具有修復皮膚光老化功能的間充質干細胞及其制備方法和應用技術

本發明專利技術公開了一種具有修復皮膚光老化功能的間充質干細胞及其制備方法和應用，制備方法包括：獲取組織，然后分離原代干細胞，對原代干細胞進行貼壁培養至融合度為80％以上后，采用胰蛋白酶消化貼壁細胞，然后用細胞培養基終止后，制得間充質干細胞，并將上清液進行加酸和分子篩處理后得到處理后的上清液。本發明專利技術制備的間充質干細胞及其處理后的培養上清液可通過組織修復與再生能力和旁分泌生長因子與抗炎因子對紫外損傷后的成纖維細胞和M0巨噬細胞起到抗炎修復的作用，加快紫外光老化皮膚的修復過程，促進皮膚修復。促進皮膚修復。

【技術實現步驟摘要】
具有修復皮膚光老化功能的間充質干細胞及其制備方法和應用


[0001]本專利技術涉及細胞生物學
，具體涉及一種具有修復皮膚光老化功能的間充質干細胞及其制備方法和應用。

技術介紹

[0002]皮膚老化是指皮膚功能衰老性損傷，使皮膚對機體的防護能力，調節能力等減退，由此皮膚不能適應內外環境的變化，出現顏色、色澤、形態、質感等外觀整體狀況的改變。皮膚衰老機理可分為內源性衰老和外源性衰老，而皮膚的衰老過程是二者共同作用的結果。紫外線輻照、惡劣的環境等外源因素通過促進內源性因素的影響而加速了衰老的進程；內源性老化是遺傳因素控制和自由基對細胞的損傷等共同作用形成，皮膚隨年齡增長的自然老化，表現為皮膚薄，出現細小皺紋、彈性下降、皮膚松弛等；外源性老化的最主要原因是日曬所致的光老化，表現為皺紋、皮膚松弛、粗糙、淡黃或灰黃色的皮膚變色、毛細血管擴張、色素斑形成等。例如皺紋形成的機理主要包括：(1)角質層功能低下，水分量低下；(2)表皮劣質化，表皮細胞的增殖活性衰退；(3)真皮膠原蛋白纖維的減少、膠原蛋白纖維束構造紊亂以及紫外線引起的MMP活化或增多，導致膠原蛋白的分解和斷裂；(4)彈性蛋白變性，紫外線照射使彈性蛋白酶活化，彈性纖維斷裂、流失；(5)透明質酸減少；(6)基底膜損傷，長時間紫外線照射使表皮基底細胞中會產生明膠酶(MMP
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9)，破壞基底膜；(7)表皮乙酰肝素酶活化變高，可顯著分解乙酰肝素，會導致被硫酸乙酰肝素所控制的增殖因子的制御混亂，引起表皮、真皮以及血管、淋巴管的損傷，促進皺紋等光老化的產生；(8)血管新生，紫外線導致表皮中凝血酶敏感蛋白和血管內增殖因子的平衡紊亂，誘導血管新生，接著彈性蛋白酶以及生成MMP的中性白血球浸潤到皮膚組織中，使彈性蛋白酶和膠原蛋白分解、變性產生皺紋；(9)淋巴管回收功能低下，紫外線使淋巴管活化因子(VEGFC)減少，作為炎癥細胞的巨噬細胞的回收遲緩，停留在真皮內，結果促進由巨噬細胞中的MMP
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12(彈性蛋白酶)引起的彈性蛋白的分解，皺紋生成；(10)活性氧、自由基生成，引起細胞膜等的過氧化脂質以及由膠原蛋白纖維和彈性纖維的關聯等造成的蛋白變性、活性氧去除酶群的不活化、DNA損傷和MMP
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1,3,9活化，導致真皮構造變性，細胞功能低下，皺紋生成。
[0003]干細胞在組織修復方面也發揮一定的作用，但是現有培養的干細胞在組織修復方面的作用比較單一，不能從多方面來修復組織如不能很好的修復皮膚光老化問題，因此，提供一種能從多角度修復皮膚光老化的干細胞及制備方法是非常有意義的。

技術實現思路

[0004]為了解決現有技術存在的上述不足，本專利技術的目的是提供一種具有修復皮膚光老化功能的間充質干細胞及其制備方法和應用，以解決現有技術中干細胞修復組織功能單一的問題。
[0005]本專利技術解決上述技術問題的技術方案如下：提供一種具有修復皮膚光老化功能的
間充質干細胞的制備方法，包括：
[0006]獲取組織，然后分離原代干細胞，對原代干細胞進行貼壁培養至融合度為80％以上后，采用胰蛋白酶消化貼壁細胞，然后用細胞培養基終止后，制得具有修復皮膚光老化功能的間充質干細胞。
[0007]本專利技術的有益效果為：本專利技術制備的間充質干細胞可通過組織修復與再生能力和旁分泌生長因子與抗炎因子對紫外損傷后的成纖維細胞和M0巨噬細胞起到抗炎修復的作用，加快紫外光老化皮膚的修復過程，促進皮膚修復。
[0008]在上述技術方案的基礎上，本專利技術還可以做如下改進：
[0009]進一步，上述制備過程還包括：收集培養至融合度為80％以上的細胞培養上清，加酸溶液調整培養上清的pH值至4.5～5.5，然后于4～37℃溫育2～48h后離心，最后將離心后的上清液通過0.5～5.0nm的分子篩，制得處理后的間充質干細胞培養上清液。
[0010]采用上述進一步技術方案的有益效果為：本專利技術還通過特定的處理方式對間充質干細胞培養上清液進行處理，處理后所得的間充質干細胞培養上清液能夠有效促進紫外光損傷細胞的增殖和活力，促進TGF
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β的表達與分泌，抑制MMPs的表達和分泌，從而有助于紫外光損傷細胞的正常修復，即從多角度來促進組織修復。
[0011]進一步，所添加的酸為乙酸、檸檬酸、鹽酸和磷酸中的至少一種，其濃度為1.5～4mol/L。
[0012]進一步，酸的濃度為1.5～4mol/L。
[0013]進一步，加酸溶液調整培養上清的pH值至5。
[0014]進一步，于37℃溫育24h后離心，最后將離心后的上清液通過2.5nm的分子篩。
[0015]上述制得的間充質干細胞或處理后的間充質干細胞培養上清液在制備修復或抑制皮膚光老化制劑中的應用。
[0016]進一步地，皮膚光老化是經紫外光損傷后的皮膚。
[0017]一種修復皮膚光老化的制劑，包括上述制得的間充質干細胞或處理后的間充質干細胞培養上清液。
[0018]一種抑制皮膚光老化的制劑，包括上述制得的間充質干細胞或處理后的間充質干細胞培養上清液。
[0019]本專利技術具有以下有益效果：
[0020]本專利技術制備的MSCs及其培養上清液可通過組織修復與再生能力和旁分泌生長因子與抗炎因子對紫外損傷后的成纖維細胞和M0巨噬細胞起到抗炎修復的作用，加快紫外光老化皮膚的修復過程，促進皮膚修復。通過增加細胞活力，促進TGF
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β的表達與分泌，抑制MMPs的表達和分泌，抑制膠原蛋白和彈性蛋白的降解，調控炎性機制表達，降低炎癥反應，在促進成纖維細胞組織修復的同時抑制炎癥反應，可加快促進皮膚光老化組織修復，可作為從細胞水平治療皮膚光老化從而抑制衰老過程的一種治療手段。
附圖說明
[0021]圖1為實施例1中MSCs細胞七天生長曲線圖。
[0022]圖2為實施例2中MSCs細胞培養上清液對UVA
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HFF細胞增殖影響結果。
[0023]圖3為實施例2中MSCs細胞培養上清液對UVA
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HFF分泌細胞因子的影響結果。
[0024]圖4為實施例3中MSCs細胞對UVA
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HFF細胞因子TGF
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β分泌的影響結果。
[0025]圖5為實施例3中MSCs細胞對UVA
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HFF細胞因子MMP
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1分泌的影響結果。
[0026]圖6為實施例3中UVA損傷HFF細胞模型組的基因表達結果。
[0027]圖7為實施例3中MSCs細胞對UVA
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HFF細胞TGF
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β和MMP
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3基因表達的影響結果。
[0028]圖8為實施例4中UVA損傷M0巨噬細胞模型組基因表達結果。
[0029]圖9為實施例4中MSCs細胞對UVA
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M0細胞基因表達的影響結果。
具體實施方式
[00本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種具有修復皮膚光老化功能的間充質干細胞的制備方法，其特征在于，包括：獲取組織，然后分離原代干細胞，對原代干細胞進行貼壁培養至融合度為80％以上后，采用胰蛋白酶消化貼壁細胞，然后用細胞培養基終止后，制得具有修復皮膚光老化功能的間充質干細胞。2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，還包括：收集培養至融合度為80％以上的細胞培養上清，加酸溶液調整培養上清的pH值至4.5～5.5，然后于4～37℃溫育2～48h后離心，最后將離心后的上清液通過0.5～5.0nm的分子篩，制得處理后的間充質干細胞培養上清液。3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所添加的酸為乙酸、檸檬酸、鹽酸和磷酸中的至少一種。4.根據權利要求2或3所述的制備方法，其特征在于，酸的濃度為1...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王潔，
申請(專利權)人：成都清科生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：