.根據權利要求8所述的用于對拉薩裂腹魚增殖放流效果進行評估的方法，其特征在于：所述步驟5)的PCR擴增的反應體系是：25μL：10×PCRBuffer3μL，2.5mmol/LdNTP2μL，2mmol/LMgCl23μL，上下游引物各1μL，0.5U/μL?Taq酶0.5μL，DNA模板2μL，超純水10.5μL；
10.根據權利要求8或9所述的用于對拉薩裂腹魚增殖放流效果進行評估的方法，其特征在于：所述步驟6)中親子關系的鑒定方式是：根據電泳結果判斷利用權利要求1所述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物或權利要求7所述的用于鑒定拉薩裂腹魚的檢測試劑盒所擴增的等位基因是否全部來自拉薩裂腹魚親本中，若是，則野外捕撈的拉薩裂腹魚個體與步驟2)中的拉薩裂腹魚具有親子關系；如否，則不具有親子關系。
...【技術特征摘要】
1.一種用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物，其特征在于：所述用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物包括10對引物，10對引物的序列及退火溫度分別是：
2.根據權利要求1所述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物，其特征在于：所述用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物中，引物lslfy1與引物lslfy2配合使用；引物lslfy3與引物lslfy4配合使用；引物lslfy5與引物lslfy6配合使用；引物lslfy7與引物lslfy8配合使用；引物lslfy9與引物lslfy10配合使用。
3.基于如權利要求1或2所述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物在鑒定拉薩裂腹魚時的應用。
4.基于如權利要求1或2所述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物在進行拉薩裂腹魚親子鑒定時的應用。
5.基于如權利要求1或2所述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物在對拉薩裂腹魚放流效果評估時的應用。
6.一種基于如權利要求1或2所述的用于鑒定拉薩裂腹魚增殖放流個體的引物制備得到的檢測試劑盒。
7.一種用于鑒定拉薩裂腹魚的檢測試劑盒，其特征在于：所述用于鑒定拉薩裂腹魚的檢測試劑盒包括...
【專利技術屬性】
技術研發人員：吳雷，顧正選，張曉栓，劉曉銳，張乾，劉偉，商學妹，李贊，楊淳祥，王云澤，
申請(專利權)人：武漢中科瑞華生態科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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