7,8-二羥基黃酮作為鐵穩態擾動劑在制備多粘菌素增效劑中的應用制造技術

本發明專利技術屬于生物技術領域，公開了7,8

【技術實現步驟摘要】
7,8
?
二羥基黃酮作為鐵穩態擾動劑在制備多粘菌素增效劑中的應用


[0001]本專利技術屬于醫學生物
，更具體地，涉及7,8
?
二羥基黃酮作為鐵穩態擾動劑在制備多粘菌素增效劑中的應用。

技術介紹

[0002]沙門菌是一種革蘭氏陰性細菌，人或養殖動物食用了被沙門菌污染的食物后，會導致食源性疾病，可引起從局部胃腸炎到全身性疾病。沙門菌的耐藥性問題已對全球公共衛生構成威脅，隨著臨床檢測中沙門菌耐藥率升高，以及新型抗生素的供應有限，多粘菌素已作為抗生素治療多重耐藥沙門菌的最后一道防線。
[0003]從上世紀50年代開始，多粘菌素已被用作抗生素對抗人類和獸醫環境中革蘭氏陰性細菌導致的臨床感染。然而，由于多粘菌素使用容易有臨床毒性，使其在上世紀80年代使用率顯著減少。但隨著耐藥菌的危害加劇，多粘菌素又重新被使用，并作為治療多重耐藥菌的最后治療手段。從2016年，質粒介導的可移動多粘菌素抗性基因(mcr
?
1)被報道后，多粘菌素耐藥性是世界范圍內新出現的公共衛生威脅。多粘菌素已在我國獸醫領域停用，并有效減少耐多粘菌素大腸桿菌的檢出率。但是在臨床治療，多粘菌素還是十分重要的抗生素藥物。基于腸桿菌科細菌的多粘菌素耐藥性問題相當重要和突出，因此篩選有效的多粘菌素增效劑來治療耐藥多粘菌素的腸桿菌科感染成了當務之急。從天然化合物庫中提取與多粘菌素具有協同作用的天然化合物，可以有效的恢復耐多粘菌素腸桿菌科細菌對多粘菌黏的敏感性，這也是有效挖掘抗生素替代方法和解決細菌耐藥性問題的策略之一。

技術實現思路

[0004]本專利技術所要解決的技術問題是克服現有技術中存在的上述問題，首先提供7,8
?
二羥基黃酮作為沙門菌鐵穩態擾動劑的應用。
[0005]本專利技術的第二個目的是提供7,8
?
二羥基黃酮在制備耐多粘菌素沙門菌的增效劑中的應用。
[0006]本專利技術的目的通過以下技術方案實現：
[0007]7,8
?
二羥基黃酮作為沙門菌鐵穩態擾動劑的應用。
[0008]本專利技術所述鐵穩態擾動劑7,8
?
二羥基黃酮，CAS登錄號為38183
?
03
?
8，分子式為C
15
H
10
O4，分子質量254.24。
[0009]結構式：
[0010][0011]7,8
?
二羥基黃酮是腦源性神經營養因子的模擬物，主要作為抗抑郁藥、創傷性腦損傷恢復以及預防認知能力下降和神經退行性疾病。目前，國內外未見7,8
?
二羥基黃酮通過擾亂沙門菌胞內鐵穩態來增強沙門菌對多粘菌素敏感性的報道。
[0012]本專利技術以沙門菌胞內鐵穩態作為多粘菌素增效劑篩選的靶標，并篩選到7,8
?
二羥基黃酮可以通過擾動細菌胞內的鐵穩態，減少胞內可用的鐵元素的含量，并且顯著降低鐵元素的轉運蛋白的表達量。
[0013]因此，優選的，上述應用中，7,8
?
二羥基黃酮用于減少沙門菌細胞內鐵元素的含量。
[0014]體外試驗表明，在有效濃度范圍內7,8
?
二羥基黃酮不具有抑菌能力，經7,8
?
二羥基黃酮與多粘菌素聯合可以顯著增強耐多粘菌素沙門菌對多粘菌素敏感性。
[0015]因此，本專利技術還提供了7,8
?
二羥基黃酮在制備耐多粘菌素沙門氏菌的增效劑中的應用。
[0016]優選的，上述應用中，所述7,8
?
二羥基黃酮的濃度為25mg/L，所述沙門氏菌的濃度為1
×
106CFU/mL，多粘菌素的濃度為16
?
32mg/L。
[0017]體內試驗中，通過構建小鼠沙門菌腸道感染模型，7,8
?
二羥基黃酮聯合多粘菌素腹腔注射，可以減少肝和脾的沙門菌菌量并顯著提高動物的生存率。
[0018]因此，本專利技術還提供了7,8
?
二羥基黃酮與多粘菌素聯用在制備抗沙門氏菌感染的藥物中的應用。
[0019]與現有技術相比，本專利技術具有以下有益效果：
[0020]本專利技術公開了7,8
?
二羥基黃酮作為鐵穩態擾動劑在制備多粘菌素增效劑中的應用。使用ELISA試劑盒檢測沙門菌胞內的鐵含量，并通過RT
?
PCR驗證與鐵攝取相關的基因的表達量變化，證實7,8
?
二羥基黃酮通過抑制與鐵攝取相關基因的表達進而擾亂沙門菌胞內的鐵穩態。7,8
?
二羥基黃酮作為鐵穩態擾動劑聯合多粘菌素對沙門菌在體外和體內實驗都具有很好的協同作用。相比傳統抗生素與抗生素聯合直接殺死沙門菌的作用機制，植物提取物7,8
?
二羥基黃酮可直接抑制沙門菌對鐵元素的利用，從而提高沙門菌對多粘菌素的敏感性，不容易誘導細菌耐藥性的產生，具有來源廣泛、價格低和治療效果好的特點。
附圖說明
[0021]圖1顯示7,8
?
二羥基黃酮擾動細菌包內的鐵穩態，并顯著降低鐵元素的相關轉運蛋白的表達量；
[0022]圖2顯示7,8
?
二羥基黃酮聯合多粘菌素對沙門菌的棋盤法熱圖和體外殺菌曲線；
[0023]圖3顯示7,8
?
二羥基黃酮與多粘菌素聯用顯著降低沙門菌感染小鼠的肝和脾的載菌量，并顯著提高小鼠的生存率。
具體實施方式
[0024]下面對本專利技術的具體實施方式作進一步說明。在此需要說明的是，對于這些實施方式的說明用于幫助理解本專利技術，但并不構成對本專利技術的限定。此外，下面所描述的本專利技術各個實施方式中所涉及的技術特征只要彼此之間未構成沖突就可以相互組合。
[0025]下述實施例以及實驗例中所使用的試驗方法如無特殊說明，均為常規方法；所使
用的材料、試劑等，如無特殊說明，為可從商業途徑得到的試劑和材料；所用的設備，如無特殊說明，均為常規實驗設備。
[0026]實施例1沙門氏菌鐵穩態擾動劑的篩選
[0027]以檢測細菌胞內總鐵含量的ELISA試劑盒來檢測受試化合物對沙門菌鐵穩態的影響，通過天然化合物與沙門菌共孵育后檢測沙門菌胞內的總鐵含量進行鐵穩態擾動劑的篩選，具體實驗過程如下：
[0028]1、將經高壓滅菌的pH值為5.8的LPM肉湯冷卻備用。沙門菌標準菌株ATCC14028為實驗室保存。
[0029]2、試驗前的準備工作：
[0030](1)配制實驗室已有的植物提取物，溶劑為二甲基亞砜，使藥物終濃度為5000mg/L，混勻后用濾膜過濾，備用。
[0031](2)將沙門菌標準菌株ATCC14028接種至LB瓊脂培養板上，培養至合適大小。
[0032]3、植物提取物影響沙門菌胞內鐵含量的檢測
[0033](1)受試沙門菌標準菌株ATCC14028接本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.7,8
?
二羥基黃酮作為沙門菌鐵穩態擾動劑的應用。2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述7,8
?
二羥基黃酮用于減少沙門菌細胞內鐵元素的含量。3.7,8
?
二羥基黃酮在制備耐多粘菌素沙門菌的增效劑中的應用。4.根據權利要求3所述的應用，其...

【專利技術屬性】
技術研發人員：孫堅，鐘子星，任昊，周雙，
申請(專利權)人：華南農業大學，
類型：發明
國別省市：