【技術實現步驟摘要】
本申請涉及藥物檢測，尤其是涉及一種預制菜中60種藥物殘留的檢測方法。
技術介紹
1、近年來，高油高蛋白預制菜飛速發展，但由于進入門檻較低，規模較大的生產者較少，多以小作坊甚至家庭作坊的方式生產，很多生產者食品安全意識不足導致該行業成為職業打假者重點打假領域，職業打假熱點事件屢見不鮮，另外電商平臺銷售是眾多小型生產者的主要途徑，物流儲運保存條件乃至保質期均是高油高蛋白預制菜質量控制的關鍵，微生物污染、食品添加劑與非法添加物、藥物殘留均是該類食品最大的風險之一。目前高油高蛋白預制菜中微生物污染已經可以找到合適的檢測方法以及判定標準，部分添加劑也有適合的檢測方法，但藥物殘留目前并無合適的檢測方法，現有檢測方法均為適用于蔬菜水果基質或者肉類基質的農產品檢測方法，并無農產品經過加工后形成高油高蛋白預制菜肴基質的檢測方法。
2、目前尚無國家標準、地方標準、行業標準或團體標準規定食品中高油高蛋白預制菜種藥物殘留的檢測方法。高油高蛋白預制菜是南方最常見的高油高蛋白預制菜品種之一，該品種高油高蛋白預制菜具有脂肪含量高、蛋白質含量也高、鹽和含量高，糖的含量隨著不同品種可能也可以很高，調味料用量大，香辛料也可能大量存在的特點，對這類食品的藥物殘留檢測帶來了極大的干擾。
技術實現思路
1、本申請的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種高油高蛋白預制菜中60種藥物殘留的檢測方法；本申請的檢測方法用于控制高油高蛋白預制菜藥物殘留的質量，解決了脂肪、蛋白質、鹽、糖以及各種香辛料調味料的干擾，使
2、為實現上述目的，本申請采取的技術方案為：
3、本申請提供了一種預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，包括以下步驟：
4、s1、取預制菜粉碎勻漿后，經反復速凍和反復解凍，速凍過程去除凝固的脂肪，獲得解凍后的樣品；
5、s2、將解凍后的樣品經過0.1～1％甲酸乙腈溶液均質提取，然后進行鹽析離心，再經過凈化填料凈化，取上清液分析；
6、s3、利用液相色譜三重四級桿質譜法對上清液進行測定，采用外標法定量，保留時間和離子碎片豐度比定性；
7、所述凈化填料包括中性氧化鋁、十八烷基鍵合硅膠、n-丙基乙二胺和硫酸鎂。
8、本申請首先利用反復速凍和反復解凍的方式破壞細胞壁的方式提取出預制菜中的藥物，提取的冷凍過程同時去除食品中的大量脂肪，然后進行預凈化，可以極大地降低了預制菜食品中高脂肪、高蛋白、高鹽高糖、高香辛料的基質干擾。通過反復速凍和反復解凍的方式釋放提取出藥物后，得到的提取液可能具有高脂肪、高蛋白、高鹽高糖的特點，如果采用傳統的固相萃取法或者分散提取法，在超量的脂肪蛋白質等雜質下固相萃取小柱或分散提取劑很快飽和，因此本申請在凈化前增加了預處理措施，在速凍和解凍的過程中去除大部分脂，反復多次速凍解凍，即可去除絕大部分脂肪不再影響后續凈化；酸化后經分散萃取完成蛋白質的去除與樣品的凈化富集后檢測。
9、在本申請的技術方案中，還加入了特定組分的凈化填料，降低了部分油脂含量高的預制菜采用甲酸乙腈仍會溶解部分油脂的情況，提高了預制菜中藥物殘留的凈化效果，并且藥物的回收率較佳。
10、本申請還采用了0.1～1％甲酸乙腈溶液為提取溶劑時，可以提高藥物殘留的回收率。本申請為預制菜中藥物殘留檢測提供重要的檢測參考方法，可推廣應運用于日常預制菜中藥物成分殘留的監督檢測當中。
11、作為本申請所述預制菜中60種藥物殘留的檢測方法的優選實施方式，所述凈化填料中中性氧化鋁、十八烷基鍵合硅膠、n-丙基乙二胺和硫酸鎂的質量比為(5～10):(3～10):(3～10):10。
12、中性氧化鋁(aln)填料能有效去除樣品中的脂肪和芳香族干擾物，n-丙基乙二胺(psa)對于糖和色素的去除以及脂肪的去除有一定作用，十八烷基鍵合硅膠(c18)的作用是脫鹽和去除非極性物質的油脂、色素以及脫鹽，硫酸鎂(mgso4)用于脫水。
13、本申請的凈化填料采用上述質量比的組分搭配使用，提高了預制菜中60種藥物殘留的凈化效果，且藥物的回收率也較佳。
14、作為本申請所述預制菜中60種藥物殘留的檢測方法的優選實施方式，所述凈化填料中中性氧化鋁、十八烷基鍵合硅膠、n-丙基乙二胺和硫酸鎂的質量比為(5～10):(3～5):(3～5):10，優選質量比為5:3:3:10。
15、通過比對實驗，說明在0.8％甲酸水乙腈的提取溶劑下，以凈化填料中中性氧化鋁、十八烷基鍵合硅膠、n-丙基乙二胺和硫酸鎂的質量比為5:3:3:10作為分散萃取凈化填料，對于預制菜中60種藥物殘留的凈化效果和回收率最佳。其中，氮化鋁aln可以除去油脂，因此對于油脂含量較大的樣品可適當增加aln的用量，最終找出了高油高脂型預制菜藥物殘留檢測的最優凈化填料。
16、作為本申請所述預制菜中60種藥物殘留的檢測方法的優選實施方式，所述步驟s2中，將解凍后的樣品經過0.5～1％甲酸乙腈溶液提取。
17、采用上述濃度的甲酸乙腈溶液，可以提高藥物殘留的回收率。當用0.8％甲酸乙腈作為提取溶劑時，有43種藥物殘留的回收率在60％-100％。
18、作為本申請所述預制菜中60種藥物殘留的檢測方法的優選實施方式，所述步驟s1中，所述反復速凍和反復解凍的步驟為：
19、將粉碎勻漿后的預制菜置于≤-18℃速凍1h，然后50℃±2℃水浴鍋解凍20min。
20、作為本申請所述預制菜中60種藥物殘留的檢測方法的優選實施方式，所述步驟s1中，所述反復速凍和反復解凍的次數為2～3次。
21、生物體中，藥物一般跟生物的細胞組織深度結合，預制菜中的藥物殘留更是增加了各種調料以及加工產物的影響，將藥物從預制菜細胞組織中釋放出來是一項比較復雜的工作，目前并無預制菜藥物殘留的標準檢測方法，農產品常用的釋放方法包括高速勻漿破碎細胞組織釋放、超聲破碎細胞組織釋放、使用高氯酸等強氧化性試劑破壞細胞組織釋放，其中高速勻漿方法和超聲破碎的方法對于細胞壁的破壞效率不高，一般僅適用于游離態的藥物，對于跟細胞組織結合的結合態藥物回收率不夠。使用高氯酸等氧化性試劑釋放的方法副產物很多，干擾嚴重，單一藥物分析還可以想辦法避免，但對于多種農藥獸藥同時分析的方法來說，極難避免干擾。本申請采用反復速凍和反復快速解凍2～3次的方式破壞細胞壁釋放藥物，破壞方式為物理方式，幾乎沒有因為副反應而帶來的雜質與干擾，經過實驗，2次就能讓食物中殘留的藥物較為充分地釋放，3次則幾乎讓藥物全部釋放。
22、作為本申請所述預制菜中60種藥物殘留的檢測方法的優選實施方式，所述步驟s2中，均質提取的速度為≥12000r/min，提取的時間為1min；所述鹽析離心的速度為8000r/min，離心的時間為5min。
23、作為本申請所述預制菜中60種藥物殘留的檢測方法的優選實施方式，所述液相色譜三重四級桿質譜法的色譜檢測條件為：色譜柱采用的be本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述凈化填料中性氧化鋁、十八烷基鍵合硅膠、N-丙基乙二胺和硫酸鎂的質量比為(5～10):(3～10):(3～10):10。
3.如權利要求2所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述凈化填料中性氧化鋁、十八烷基鍵合硅膠、N-丙基乙二胺和硫酸鎂的質量比為(5～10):(3～5):(3～5):10，優選質量比為5:3:3:10。
4.如權利要求1所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中，將解凍后的樣品經過0.5～1％甲酸乙腈溶液提取。
5.如權利要求1所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述步驟S1中，所述反復速凍和反復解凍的步驟為：
6.如權利要求5所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述步驟S1中，所述反復速凍和反復解凍的次數為2～3次。
7.如權利要求1所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在
8.如權利要求1所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述液相色譜三重四級桿質譜法的色譜檢測條件為：色譜柱采用的BEH?C18色譜柱，所述色譜柱的規格為1.8μm，2.1×100mm；采用梯度洗脫程序進行洗脫，采用體積比為(20～85):(15～80)的5mmol/L乙酸銨含0.1％(v/v)甲酸水和乙腈組成的混合液做流動相，流速為0.35mL/min。
9.如權利要求8所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述梯度洗脫程序具體為：
10.如權利要求1所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述液相色譜三重四級桿質譜法的質譜檢測條件為：
...【技術特征摘要】
1.一種預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述凈化填料中性氧化鋁、十八烷基鍵合硅膠、n-丙基乙二胺和硫酸鎂的質量比為(5～10):(3～10):(3～10):10。
3.如權利要求2所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述凈化填料中性氧化鋁、十八烷基鍵合硅膠、n-丙基乙二胺和硫酸鎂的質量比為(5～10):(3～5):(3～5):10，優選質量比為5:3:3:10。
4.如權利要求1所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述步驟s2中，將解凍后的樣品經過0.5～1％甲酸乙腈溶液提取。
5.如權利要求1所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述步驟s1中，所述反復速凍和反復解凍的步驟為：
6.如權利要求5所述的預制菜中60種藥物殘留的檢測方法，其特征在于，所述步驟s1中，所述...
【專利技術屬性】
技術研發人員：何曉峰，林緒，魯長海，劉江凌，陳瓊華，
申請(專利權)人：廣電計量檢測集團股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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