【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物，具體的是涉及一種類黃酮多羥基位點的糖基化方法。
技術(shù)介紹
1、類黃酮是一類廣泛存在于自然界中的活性天然化合物，根據(jù)其基本骨架中的c3環(huán)結(jié)構(gòu)差異，類黃酮被分為黃酮、黃酮醇、黃烷酮、異黃酮等多種類型。現(xiàn)代藥理學(xué)結(jié)果表明類黃酮具有抗氧化、抗炎、抗病毒等諸多藥理活性，是尋找新藥開發(fā)先導(dǎo)化合物的來源寶庫。但天然存在的類黃酮化合物往往具有水溶性差、穩(wěn)定性低、選擇性較差等缺點，極大限制了適應(yīng)性新藥的尋找和開發(fā)。糖基化是次生代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)修飾的重要形式，是導(dǎo)致類黃酮化合物結(jié)構(gòu)多樣性的主要因素之一，在臨床上，多數(shù)黃酮苷相較于苷元具有更小的毒副作用及更高的穩(wěn)定性和生物利用度。因此對一些黃酮進(jìn)行糖基化修飾將有助于其在臨床上開拓更好的應(yīng)用方向。
2、近年來，糖基化修飾的化學(xué)和生物合成法研究取得了較大進(jìn)展；但化學(xué)糖基化反應(yīng)存在副產(chǎn)物和中間體多、區(qū)域選擇性和立體選擇性較差、收率低、保護(hù)脫保護(hù)步驟繁瑣、污染大等缺點，此外，低原子效能和部分催化劑的昂貴價格也使得化學(xué)合成法在大規(guī)模生產(chǎn)糖苷中存在很多短板。相比而言，利用酶催化的生物合成法不僅具有立體和區(qū)域選擇性，而且操作步驟相對簡單，對環(huán)境污染也更小，符合綠色化學(xué)理念，因此，利用工具酶催化合成產(chǎn)物的生物合成逐步成為該領(lǐng)域的研究焦點。類黃酮-3,7,4′-二-o-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶，是一種以尿苷二磷酸(uridine?diphosphate，udp)活化的糖分子作為糖基供體的糖基轉(zhuǎn)移酶(udp-glycosyltransferase，ugt)，它能專一性的催化類黃酮a環(huán)的3位和7位，以及b
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)主要針對上述技術(shù)問題，提供一種催化生成類黃酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷的糖基轉(zhuǎn)移酶基因，以及生物合成類黃酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷的方法，以解決現(xiàn)存化學(xué)合成類黃酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列化合物的不足。
2、具體地，本專利技術(shù)提供如下技術(shù)方案：
3、一方面，本專利技術(shù)提供一種糖基轉(zhuǎn)移酶基因，其序列為編碼包含如seq?id?no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列，或與編碼包含如seq?id?no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列全互補(bǔ)配對的序列。
4、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶基因序列為編碼包含如seq?id?no.3所示氨基酸序列的核苷酸序列，或與編碼包含如seq?id?no.3所示氨基酸序列的核苷酸序列全互補(bǔ)配對的序列。
5、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶基因序列為編碼包含如seq?id?no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列，或與編碼包含如seq?id?no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列全互補(bǔ)配對的序列。
6、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶基因序列為編碼如seq?id?no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列，或與編碼如seq?id?no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列全互補(bǔ)配對的序列。
7、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶基因的核苷酸序列如seq?id?no:1所示，或與seq?id?no.1所示序列完全互補(bǔ)配對的核苷酸序列。
8、另一方面，本專利技術(shù)提供一種糖基轉(zhuǎn)移酶，其氨基酸序列包含如seq?id?no.4所示序列。
9、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列包含如seq?id?no.3所示序列。
10、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列為包含如seq?id?no.2的序列。
11、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列為如seq?id?no.2所示序列。
12、另一方面，本專利技術(shù)提供一種糖基轉(zhuǎn)移酶基因在合成類黃酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列糖苷類化合物中的應(yīng)用，所述糖基轉(zhuǎn)移酶基因的核酸序列為編碼包含如seq?idno.4所示氨基酸序列的核苷酸序列，或與編碼包含如seq?id?no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列全互補(bǔ)配對的序列。
13、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶基因序列為編碼包含如seq?id?no.3所示氨基酸序列的核苷酸序列，或與編碼包含如seq?id?no.3所示氨基酸序列的核苷酸序列全互補(bǔ)配對的序列。
14、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶基因序列為編碼包含如seq?id?no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列，或與編碼包含如seq?id?no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列全互補(bǔ)配對的序列。
15、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶基因序列為編碼如seq?id?no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列，或與編碼如seq?id?no.2所示氨基酸序列的核苷酸序列全互補(bǔ)配對的序列。
16、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶基因的核苷酸序列如seq?id?no:1所示，或與seq?id?no.1所示序列完全互補(bǔ)配對的核苷酸序列。
17、另一方面，本專利技術(shù)提供一種糖基轉(zhuǎn)移酶在合成類黃酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列糖苷類化合物中的應(yīng)用，所述糖基轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列包含如seq?id?no.4所示序列。
18、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列包含如seq?id?no.3所示序列。
19、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列包含如seq?id?no.2所示序列。
20、在一個優(yōu)選的實施例中，上述糖基轉(zhuǎn)移酶的氨基酸序列為如seq?id?no.3所示序列。
21、另一方面，本專利技術(shù)提供一種合成類黃酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列糖苷類化合物方法，所述方法包含如下步驟：
22、1)獲得包含如seq?id?no.4所示氨基酸序列的糖基轉(zhuǎn)移酶；
23、2)利用步驟1)中的糖基轉(zhuǎn)移酶在酶活反應(yīng)體系中催化合成類黃酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列糖苷類化合物。
24、在一個優(yōu)選的實施例中，通過原核表達(dá)獲得上述糖基轉(zhuǎn)移酶。
25、在一個優(yōu)選的實施例中，通過化學(xué)合成獲得上述糖基轉(zhuǎn)移酶。
26、在一個優(yōu)選的實施例中，酶活反應(yīng)體系中含有上述糖基轉(zhuǎn)移酶、udp-glc以及類黃酮化合物。
27、在一個優(yōu)選實施例中，酶活反應(yīng)體系中還含有二價陽離子。
28、在一個優(yōu)選實施例中，酶活反應(yīng)體系的反應(yīng)溫度為4-60℃。
29、在一個優(yōu)選實施例中，酶活反應(yīng)體系的ph為8.0-10.0。
30、在一個優(yōu)選實施例中，酶活反應(yīng)體系具體為10μg純化糖基轉(zhuǎn)移酶、5mm?mg2+、14mmβ-巰基乙醇、5mm?udp-glc、0.5mm類黃酮化合物，用50mm，ph＝9.0的tris-hcl緩沖液補(bǔ)充至200μl，于37℃反應(yīng)至少3h。
31、在一個優(yōu)選實施例中，酶活反應(yīng)體系為上述反應(yīng)體系的各組分含量的等比例擴(kuò)大或縮小，本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
1.一種糖基轉(zhuǎn)移酶基因，其序列為編碼包含如SEQ?ID?NO.4所示氨基酸序列的核苷酸序列，或與編碼包含如SEQ?ID?NO.4所示氨基酸序列的核苷酸序列全互補(bǔ)配對的序列。
2.一種糖基轉(zhuǎn)移酶，其氨基酸序列包含如SEQ?ID?NO.4所示序列。
3.一種糖基轉(zhuǎn)移酶基因在合成類黃酮-3,7,4′-三-O-葡萄糖苷系列糖苷類化合物中的應(yīng)用，所述糖基轉(zhuǎn)移酶基因的序列為編碼包含如SEQ?ID?NO.4所示氨基酸序列的核苷酸序列，或與編碼包含如SEQ?ID?NO.4所示氨基酸序列的核苷酸序列全互補(bǔ)配對的序列。
4.一種糖基轉(zhuǎn)移酶在合成類黃酮-3,7,4′-三-O-葡萄糖苷系列糖苷類化合物中的應(yīng)用，所述糖基轉(zhuǎn)移酶序列包含如SEQ?ID?NO.4所示序列。
5.一種合成類黃酮-3,7,4′-三-O-系列糖苷類化合物方法，所述方法包含如下步驟：
6.如權(quán)利要求5所述的一種合成類黃酮-3,7,4′-三-O-葡萄糖苷系列糖苷類化合物方法，其特征在于，步驟1)中通過原核表達(dá)獲得糖基轉(zhuǎn)移酶或通過化學(xué)合成獲得糖基轉(zhuǎn)移酶。
7.如權(quán)利要
8.如權(quán)利要求5所述的一種合成類黃酮-3,7,4′-三-O-糖苷系列糖苷類化合物方法，其特征在于，步驟2)中酶活反應(yīng)體系中還含有二價陽離子。
9.如權(quán)利要求5所述的一種合成類黃酮-3,7,4′-三-O-糖苷系列糖苷類化合物方法，其特征在于，步驟2)中酶活反應(yīng)體系的反應(yīng)溫度為4-60℃。
10.如權(quán)利要求5所述的一種合成類黃酮-3,7,4′-三-O-糖苷系列糖苷類化合物方法，其特征在于，步驟2)中酶活反應(yīng)體系的PH為8.0-10.0。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種糖基轉(zhuǎn)移酶基因，其序列為編碼包含如seq?id?no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列，或與編碼包含如seq?id?no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列全互補(bǔ)配對的序列。
2.一種糖基轉(zhuǎn)移酶，其氨基酸序列包含如seq?id?no.4所示序列。
3.一種糖基轉(zhuǎn)移酶基因在合成類黃酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列糖苷類化合物中的應(yīng)用，所述糖基轉(zhuǎn)移酶基因的序列為編碼包含如seq?id?no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列，或與編碼包含如seq?id?no.4所示氨基酸序列的核苷酸序列全互補(bǔ)配對的序列。
4.一種糖基轉(zhuǎn)移酶在合成類黃酮-3,7,4′-三-o-葡萄糖苷系列糖苷類化合物中的應(yīng)用，所述糖基轉(zhuǎn)移酶序列包含如seq?id?no.4所示序列。
5.一種合成類黃酮-3,7,4′-三-o-系列糖苷類化合物方法，所述方法包含如下步驟：
6.如權(quán)利要求5所...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：易善勇，王威，李國四，徐濤，韓邦興，姜雪萍，陸海波，
申請(專利權(quán))人：皖西學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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