一種膽紅素中間體膽綠素的提純方法技術

本發明專利技術提供了一種膽紅素中間體膽綠素的提純方法，所述提純方法包括如下步驟：洗柱：將吸附樹脂灌裝至樹脂柱中，用甲醇沖洗吸附樹脂，以除去碎粒和其它雜質；過柱：用甲醇或水溶解膽綠素鈣鹽，再用離心或布袋粗濾，進行微濾精濾，收集濾液；將濾液從樹脂柱上部緩慢進液至樹脂柱中，直至出液有膽綠素泄露，停止進料；用去離子水或低濃度甲醇反向洗滌，漂洗去吸附過程析出的雜質；再用甲醇清洗樹脂，直至無油脂及雜質出現；洗脫：再用甲醇正向進入樹脂柱進行洗脫，直至無膽綠素出來。相比現有技術，本發明專利技術的有益效果是解決了現實中篩選出的樹脂不能有效地收集膽綠素，而本發明專利技術可以有效去除多余雜質，提高膽綠素收率，操作方便，適用工業化生產。化生產。

【技術實現步驟摘要】
一種膽紅素中間體膽綠素的提純方法


[0001]本專利技術屬于一種膽紅素中間體膽綠素的提純領域，具體涉及一種采用樹脂法提取膽綠素的方法。

技術介紹

[0002]膽紅素具有抗氧化功能，生理活性廣泛，是體外培養牛黃的主要原料之一。通過膽綠素轉變為膽紅素，是制備膽紅素的途徑之一。但因為膽中的油脂難于分離，尤其是雞膽，傳統溶劑法、樹脂法均無法有效分離油脂，且分離過程復雜，所用溶劑品種多，回收困難，成本高，至今未實現工業化生產，本專利技術一改傳統分離方法，通過樹脂法提取膽綠素，且可實現工業化生產。

技術實現思路

[0003]本專利技術的目的是提供一種可以工業化生產的膽綠素的提純方法，同時解決現有工藝還沒有篩選出合適樹脂來提純膽綠素的技術問題。
[0004]為了實現上述目的，本專利技術提供了一種膽紅素中間體膽綠素的提純方法，所述提純方法包括如下步驟：(1)洗柱：將D329吸附樹脂灌裝至樹脂柱中，用甲醇沖洗該D329吸附樹脂，以除去碎粒和其它雜質，直至出口甲醇清澈，再用甲醇蓋住樹脂柱中樹脂，以排出空氣備用；(2)過柱：用甲醇或水溶解膽綠素鈣鹽，再用離心或布袋粗濾，進行微濾精濾，收集濾液；將濾液從樹脂柱上部緩慢進液至樹脂柱中，直至出液有膽綠素泄露，停止進料，排空樹脂柱中未吸附殘液；然后，用去離子水或25～50V/V％甲醇溶液反向洗滌，漂洗去吸附過程析出的雜質；再用甲醇清洗樹脂，直至無油脂及雜質出現；(3)洗脫：再用甲醇正向進入樹脂柱進行洗脫，直至無膽綠素出來，洗脫完畢。
[0005]在本專利技術的提純方法的優選技術方案中，優選地，步驟(1)中，所述樹脂柱為￠100X1000MM玻璃交換柱。
[0006]在本專利技術的提純方法的優選技術方案中，優選地，步驟(1)中，所述樹脂柱的柱徑比5
?
25:1。
[0007]在本專利技術的提純方法的優選技術方案中，優選地，步驟(1)中，用99V/V％甲醇溶液反向以2BV速率沖洗該D329吸附樹脂。
[0008]在本專利技術的提純方法的優選技術方案中，優選地，步驟(2)中，用30
?
60V/V％甲醇溶液溶解膽綠素鈣鹽，再用離心粗濾或布袋粗濾，進行0.2
?
0.5MF微濾精濾，收集濾液。
[0009]在本專利技術的提純方法的優選技術方案中，優選地，步驟(2)中，甲醇溶解膽綠素鈣鹽時，膽綠素鈣鹽與甲醇的重量體積比為1:15～25
[0010]在本專利技術的提純方法的優選技術方案中，優選地，步驟(2)中，將濾液從樹脂柱上部緩慢以1
?
5BV速度進液至樹脂柱中。
[0011]在本專利技術的提純方法的優選技術方案中，優選地，步驟(2)中，在用去離子水或低濃度甲醇反向洗滌，漂洗去吸附過程析出的雜質后，再用50
?
60V/V％甲醇溶液清洗樹脂，其
中，消耗甲醇量為樹脂3
?
6倍柱體積，直至無油脂及雜質出現。
[0012]在本專利技術的提純方法的優選技術方案中，優選地，步驟(3)中，再用95
?
98V/V％甲醇溶液正向以1
?
5BV速度進入樹脂柱進行洗脫，直至無膽綠素出來，洗脫完畢；其中：采用30g/L NaOH將甲醇溶液的pH值調整為9
?
10，消耗甲醇量為樹脂3
?
6倍柱體積。
[0013]洗脫后還包括吸附柱清洗，所述吸附柱清洗步驟包括：用1.008～1.018g/LHCl和20g/LNaCl水溶液清洗至無色，或用1.008～1.018g/LHCl和10g/L NaCl甲醇溶液處理，完畢后，用去離子水或甲醇沖至中性備用。
[0014]相比現有技術，本專利技術的有益效果是：1)成功將膽綠素鈣鹽分離成膽綠素和雜質，攻克行業內無法提取膽綠素的難題；2)用樹脂代替溶劑，簡化分離的步驟，降低成本，提高收率；3)使用交換柱一次性分離出膽綠素鈣鹽中的雜質，尤其是油脂。因此，本專利技術的方法解決了現實中篩選出的樹脂不能有效地收集膽綠素，而本專利技術可以有效去除多余雜質，提高膽綠素收率，操作方便，適用工業化生產。
具體實施方式
[0015]本專利技術實施例中所使用的甲醇、HCl、NaCl等常規試劑均為市售產品；儀器：￠100X1000MM玻璃交換柱：購自如皋玻璃儀器廠；蠕動泵：購自天津蘭格鋼管制造有限公司，天津蘭格BT100
?
2J；
[0016]D329吸附樹脂購自長春漢諾科技有限公司。
[0017]膽綠素鈣鹽的制備：將雞鴨膽破皮后，經離心分離出膽汁，將膽汁在攪拌狀態下加熱至70～80℃，靜置30～40min后，用分液漏斗分離掉上層油脂；分離后的膽汁，按重量比的3％～8％加入Ca(OH)2溶液(該溶液用水調成糊狀即可)，攪拌30～60min，過濾出的固體即為膽綠素鈣鹽。
[0018]實施例1
[0019]將D329吸附樹脂800mL裝到￠100X1000MM玻璃交換柱中，用99％甲醇反向以2BV速率沖洗樹脂中碎粒和其它雜質，直至出口甲醇清澈，樹脂柱中無氣泡，完畢，保持甲醇完全覆蓋柱中樹脂，停止沖洗，準備進料。
[0020]將(600g)取自雞膽的膽綠素鈣鹽，用40％濃度甲醇10000mL溶解，采用離心粗濾，0.3MF微濾。收集濾液，將濾液從樹脂柱上部緩慢以3BV速度進液至樹脂柱中，直至出液有膽綠素流出，停止進料，排空樹脂柱中未吸附殘液，檢測吸附量為：膽綠素鈣鹽消耗505g然后，用5000mL去離子水反向洗滌，漂洗去吸附過程析出的雜質，再用55％甲醇清洗樹脂，直至無油脂及雜質出現。消耗甲醇量為樹脂5倍體積。
[0021]洗脫：配制96％甲醇，pH值調整為9.5，正向以5BV速度進柱洗脫，直至無膽綠素出來，洗脫完畢。消耗甲醇量為：6倍體積。
[0022]實施例2
[0023]將D329吸附樹脂800mL裝到￠100X1000MM玻璃交換柱中，用99％甲醇反向以2BV速率沖洗樹脂中碎粒和其它雜質，直至出口甲醇清澈，樹脂柱中無氣泡，完畢，保持甲醇完全覆蓋柱中樹脂，停止沖洗，準備進料。
[0024]將(600g)膽綠素鈣鹽用(9000mL)30％濃度甲醇溶解，采用布袋粗濾，0.2MF微濾。收集濾液，將濾液從樹脂柱上部緩慢以3BV速度進液至樹脂柱中，直至出液有膽綠素泄露，
停止進料，排空樹脂柱中未吸附殘液，檢測吸附量為：膽綠素鈣鹽消耗510g,用5000mL去離子水反向沖洗漂洗去吸附過程中析出機械雜質。
[0025]然后，用低濃度甲醇50％反向洗滌，直至無油脂和雜質析出，消耗甲醇量為樹脂體積5倍。
[0026]洗脫：配制95％甲醇，pH值調整為9，正向以3BV速度進柱洗脫，直至無膽綠素出來，洗脫完畢。
[0027]實施例3
[0028]將D329吸附樹脂800mL裝到￠100X1000MM玻璃交換柱中，用99％甲醇反向以2BV速率沖洗樹脂中碎粒和其它雜質，直至出口甲醇清澈，樹脂柱中無氣泡，完畢，保持甲醇完本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種膽紅素中間體膽綠素的提純方法，所述提純方法包括如下步驟：(1)洗柱：將D329吸附樹脂灌裝至樹脂柱中，用甲醇沖洗該D329吸附樹脂，以除去碎粒和其它雜質，直至出口甲醇清澈，再用甲醇蓋住樹脂柱中樹脂，以排出空氣備用；(2)過柱：用甲醇或水溶解膽綠素鈣鹽，再用離心或布袋粗濾，進行微濾精濾，收集濾液；將濾液從樹脂柱上部緩慢進液至樹脂柱中，直至出液有膽綠素泄露，停止進料，排空樹脂柱中未吸附殘液；然后，用去離子水或25～50V/V％甲醇溶液反向洗滌，漂洗去吸附過程析出的雜質；再用甲醇清洗樹脂，直至無油脂及雜質出現；(3)洗脫：再用甲醇正向進入樹脂柱進行洗脫，直至無膽綠素出來，洗脫完畢。2.根據權利要求1所述的提純方法，其特征在于，步驟(1)中，所述樹脂柱為￠100X1000MM玻璃交換柱。3.根據權利要求2所述的提純方法，其特征在于，步驟(1)中，所述樹脂柱的柱徑比5
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25:1。4.根據權利要求1所述的提純方法，其特征在于，步驟(1)中，用99V/V％甲醇溶液反向以2BV速率沖洗該D329吸附樹脂。5.根據權利要求1所述的提純方法，其特征在于，步驟(2)中，用30
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60V/V％甲醇溶液溶解膽綠素鈣鹽，再用離心粗濾或布袋粗濾，進行0.2
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0.5MF微濾精濾，收集濾液。6.根據權利要求5所述的提純方法，其特征在...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳靜，朱蘭芳，劉成年，
申請(專利權)人：陳靜，
類型：發明
國別省市：