一種靶向TSHR蛋白的核酸適體、核酸適體衍生物及其應用制造技術

本發明專利技術提供了一種靶向TSHR蛋白的核酸適體、核酸衍生物及其應用，屬于分子生物學技術領域。本發明專利技術中靶向TSHR蛋白的核酸適體包含如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，在所述的靶向TSHR蛋白的核酸適體的兩端或一端進行放射性標記、治療性藥物連接、熒光標記或生物素標記在內的一種或多種修飾，得到靶向TSHR蛋白的核酸適體及其衍生物。本發明專利技術中的核酸適體及其衍生物能夠識別靶向表達促甲狀腺素受體細胞，親和力高、穩定性強、成本低，具有體內外成像標記功能等優點，為甲狀腺疾病與甲狀腺相關性眼病的診斷和治療提供新的分子工具。的診斷和治療提供新的分子工具。的診斷和治療提供新的分子工具。

【技術實現步驟摘要】
一種靶向TSHR蛋白的核酸適體、核酸適體衍生物及其應用


[0001]本專利技術涉及分子生物學
，尤其涉及一種靶向TSHR蛋白的核酸適體、核酸適體衍生物及其應用。

技術介紹

[0002]促甲狀腺素受體作為促甲狀腺激素(TSH)的受體，在控制甲狀腺細胞代謝中起核心作用。這種受體的活性由G蛋白介導激活腺苷酸環化酶。格雷夫斯病(GD)是一種常見的全身性自身免疫性疾病。我們現在稱為GD的綜合征，自從在19世紀早期的醫學文獻中首次被描述以來，甲狀腺的增大和過度活動與眼睛周圍結締組織的炎癥和膨脹之間的奇怪聯系一直困擾著醫學界。直到Adams和Purves發現長效甲狀腺刺激劑，并證明其刺激甲狀腺中的腺苷酸環化酶活性，才首次認識到TSHR和GD之間的關系。這些抗體現在被稱為促甲狀腺素免疫球蛋白(TSI)。其中對TSHR的免疫耐受性通過尚未確定的機制喪失。這種將TSHR誤認為“非我”的結果是產生了針對甲狀腺上皮細胞上促甲狀腺素受體的促甲狀腺素免疫球蛋白。促甲狀腺素免疫球蛋白直接參與了Graves病的發病機制和甲狀腺功能亢進，與TSHR的相互作用導致不受控制的受體刺激。GD的臨床標志是甲狀腺的異常生長和過度活動，導致病理性的甲狀腺激素水平高。這些增強了目標組織中的氧氣消耗和新陳代謝。除了對甲狀腺的影響之外，大約20％的真正的GD患者會出現該疾病的眼部表現，稱為甲狀腺相關眼病(TAO)。TAO代表了一個結締組織激活和重塑的過程，這可能導致毀容和失明。在這一過程中，TSI通過甲狀腺周圍組織中局部表達的TSHR發揮作用，與發生在眼眶內的炎癥和擴張有關。已經在眼眶脂肪、眼外肌和眼眶成纖維細胞中檢測到功能性TSHR。因此，有強有力的證據支持TSHR和TSI在GD的甲狀腺過度活動和眼眶病理學中的作用。另外，已有廣泛報道TSHR的缺陷也是甲狀腺腫瘤(乳頭狀癌和濾泡癌)的一個原因。(Terry Smith(2017):TSHR as a therapeutic target in Graves
’
disease,Expert Opinion on Therapeutic Targets,DOI:10.1080/14728222.2017.1288215)
[0003]目前現有靶向促甲狀腺素受體抗體5C9抗體K1
–
70，但具有生產成本高，周期長，批次穩定性差，免疫原性，價格昂貴的劣勢；(TurcuAF,Kumar S,Neumann S,et al.A small molecule antagonist inhibits thyrotropin receptor antibody
?
induced orbital fibroblast functions involved in the pathogenesis of Graves ophthalmopathy.J Clin Endocrinol Metab.2013；98(5):2153
?
2159.doi:10.1210/jc.2013
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1149)小分子化合物NCGC00229600(ANTAG2)/NCGC00242364(ANTAG3)/SMAS37a/b，但親和力低(微摩爾)，半衰期短(＜3h)，生物利用率低(50％)的劣勢。(Marcinkowski P,HoyerI,Specker E,et al.A New Highly Thyrotropin Receptor
?
Selective Small
?
Molecule Antagonist with Potential for the Treatment of Graves'Orbitopathy.Thyroid.2019；29(1):111
?
123.doi:10.1089/thy.2018.0349)。
[0004]核酸適體具有體積小、特異性強、穩定性高、免疫原性低、易于修飾、構建靶向遞送等優點，具有作為靶向識別、標記蛋白的潛力。核酸適體是具有20
?
100個核苷酸長度的單鏈
DNA或RNA，通過指數富集(SELEX)方法對配體進行系統進化篩選得到，可以形成三維結構特異地結合到目標分子上。核酸適體最顯著的特征如下：1)首先，適體介導的分子識別具有很高的特異性，可以用于區分細微的分子差異。對這一概念的證明是使用適體來區分三種不同但密切相關且形態相似的急性髓系白血病(AML)細胞。這種準確區分分子特征的能力，有助于闡明發病機制相關的分子基礎。2)Cell
?
SELEX是為了能夠模擬真實環境中的活細胞而開發的，它能夠為任何感興趣的細胞生成適體，而不需要依賴其先前的分子特征知識。因此，Cell
?
SELEX可用于發現以前未知的生物標志物，或其在發病機制中尚未被認識的特征；3)核酸適體易于修飾，可增強其體內穩定性；同時能偶聯其他藥物、分子或納米顆粒，與細胞膜上的受體結合后，能介導自身或偶聯顆粒進入細胞，可作為藥物遞送的理想靶向分子工具。但目前還沒有促甲狀腺素受體特異性核酸適體的報道。

技術實現思路

[0005]本專利技術的目的在于提供一種靶向TSHR蛋白的核酸適體、核酸適體衍生物及其應用。
[0006]為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
[0007]本專利技術提供了靶向TSHR蛋白的核酸適體YC2，其特征在于，包含如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。
[0008]優選的，所述靶向TSHR蛋白的核酸適體YC2在22
?
27℃，0.5
?
2.0mM Na
+
，0.1
?
1.0mM Mg
2+
條件下具有莖環結構，如圖1所示。
[0009]作為優選，在所述核酸適體YC2的基礎上增加、刪減或者替換堿基，獲得具有相同功能的核酸適體。
[0010]作為優選，所述TSHR蛋白屬于人源性。
[0011]本專利技術還提供了一種靶向TSHR蛋白的核酸適體YC2衍生物。
[0012]作為優選，所述核酸適體衍生物是在所述的靶向TSHR蛋白的核酸適體YC2的兩端或一端進行放射性標記、治療性藥物連接、熒光標記或生物素標記在內的一種或多種修飾。
[0013]本專利技術還提供了所述靶向TSHR蛋白的核酸適體YC2和所述靶向TSHR蛋白的核酸適體YC2衍生物在以下任一方面中的應用：
[0014](1)制備TSHR蛋白檢測試劑；
[0015](2)制備TSHR靶向載體試劑；
[0016](3)相對高表達TSHR細胞和相對低表達TSHR細胞之間的差異化研究；
[0017](4)TSHR蛋白活體標記研究；
[0018](5)制備甲狀腺相關疾病靶向載藥制劑。
[0019]通過采用上述技術方案，本專利技術具有如下有益效果：本專利技術提供了一種靶向TSHR蛋白的核酸適體，通過對所述靶向TSHR蛋白本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種靶向TSHR蛋白的核酸適體YC2，其特征在于，包含如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。2.根據權利要求1所述的靶向TSHR蛋白的核酸適體YC2，其特征在于，所述靶向TSHR蛋白的核酸適體在22
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27℃，0.5
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2.0mM Na
+
，0.1
?
1.0mM Mg
2+
條件下具有莖環結構。3.根據權利要求1所述的靶向TSHR蛋白的核酸適體YC2，其特征在于，在所述核酸適體的基礎上增加、刪減或者替換堿基，獲得具有相同功能的核酸適體。4.根據權利要求1所述的靶向TSHR蛋白的核酸...

【專利技術屬性】
技術研發人員：吳文燦，葉茂，吳恩德，張嫣宸，
申請(專利權)人：溫州醫科大學附屬眼視光醫院，
類型：發明
國別省市：